ICS65.120 CCSB46 中华人民共和国国家标准 GB/T21108—2025 代替GB/T21108—2007,GB/T8381.9—2005 饲料中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考的测定 高效液相色谱-串联质谱法 Determinationofchloramphenicol,thiamphenicolandflorfenicolinfeeds— Highperformanceliquidchromatography-tandemmassspectrometry 2025-08-01发布 2026-02-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替GB/T21108—2007《饲料中氯霉素的测定 高效液相色谱串联质谱法》和GB/T8381.9— 2005《饲料中氯霉素的测定 气相色谱法》,本文件以GB/T21108—2007为主,整合了GB/T8381.9— 2005的内容。本文件与GB/T21108—2007相比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下: a) 更改了适用范围、检出限和定量限(见第1章,GB/T21108—2007的第1章); b) 更改了原理(见第4章,GB/T21108—2007的第3章); c) 更改了试验步骤(见第8章,GB/T21108—2007的第7章)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归口。 本文件起草单位:广东省农业科学院农业质量标准与监测技术研究所、广东农科监测科技有限公 司、中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、海南威尔检测技术有限公司、广电计量检测集团 股份有限公司。 本文件主要起草人:王威利、王旭、林雪贤、邓诣群、万凯、樊霞、吴学贵、季天荣、索德成、刘晓露、 丁晨红、刘振妮、陈惠婷、陈智慧、王一晨、蓝梦哲、崔泽锋、李丽珍、林奕云、刘香香。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———GB/T8381.9—2005,2005年首次发布; ———GB/T21108—2007,2007年首次发布; ———本次为第一次修订。 ⅠGB/T21108—2025 饲料中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考的测定 高效液相色谱-串联质谱法 1 范围 本文件描述了饲料中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考的高效液相色谱-串联质谱测定方法。 本文件适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、添加剂预混合饲料、动物源性饲料原料和混合型饲 料添加剂中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考的测定。 本文件氯霉素的检出限为1μg/kg,定量限为2μg/kg,甲砜霉素和氟苯尼考的检出限为5μg/kg, 定量限为15μg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T20195 动物饲料 试样的制备 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 试样中的氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考在碱性条件下用乙酸乙酯提取,氮气吹干,用水复溶、正己烷 脱脂,液相色谱-串联质谱仪测定,内标法定量。 5 试剂或材料 除非另有规定,仅使用分析纯试剂。 5.1 水:GB/T6682,一级。 5.2 甲醇:色谱纯。 5.3 氨水。 5.4 乙酸乙酯。 5.5 正己烷。 5.6 标准储备溶液(1mg/mL):称取氯霉素(CAS号:56-75-7,纯度不低于98%)、甲砜霉素(CAS号: 15318-45-3,纯度不低于98%)和氟苯尼考(CAS号:73231-34-2,纯度不低于98%)标准品各10mg(精 确至0.01mg),分别置于10mL容量瓶中,用甲醇(5.2)溶解、定容,混匀。-18℃以下保存,有效期 6个月。或购买标准溶液。 1GB/T21108—2025 5.7 混合标准中间溶液:分别准确移取氯霉素标准储备溶液(5.6)0.2mL,甲砜霉素和氟苯尼考标准储 备溶液(5.6)各1mL于100mL容量瓶中,用甲醇(5.2)稀释制成氯霉素质量浓度为2μg/mL、甲砜霉 素和氟苯尼考质量浓度为10μg/mL的混合标准中间溶液。-18℃以下保存,有效期3个月。 5.8 混合标准工作溶液:准确移取1mL混合标准中间溶液(5.7)于10mL容量瓶中,用甲醇(5.2)稀 释、定容,混匀。2℃~8℃保存,有效期1个月。 5.9 内标标准储备溶液(1mg/mL):称取氘代氯霉素(d5-氯霉素)(CAS号:202480-68-0,纯度不低于 98%)、氘代甲砜霉素(d3-甲砜霉素)(CAS号:1217723-41-5,纯度不低于98%)和氘代氟苯尼考(d3-氟 苯尼考)(CAS号:1217619-10-7,纯度不低于98%)标准品各10mg(精确至0.01mg),分别置于10mL 容量瓶中,用甲醇(5.2)溶解、定容,混匀。-18℃以下保存,有效期6个月。或购买标准溶液。 5.10 内标中间溶液(100μg/mL):分别准确移取1mL内标标准储备溶液(5.9)于10mL容量瓶中,用 甲醇(5.2)稀释、定容,混匀。-18℃以下保存,有效期3个月。 5.11 内标工作溶液(5μg/mL):准确移取0.5mL内标中间溶液(5.10)于10mL容量瓶中,用甲醇 (5.2)稀释、定容,混匀,-18℃以下保存,有效期3个月。 5.12 混合标准系列溶液:准确移取适量混合标准工作溶液(5.8)和内标工作溶液(5.11),用水(5.1)稀 释配制成氯霉素质量浓度分别为0.2ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、 20ng/mL,甲砜霉素和氟苯尼考质量浓度分别为1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、 50ng/mL、100ng/mL,内标质量浓度为50ng/mL的混合标准系列溶液。临用现配。 5.13 微孔滤膜:0.22μm,水系。 6 仪器设备 6.1 液相色谱-串联质谱仪:配电喷雾离子源(ESI)。 6.2 分析天平:精度0.01g和0.01mg。 6.3 涡旋混合器。 6.4 离心机:转速不低于13000r/min。 6.5 氮吹仪。 6.6 往复式振荡器。 7 样品 按GB/T20195规定制备试样,至少200g,粉碎使其全部过0.425mm试验筛,混合均匀,装入密闭 容器中,备用。 8 试验步骤 8.1 提取 平行做两份试验。称取试样2g(精确至0.01g),置于50mL离心管中,准确加入100μL内标工作 溶液(5.11)、10mL水(5.1)、0.5mL氨水(5.3)、20mL(V1)乙酸乙酯(5.4),涡旋混合2min,200r/min 振荡提取30min,于10000r/min离心5min,备用。 8.2 净化 准确移取5mL(V2)备用液(8.1),于另一50mL离心管中,50℃氮气吹干,准确加入5mL(V3)水 2GB/T21108—2025 (5.1)和10mL正己烷(5.5),缓慢摇动脱脂,静置分层,取下层溶液约2mL,13000r/min离心5min, 微孔滤膜(5.13)过滤,待测。 8.3 测定 8.3.1 液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下: a) 色谱柱:C18柱,柱长100mm,内径2.1mm,粒径2.6μm,或性能相当者; b) 柱温:35℃; c) 流速:0.3mL/min; d) 进样量:5μL; e) 流动相:A相为水(5.1),B相为甲醇(5.2),梯度洗脱程序见表1。 表1 梯度洗脱程序 时间/min A相(体积分数)/% B相(体积分数)/% 0.0 80 20 1.0 80 20 3.0 25 75 5.0 25 75 5.1 80 20 8.0 80 20 8.3.2 质谱参考条件 质谱参考条件如下: a) 电离方式:电喷雾电离,负离子模式(ESI-); b) 检测方式:多反应监测(MRM); c) 毛细管电压:4.5kV; d) 离子源温度:400℃; e) 脱溶剂气温度:300℃; f) 脱溶剂气流速:10L/min。 多反应监测(MRM)定性离子对、定量离子对及碰撞能量见表2。 表2 多反应监测(MRM)定性离子对、定量离子对及碰撞能量 待测物名称定性离子对 m/z定量离子对 m/z碰撞能量 eV 氯霉素321>152 321>257321>15220 12 甲砜霉素354>185 354>290354>18521 13 3GB/T21108—2025 表2 多反应监测(MRM)定性离子对、定量离子对及碰撞能量(续) 待测物名称定性离子对 m/z定量离子对 m/z碰撞能量 eV 氟苯尼考356>336 356>185356>33611 20 氘代氯霉素(d5-氯霉素) 326>157 326>157 19 氘代甲砜霉素(d3-甲砜霉素) 357>293 357>293 12 氘代氟苯尼考(d3-氟苯尼考) 359>339 359>339 10 8.3.3 混合标准系列溶液和试样溶液测定 在仪器的最佳条件下,分别取混合标准系列溶液(5.12)和试样溶液(8.2)上机测定。混合标准溶液 中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和相应内标的定量离子色谱图见附录A。 8.3.4 定性 在相同试验条