SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2618—2010 桉树溃疡病菌检疫鉴定方法 Inspection and identification of Cryphonectria cubensis (Bruner)Hodges 行业标准信息服务平台 2010-05-27发布 2010-12-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2618—2010 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院 本标准主要起草人：严进、常雪艳、张秋娥。 行业标准信息服务平台 I SN/T 2618—2010 按树溃疡病菌检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了植物检疫中按树溃疡病菌Cryphonectriacubensis（Bruner）Hodges的检疫鉴定 方法。 本标准适用于对来自疫区（参见附录A第A.1章）的所有桉属LEucalyptus」和按树溃疡病菌其他 寄主的原木、木制品（含木质包装）和苗木的检疫鉴定。 2原理 引起桉树溃疡病的病原为古巴隐丛赤壳Cryphonectriacubensis（参见附录A第A.2章），该菌的 寄主范围（参见附录A第A.3章）、植株症状（参见附录A第A.4章）、侵染传播（参见附录A第A.5 章）和病原形态（参见附录A第A，6章）是该菌检疫鉴定方法的依据。与Cryphonectriaspp.形态特征 的区别主要依赖于子座的区别。子座特征可以将树溃疡病菌同Cryphonectria的模式种C.gyrosa (Berk.&Broome)Sacc.以及该属其他种如C.parasitica、C.radicalis、C.macrospora和C.nitschkei 区分开。树溃疡病菌与桉树上其他3种病原真菌的形态比较参见附录A第A.7章。 3试剂及主要仪器设备 3.1培养基及试剂 麦芽提取粉琼脂培养基（MaltExtractAgar，MEA，20g/L，Biolab公司）、燕麦琼脂培养基 （OatmealAgar，OA：燕麦粉30g，蒸馏水800L，溶化成汁加人20g/LBiolab公司琼脂中）、25%乳酸、 3.2仪器与设备 服务平台 立体显微镜、生物显微镜（具油镜和测微尺）、电子分析天平（感量0.001g）、普通天平（感量0.1g）、 超净工作台、生物培养箱、高压灭菌器。 4检疫与鉴定 4.1症状检查 检查树皮和木质部之间是否有溃疡层和黑色的圆锥状分生孢子器。将抽取的原木、木制品或苗木 将有症状样品带回实验室作进一步检验。 4.2室内检验 4.2.1样本形态鉴定 观察并记录子实体（尤其是子座）的形态特征，从树皮上采集子实体，然后在水中煮沸1min，以再 1 SN/T2618—2010 10个有性阶段子座的测距。拍摄并保存数码照片。 4.2.2分离培养 如果无法直接采集到病原菌的子实体，则采用MEA（20g/L)培养基，用于病原菌的分离、培养性状 测定，菌种保存在OA培养基。在可疑发病的暗褐色溃疡处取一块组织，切成4mmX4mm的小片，用 1.25%次氯酸钠表面消毒5min，无菌水冲洗3遍，放在直径9cm的平板培养基上，每血放4片～6片， 征，计算菌落的生长速度。如菌落、菌丝和分生孢子的形态特征与C.cubensis相似，继续培养观察平板 培养基上是否产生子囊壳等。有文献报道认为，桉树溃疡病菌在培养基上培养时，很少形成孢子，特别 是接种后，不产生有性型。 4.3鉴定标准 4.3.1营养体形态 90mm直径平板最少5d。 4.3.2无性繁殖器官形态 分生孢子器，表生，暗褐至黑色，梨形至球形，颈部渐狭L参见图A.2a）。分生孢子器的基部高出树 皮表面130μm~740μm，直径100μm~950μm，颈部长230μm，宽90μm~240μm。分生孢子梗参见 图A.2b)~c)］透明，总长（12)13.5μm~19.0（24.5）μm。分生孢子［参见图A.2d)］透明，单细胞，卵 形,[3.5μm~4.0(4.5) μmJX(1.0 μm~1.5μm)。 4.3.3有性繁殖器官形态 子囊果[参见图A.2e)半埋生于树皮中，暗褐至黑色，有时微爆裂，有限生长。子囊座组织橙色，子 囊座高出树皮120μm~230μm，直径280μm~490m每个子座1个~9个子囊壳，子囊壳［参见图 A.2f)黑色，球形，直径170μm～250μm，壁厚17μm~22μm，子囊壳的颈部黑色，圆柱状，宽80μm~ 子囊［参见图A.2g）1内含8个孢子排成2列。单囊壁，无柄，拟纺锤形至椭圆形，（25μm～34um）× （4.0μm～6.5μm）。子囊孢子［参见图A.2h)]透明，1个分隔，拟纺锤形至卵形，顶端渐缩，[（5.5） 6.5μm~7.5(8.0)μm×[2.0 μm~2.5(3.0)μm]。 5结果判定 如形态鉴定结果与4.2.2、4.2.3相符合，即可确定分离物为Cryphonectriacubensis（Bruner)Hodges。 6菌种保存 分离获得的按树溃疡病菌种，应转人燕麦琼脂试管斜面上，置于15℃黑暗条件下保存至少12个 月，以备复验、谈判和仲裁。 2