ICS_11.080.99 YY C 47 中华人民共和国医药行业标准 YY/T1479—2016 98df88 2017.10.24 薄膜过滤器的无菌试验方法 Sterility test method for membrane filters 2016-07-29发布 2017-06-01实施 国家食品药品监督管理总局 发布 YY/T1479—2016 /98df88 2017.10.24 前言 范围 1 2 规范性引用文件 术语和定义 3 试验条件 4 5 无菌试验方法 培养和观察 7 结果判断 附录A（资料性附录） 培养基制备及培养基的检测 YY/T1479—2016 前 98df88 2017.10.24 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家食品药品监督管理总局提出。 本标准由全国消毒技术与设备标准化技术委员会（SAC/TC200)归口。 本标准起草单位：杭州泰林生物技术设备有限公司、国家食品药品监督管理局广州医疗器械质量监 督检验中心。 本标准主要起草人：赵振波、黄秀莲、高凯斐、夏信群、苗晓琳。 I YY/T1479—2016 薄膜过滤器的无菌试验方法 98df88 1范围 2017.10.24 本标准规定了在医疗产品生产、检验或其他处理过程中使用的以及作为最终产品的无菌薄膜过滤 器的无菌试验方法。 注：滤膜折叠扭曲的或部分体积过大的薄膜过滤器不适用本方法。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T19973.2—2005 医用器械的灭菌微生物学方法第2部分：确认灭菌过程的无菌试验 (ISO11737-2:1995,IDT) YY/T0567.1—2013 医疗保健产品的无菌加工第1部分：通用要求（ISO13408-1：2008IDT） 中华人民共和国药典 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 薄膜过滤器membranefilter 用于液体除杂，除菌，微生物限度检查或无菌检查等用途的膜片，以及其他预装滤膜或可安装滤膜 的过滤装置。 3.2 无菌试验sterilitytest 在给定的培养条件下，用于确定产品单元上是否有存活微生物所进行的试验。 4试验条件 4.1水 如无特别说明，涉及到的水应符合《中华人民共和国药典》中纯化水的相关规定。 4.2培养基 培养基的制备方法及培养基的检查参见附录A。 4.3薄膜过滤器无菌试验的条件 无菌试验的条件应包括以下方面： a) 在受控环境中进行试验； 例如：设置于B级洁净区的A级单向流空气区域内、无菌隔离系统等；YY/T0567.1一2013第 1 YY/T1479—2016 6章给出了关于有受控环境的详细信息； b）对试验中所使用的设备、材料进行灭菌； c）将物品（含试验器具、培养基和供试品）在无菌条件下引进试验区，包括： 1）在将物品引人试验区之前对包装外部进行生物去污/净化； 2）对试验区内的环境进行生物去污/净化。 e）将试验所需的操作减至最少； f）试验人员应进行关于无菌技术的培训，具有相应的资质。 5无菌试验方法 5.1取样量 薄膜过滤器生产者根据批产量每批随机抽检一定量的样品进行无菌试验。当批产量小于等于 100件时，抽取批产量的10%或者4件中的较多者；大于100件小于等于500件时，抽取10件；大于 500抽取批产量的2%或者20件中的较少者。 每套过滤器需接种两种培养基，如无法同时接种两种培养基，取样量需加倍。 注：薄膜过滤器使用者可参考上述取样量对每批进货产品进行抽样检查。 5.2洗脱液及制备方法 可在下列两种溶液中任选一种作为洗脱液： a)F pH7.0氟化钠蛋白陈缓冲液：取磷酸二氢钾3.56g，无水磷酸氢二钠5.77g，氯化钠4.30g，蛋 白陈1.00g，加水1000mL，微温溶解，滤清，分装，灭菌。 b）0.9%氯化钠溶液：取氯化钠9g，加水至1000mL，搅拌溶解，分装后应采用验证合格的灭菌程 序灭菌。 5.3无菌试验方法的评价 薄膜过滤器的无菌试验方法评价，应避免产生假阳性或假阴性。GB/T19973.2一2005第7章 适用。 5.4试验方法的选择 根据薄膜过滤器的结构特征，进行无菌试验一般有两种方法： a）直接接种法：将薄膜过滤器直接浸人培养基或在产品中加人培养基，然后进行培养； b) 洗脱法：从受测薄膜过滤器上洗脱微生物，洗脱液经另一套薄膜过滤器处理后将滤膜接种，然 后进行培养。 使用者应优先选择直接接种法，在产品不适用直接接种法时可根据产品特点选择洗脱法或联合使 用两种方法。 5.5直接接种法 将滤膜或体积较小的薄膜过滤器直接接种至一个（或多个）盛有培养基的容器容中进行培养。对具 有培养基容纳和培养功能的薄膜过滤器（如《中华人民共和国药典》中附录：无菌检查法收载的封闭式薄 膜过滤器）将适量的培养基直接转移至薄膜过滤器中进行培养。应使用足够量的培养基以实现培养基 与薄膜过滤器的充分接触。此外，应考虑以下方面： a）薄膜过滤器结构特征应有利于和培养基充分接触，反之则应考虑在浸入培养基之前对薄膜过 2 YY/T1479—2016 滤器进行分解和/或其他操作，但相关操作应注意避免污染； b) 浸人培养基之后进行搅动或晃动以排除气泡等不利培养基接触的因素； c) 某些薄膜过滤器不利于培养基润湿（如：滤膜或滤杯表面具有僧水特性），可在培养基中加人已 被证明没有抑微生物或杀微生物作用的表面活性剂以更好地润湿接触表面； d）当薄膜过滤器中含有导致假阴性的抑制物质并进入培养基，优先采用培养基稀释法，也可采用 中和剂法，如以上方法均无效，可采用洗脱法； e）对含有管路的薄膜过滤器，其管路部分也应进行无菌试验，可使用培养基充满液路，并最终收 集至容器中培养。 5.6洗脱法 对于体积较大和/或结构复杂而无法使用直接接种法的薄膜过滤器或其组件，可使用洗脱法。每个 滤器及其组件用50mL～100mL洗脱液分别冲洗容器内壁、滤膜、管路，至少一次。洗脱液收集于无菌 容器中，通过膜过滤法处理。 如果薄膜过滤器中可能存在对微生物的促生长产生不良影响的条件，如其特殊的物理性质或释放 化学物质，推荐使用洗脱法。将洗脱液过滤，富集洗脱液中的微生物，并对消除或降低（如果无法消除） 其所产生的影响是一个有效的方法，但该方法应进行验证。 如果要采用洗脱法，需考虑的因素应包括： a）适当洗脱液的选择； b）洗脱技术获得薄膜过滤器及其组件中含有微生物的能力； c) 滤膜的过滤/阻隔作用对滤膜上下游污染微生物洗脱效果的影响； d）洗脱技术对微生物活性的影响； e) 通过膜过滤方法将洗脱液中的微生物从洗脱液中富集，应额外选择一套有效的过滤系统； 过滤系统参考《中华人民共和国药典》要求，借助于真空或压力使洗脱液通过孔径不大于 0.45μm的封闭式无菌薄膜过滤器，使洗脱液通过薄膜过滤器。此后，封闭过滤器液体出口并 将培养基在无菌条件下移人过滤装置。 5.7阳性对照 薄膜过滤器无菌试验均应做阳性对照。平行制备一份装有硫乙醇酸盐流体培养基的培养容器，然 后接种小于100CFU（菌落形成单位）的金黄色葡萄球菌至该容器中，菌液制备参见附录A中A.2.2.2。 如采用洗脱法，可使用三联薄膜过滤器处理洗脱液，并在其中一张滤膜的培养容器内添加阳性对照 菌，但取样量需相应增加至原来的1.5倍。 如联合使用两种方法，每种方法处理每个部件的培养容器均需独立做阳性对照。 阳性对照30℃～35℃培养48h～72h应生长良好。 注：如薄膜过滤器含有可抑制特定微生物生长的成分，阳性对照菌和对应培养基需依据《中华人民共和国药典》的 相关要求进行选择。 5.8阴性对照 膜过滤器无菌试验均应做阴性对照，如采用直接接种法，每种培养基额外各制备一份不含薄膜过滤 器或其组件的培养容器，并在试验后同法培养；如采用洗脱法，则用薄膜过滤法处理所使用的洗脱液并 培养；如联合使用两种方法，每种处理方法均需按上述方法做阴性对照。 阴性对照培养14d应无菌生长。 5.9试验操作 在无菌试验过程中应采用无菌技术操作。 YY/T1479—2016 6培养和观察 将上述接种薄膜过滤器后的硫乙醇酸盐流体培养基培养容器30℃～35℃培养14d，胰酪大豆陈 液体培养基培养容器20℃～25℃培养14d；培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。如在培养过 程中，培养基出现浑浊，培养14d，不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量转种至同种新 鲜培养基中，培养3d，观察接种的同种新鲜培养基是否再出现浑浊；或取培养液涂片，染色，镜检，判断 是否有菌。 7结果判断 阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。否则，试验无效。若各培养容器均澄清，或虽 显浑浊但经确证无菌生长，判薄膜过滤器符合规定；若培养容器中任何一份浑浊并确证有菌生长，判薄 膜过滤器不符合规定，除非能充分证明试验结果无效，即生长的微生物非薄膜过滤器所含。当符合下列 至少一个条件时方可判试验结果无效： a）无菌试验所用的设备及环境的微生物监控结果不符合要求； b）回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的因素； c）生长的微生物经鉴定后，确证是因实验中所使用的物品和（或）操作技术不当引起的。 试验若经确认无效，应重试。重试时，重新取同量薄膜过滤器，依法检查，若无菌生长，判薄膜过滤 器符合规定；若有菌生长，判薄膜过滤器不符合规定。 判该培养基灵敏度检查符合规