ICS ,11.100 YY C 44 中华人民共和国医药行业标准 YY/T1728—2021/ISO16256:2012 临床实验室检测和体外诊断系统 感染性疾病相关酵母样真菌抗菌剂的 体外活性检测参考方法 Clinical laboratory testing and in vitro diagnostic test systems- Reference method for testing the in vitro activity of antimicrobial agents against yeast fungi involved in infectious diseases (ISO16256:2012,IDT) 2021-03-09发布 2022-04-01实施 国家药品监督管理局 发布 YY/T1728—2021/ISO16256:2012 目 次 前言 引言 1范围 术语和定义 试验程序 3.1 概述 3.2 培养基 3.3 抗真菌剂 3.4 微量稀释盘的储存 3.5 接种菌液的制备 3.6 微量稀释盘的接种 3.7 微量稀释盘的孵育 3.8 MIC结果读取 3.9 MIC值的解释 4质量控制(QC) 附录A（资料性附录）RPMI-1640培养基 附录B（资料性附录）0.5麦氏硫酸钡浊度标准 16 附录C（资料性附录）肉眼MIC判读程序MIC解释的可接受判读时间 17 参考文献 YY/T1728—2021/IS016256:2012 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 感染性疾病相关 酵母样真菌抗菌剂的体外活性检测参考方法》。 本标准做了下列编辑性修改： 为便于理解条款，增加了部分注释。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家药品监督管理局提出。 本标准由全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会（SAC/TC136)归口。 本标准主要起草单位：北京市医疗器械检验所、山东省医疗器械产品质量检验中心、赛默飞世尔科 技（中国）有限公司。 本标准主要起章人：毕春雷、杨忠、主文庆、秦冬立、洪梅。 I YY/T1728—2021/ISO16256:2012 引言 抗菌剂体外敏感性试验通常是针对可能导致疾病的微生物，尤其是那些被认为对频繁使用的抗菌 剂可能表现出获得性耐药性的微生物种属。该试验在耐药性监测、敏感性的流行病学研究以及新抗菌 剂与现有抗菌剂之间的比较等方面也很重要。 稀释法常被用来测定抗菌剂的最小抑菌浓度（MIC，minimuminhibitoryconcentration），并代表抗 真菌剂敏感性试验的参考方法。MIC法通常用于耐药性监测、为研究和注册目的新抗菌剂的比较性研 究、为常规试验产生不明确结果的微生物确立敏感性、常规试验可能不可靠的微生物的试验以及临床需 要定量结果的情况。在稀释法测试中，通过检测微生物在含有系列稀释浓度抗菌剂的一系列琼脂平板 （琼脂稀释法）上或肉汤（肉汤稀释法)中的能否产生可见生长的情况来确定。 抗菌剂的最小抑菌浓度（MIC值）是指在规定的体外试验条件下，在规定的时间内，能抑制某特定 微生物出现肉眼可见或光学可测量生长的抗菌剂的最低浓度（以mg/L为单位）。MIC值指导临床医 师了解微生物对抗菌剂的敏感性，从而帮助他们做出治疗决策。由于所用方法可能影响试验结果，为了 确保实验室内和室间结果的重现性，实验室需要进行严格的质量控制及标准化。通常认为肉汤稀释法 有重现性的。 肉汤稀释法是一种向含浓度递增（通常是两倍）的抗菌剂的相同体积肉汤的一系列容器中接种已知 数量微生物的技术。 肉汤微量稀释法指的是在微量稀释盘上进行的肉汤稀释试验。 本标准所描述的参考方法适用于酵母样真菌的纯培养物的检测。本标准所描述的肉汤微量稀释法 与临床和实验室标准化研究院(CLSI)[1]以及欧洲抗菌剂敏感性试验委员会（EUCAST)[2]所用的方法 实质上是等同的。这些方法显示给出的氟康唑MIC实际上也是相同的，如果不是完全一致，最大差异 在2mg/L内3]。用其他各种抗真菌剂所做的研究已经列人计划或进行中。希望使用本标准来进行新 的抗真菌剂研究，或作为与诊断器械给出MIC结果相比较的参考方法的实验室，宜基于确定MIC读数 结果是通过肉眼检查（CLSI方法），还是使用光度法（EUCAST方法）来选择使用哪个程序选项，在任 何一种情况下所选程序的细节必须严格遵守。 I YY/T1728—2021/IS016256:2012 临床实验室检测和体外诊断系统 感染性疾病相关酵母样真菌抗菌剂的 体外活性检测参考方法 警告一一使用本标准可能涉及危险性材料、操作和设备。本标准无意陈述使用本标准所涉及的所 有安全问题。使用本标准前，使用者有责任建立适当的安全和健康措施并确定法规限制的适用性。 1范围 菌。这里描述的参考方法还未用于双相型真菌的酵母型菌研究，如皮炎芽生菌和/或荚膜组织胞浆菌荚 膜变种。另外在检测丝状真菌（霉菌)标准化中涉及几个未在当前程序阑述的其他问题。丝状真菌肉汤 稀释法抗真菌剂药敏试验参考方法已经制定。现在可使用的文件为CLSIM38和EUCASTE.DEF 9.1[4-8] 。 本标准描述的肉汤微量稀释参考法可通过两种途径之一实现，第一种途径通过肉眼确定MIC (CLSI方法），第二种途径通过光度法确定MIC（EUCAST方法）[2)。MIC反映了在规定试验条件下 药物的活性，并在考虑到其他因素下对临床管理目的进行解释，如药物的药理学或抗真菌耐药机制。 （SN），I），S），（S）I （R）。另外MIC分布可用于确定野生型或非野生型真菌群落。MIC值的临床解释不在本标准的范围。 对应于CLSI方法和EUCAST衍生方法的解释性分类折点可查询相应机构提供的最新解释表[2.9]。推 荐常规敏感性试验方法或诊断检验器械与此参考方法进行比较，以保证验证或注册时结果的可比性和 可靠性。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 抗真菌剂antifungalagent 一类可以抑制或杀死真菌，可用于抗感染治疗的生物来源的、半合成的或合成的物质。 注：消毒剂、灭菌剂和防腐剂不在此定义范围内。 2.2 抗真菌剂-属性 antifungal agents-properties 2.2.1 效价potency 受试物活性部分所占比例，通过生物分析方法与相同物质的参考品比较而确定。 注：效价可表达为受试物中组分以毫克每克（mg/g)的质量分数，或以国际单位每克（IU/g)的活性含量，或以体积 分数或质量分数的百分含量或摩尔数每升的物质的量浓度。 2.2.2 浓度 concentration 抗真菌剂在规定体积液体中的量。 1 YY/T1728—2021/ISO16256:2012 注1：该浓度以毫克每升（mg/L)来表示。 注2：虽然mg/L=μg/mL，但不推荐使用μg/mL作为单位。 2.3 原液stocksolutions 用于进一步稀释的初始溶液。 2.4 最小抑菌浓度 minimuminhibitory concentration;MIC 在规定的体外试验条件下、在规定的时间内，能降低一定数量生长的最低浓度。 注：最小抑菌浓度（MIC）以mg/L表示。 2.5 折点breakpoints;BP 用于界定真菌临床类别是“敏感”“剂量依赖性敏感”“中介”“非敏感”和“耐药”的特定的MIC值。 注：关于当前解释性折点值，可参考制定本参考方法的机构的最新出版物（如CLSI和EUCAST)[1.2.9]。 2.5.1 肉眼判读法 2.5.1.1 敏感susceptible;S 真菌菌株在体外可被某浓度抗真菌剂抑制，该抗真菌剂的浓度治疗成功的可能性很高。 注1：真菌菌株在规定的表型测试系统中基于适当的折点被归类为敏感。 注2：该折点在特定情况下（例如药物常规使用剂量的改变、新的耐药机制的出现）可有改变。 2.5.1.2 剂量依赖性敏感 susceptibledose-dependent;S-DD 真菌菌株在体外可被某浓度抗真菌剂抑制，通过使用超常规剂量，该抗真菌剂的剂量方案可以安全 使用情况下，在体内达到该浓度时可以获得疗效。 注1：真菌菌株在规定的表型测试系统中基于适当的折点被归类为剂量依赖性敏感。 注2：此类别的敏感指的是受试菌株引起的感染能够通过该药物在患处的生理富集或可以使用更高剂量药物时，可 获得适当治疗。 注3：该折点在特定情况下（例如药物常规使用剂量的改变、新的耐药机制的出现)可有改变。 2.5.1.3 中介intermediate;I 微生物的抗菌剂活性水平疗效不明确。 注：这意味着由受试菌株导致的感染有可能通过该抗菌剂在患处的生理富集或使用更高剂量的该抗菌剂来获得适 当的治疗，该级别还提供了一个“缓冲区”，从而避免了小的、不可控的技术因素所导致的重大的结果解释偏差。 2.5.1.4 非敏感 nonsusceptible;NS 用于目前只有敏感性解释类别，但无剂量依赖性敏感、中介，或耐药解释类别（即只有敏感性解释类 别)的酵母样真菌的类别。 注：此类别通常用于还没有退到耐药分离株的新抗真菌剂。 2.5.1.5 时药 resistance;R 真菌菌株在体外可被某浓度抗真菌剂抑制，该抗真菌剂的浓度很可能治疗失败。 注1：真菌菌株在规定的表型测试系统中基于适当的折点被判定为耐药。 注2：该折点在特定情况下（例如药物常规使用剂量的改变、新的耐药机制的出现)可有改变。 2 YY/T1728—2021/ISO16256:2012 2.5.2 光度判