SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4586—2016 出口食品中噻苯隆残留量的检测方法 高效液相色谱法 Determination of thidiazuron residues in food for export-HPLC method 2016-08-23发布 2017-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 创涂层应真伪 SN/T4586—2016 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中华人民共和国宁波出人境检验检疫 局、南京师范大学、上海交通大学。 本标准主要起草人：王传现、陈树兵、赵波、王芳、刘夏、宋青、宋业萍、黄帆、朱坚、邓晓军、杨慧琴、 王正武。 SN/T4586--2016 出口食品中噻苯隆残留量的检测方法 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了食品中噻苯隆残留量测定的高效液相色谱法。 本标准适用于出口猪肉、猪肝、脂肪、鸡蛋、牛奶、蜂蜜、苹果、大白菜、茶叶中噻苯隆残留量的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 动物源性试样、茶叶用乙睛提取，植物源性试样用1%乙酸乙提取，离心后，经正已烷脱脂后，用 C18固相萃取柱净化，过滤膜后用高效液相色谱仪测定，外标法定量。 4试剂和材料 除非另有规定，均使用分析纯试剂，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1乙睛：液相色谱级。 4.2甲醇：液相色谱级。 4.3 乙酸乙酯：液相色谱级。 4.4正已烷：液相色谱级。 4.5 乙酸。 4.6 氯化钠。 4.7 无水硫酸钠：用前在650℃灼烧4h，贮于干燥器中，冷却后备用。 4.8 乙睛饱和正已烷溶液：取100mL正已烷，加人10mL乙睛，充分摇匀后，静置待用。 4.9 乙酸乙腈溶液（990十10，体积比）：取990mL乙睛，加入10mL乙酸，摇匀备用。 4.10 乙睛水溶液（30十70，体积比）：取300mL乙晴，加人700mL水，摇匀备用。 4.11 标准品：噻苯隆（Thidiazuron，分子式CHsN:OS，CAS号51707-55-2），纯度大于或等于98%。 4.12 2标准贮备液：称取噻苯隆0.0100g用甲醇溶解并转至100mL容量瓶中定容至刻度，摇匀，配成 100uμg/mL标准贮备液待用。 4.13 标准工作溶液：实际使用时根据需要再用甲醇将标准溶液稀释成适用浓度的标准工作液，现用 现配。 4.14固相萃取小柱：Cis柱0.5g：6mL，或相当者。 1 SN/T4586—2016 4.15有机相滤膜：0.22μm。 5 仪器与设备 5.1 高效液相色谱仪，配紫外检测器。 5.2 分析天平：感量0.0001g和0.01g。 5.3 离心机：转速不低于4000r/min。 5.4 组织捣碎机。 5.5均质机。 5.6 超声波清洗器。 5.7 旋转蒸发仪。 5.8 固相萃取装置。 5.9 氮吹仪。 5.10 旋涡混匀器。 6样品制备与保存 6.1猪肉、猪肝、鸡蛋 取代表性样品部分约500g，将其切碎后（鸡蛋去壳），用均质机将样品加工成浆状，混勾，均分成两 份作为试样，分装入洁净的盛样袋内，密闭并标明标记，于一18℃以下冷冻保存。 6.2苹果和大白菜 取代表性样品约500g.将其可食部分先切碎，用均质机将样品加工成浆状，混匀，均分成两份作为 试样，分装人洁净的盛样袋内，密闭并标明标记，于一18℃以下冷冻保存。 6.3茶叶 取代表性样品约500g用粉粹机粉碎混匀，装人洁净的容器内，密封，标明标记，于0℃～4℃ 保存。 6.4牛奶、猪油等液体样品 取有代表性样品约500mL。混匀后装人洁净容器作为试样，密封并标明标记。于一18℃下冷冻 保存。 6.5蜂蜜 取有代表性样品约500。对于无结晶的样品将其揽拌均勾；对于有结晶析出的样品，在密闭情况 下，将样品置于不超过60℃的水浴中温热，待样品全部融化后搅拌均匀，迅速冷却至室温。在融化时必 须注意防止水分挥发。装人洁净容器作为试样，密封并标明标记。 注：在制样的操作过程中.防止样品污染或发生待测物含量的变化， 2 SN/T4586—2016 7测定步骤 7.1提取 7.1.1猪肉、猪肝、脂肪、牛奶、鸡蛋 称取试样2g（精确到0.01g）于50mL塑料离心管中，加人乙睛（4.1)20mL，漫泡10min，均质，以 4000r/min离心10min，取上清液。分别再用10mL、5mL乙睛（4.1）重复提取残渣两次，合并3次提 取液于50mL离心管中，加人2g氯化钠振荡，静置分层，去除水层，在得到的上清液中加人适量的无水 硫酸钠脱水后，然后加入10mL乙睛饱和正已烷溶液（4.8），充分振摇后，取乙腈层于45℃中旋转蒸发 至近1mL待净化。 7.1.2苹果、大白菜 称取试样2g（精确到0.01g）于50mL塑料离心管中加人乙酸乙睛溶液（4.9）20mL及2g氯化 钠，放置5min后均质，以4000r/min的转速离心10min后，加人适量无水硫酸钠脱水，取上层有机相 于45℃中旋转蒸发至近1mL待净化。 7.1.3蜂蜜 称取试样2g（精确到0.0lg）于15mL塑料离心管中.加人1mL水，于涡旋混合仪上快速混合 1min，加人乙腈（4.1）5mL涡旋提取，超声10min.4000.r/min离心10min，取上清液于15mL离心 管中，加入无水硫酸钠脱水后，于45℃水浴下氮吹浓缩至近1mL，待净化。 7.1.4茶叶 称取试样1g（精确到0.01g）于15mL塑料离心管中，加人乙睛（4.1)5mL，浸泡10min，涡旋提取 5min，以4000r/min离心提取10min，分别再用5mL、2mL乙睛（4.1）重复提取残渣两次，合并3次 提取液于15mL离心管中，再以4000r/min离心10min，过滤，取上清液于15mL离心管中，加人无 水硫酸钠脱水后，于45℃水浴下氮吹浓缩至近1mL，待净化。 7.2净化 将Cls小柱依次用5mL甲醇和5mL水活化后，抽干，用5mL乙酸乙酯预淋洗，将残渣用2mL乙 酸乙酯溶解并转人柱中，用10mL乙酸乙酯淋洗并收集淋出液，于40℃下氮吹至干，再用乙腈1mL定 容，经0.22μm滤膜过滤后，用于HPLC分析。 7.3测定 7.3.1色谱条件 色谱条件如下： a）色谱柱：VP-ODS柱（150mm×4.6mm，5μm），或相当者。 b) 流动相：乙腈：水（30十70）。 流速：1.0mL/min。 d) 进样量：20μL。 e） 柱温：35℃。 f) 检测波长：290nm。 3