ICS 11.100 YY C 44 中华人民共和国医药行业标准 YY/T1462—2016 甲型H1N1流感病毒RNA检测试剂盒 (荧光PCR法） InfluenzaAvirusH1N1pdmO9RNAdetectionkit(fluorescentPCR) 2016-01-26发布 2017-01-01实施 国家食品药品监督管理总局 发布 YY/T1462—2016 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家食品药品监督管理总局提出。 本标准由全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会（SAC/TC136)归口。 本标准起草单位：中国食品药品检定研究院、中山大学达安基因股份有限公司、北京金豪制药股份 有限公司。 本标准主要起草人：石大伟、沈舒、张春涛、高旭年、张勇。 - YY/T1462—2016 甲型H1N1流感病毒RNA检测试剂盒 （荧光PCR法） 1范围 本标准规定了甲型H1N1流感病毒RNA检测试剂盒的术语和定义、要求、试验方法、标识、标签 使用说明书、包装、运输和贮存， 本标准适用于以荧光PCR法为原理，定性检测人鼻、咽拭子或其他呼吸道分泌物样本中甲型 H1N1流感病毒RNA的诊断试剂盒。 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T191包装储运图示标志 YY/T0466.1医疗器械用于医疗器械标签、标记和提供信息的符号第1部分：通用要求 3术语和定义 以下术语和定义适用于本文件。 3.1 甲型H1N1流感病毒influenzaAvirusH1N1pdm09 本病毒属于正粘病毒科，甲型流行性感冒病毒属，为单股负链RNA病毒，基因组约为13.6kb，由 大小不等的8个独立片段组成。该病毒导致2009年～2010年全球范围的流感大流行，是含有猪流感、 禽流感和人流感三种流感病毒基因片断的新型重配病毒，与2009年之前流行的季节性甲型流感病毒 比，其抗原性发生较大改变。 注：本病毒在2009年流感大流行后呈季节性流行，与其他甲型II3亚型流感病毒、乙型流感病毒在人群中共同 流行。 3.2 荧光PCR法 fluorescentPCR 又称实时荧光PCR。在PCR过程中利用荧光染料释放的荧光信号的变化直接反映出PCR扩增产 物量的变化，荧光信号变量与扩增产物量变成正比，并通过对荧光的采集和分析以达到对原始模板量进 行分析的PCR ［YY/T1182—2010,定义3.4］ 4要求 4.1外观 4.1.1包装外观清洁、无泄漏、无破损；标志、标签字迹清楚 4.1.2试剂盒应组分完全，应包括所需的引物、探针、反应液以及内部对照物（内标)和外部对照物等。 1 YY/T1462—2016 4.2 2阳性参考品符合率 用国家阳性参考品或经标化的阳性参考品进行检测，结果应为甲型H1N1流感病毒RNA阳性。 注：阳性参考品宜包含不同甲型II1N1流感病毒株的样本。 4.3 3阴性参考品符合率 用国家阴性参考品或经标化的阴性参考品进行检测，结果应为甲型H1N1流感病毒RNA阴性。 注：阴性参考品宜包含甲型II1N1外的其他亚型流感病毒及能引起相似呼吸道症状的其他病原体等 4.4最低检测限 用国家最低检测限参考品或经标化的最低检测限参考品进行检测，结果应符合相应要求。 4.5 重复性 用国家重复性参考品或经标化的重复性参考品进行检测，结果应均为甲型H1N1流感病毒RNA 阳性且Cl值的变异系数（CV，%）应不大于5%， 4.6稳定性 可对效期稳定性和加速稳定性进行验证。 4.6.1效期稳定性 生产企业应规定产品的有效期。取到效期后一定时间内的产品，检验外观、阳性参考品符合率、阴 性参考品符合率、最低检测限和重复性，结果应符合4.1、4.2、4.3、4.4、4.5的要求。 4.6.2加速稳定性试验 为了考核试剂盒在实验、运输过程等条件下的稳定性，在规定条件下处理试剂盒，检验外观、阳性参 考品符合率、阴性参考品符合率、最低检测限和重复性，结果应符合4.1、4.2、4.3、4.4、4.5的要求 注1：加速稳定性试验不能用于推导产品有效期，除非是采用基于大量的稳定性研究数据建立的推导公式。 注2：一般地，效期为1年时选择不超过1个月的产品，效期为半年时选择不超过半个月的产品，以此类推。但如超 过规定时间，产品符合要求时也可以接受。 注3：根据产品特性可选择4.6.1、4.6.2方法的任意组合，但所选用方法宜能验证产品的稳定性，以保证在效期内产 品性能符合标准要求。 5试验方法 5.1外观 在自然光下以正常视力或矫正视力目视检查，结果应符合4.1的要求。 5.2 阳性参考品符合率 用国家阳性参考品或经标化的阳性参考品进行检测，接按产品说明书进行操作，结果应符合4.2的要求。 5.3阴性参考品符合率 用国家阴性参考品或经标化的阴性参考品进行检测，按产品说明书进行操作，结果应符合4.3的要求。 2 YY/T1462—2016 5.4最低检测限 用国家最低检测限参考品或经标化的最低检测限参考品进行检测，按产品说明书进行操作，结果应 符合4.4的要求。 5.5重复性 使用同一批次的产品，按产品说明书对国家重复性参考品或经标化的重复性参考品重复进行10次 独立的核酸提取和检测，计算Cl值的变异系数，结果应符合4.5的要求。 按式(1)计算变异系数： ()2 (1) n 式中： 标准差； 第i个样本靶通道检测结果的值循环数（Cl值）； C的平均数； 重复检测的次数。 n ..(2) 式中： 第i个样本靶通道检测结果的Ci值； ；的平均数； 重复检测的次数。 n CV - X100% .(3) 式中： CV -变异系数（%）； 3的平均数； 标准差。 5.6稳定性 可选用以下方法进行验证： a） 效期稳定性： 取到效期后一定时间内的产品，按产品说明书进行操作，结果应符合4.6.1的要求。 b) 加速稳定性试验： 可选择下列条件中的一项或两项处理试剂盒，按产品说明书进行操作，结果应符合4.6.2的要求。 1）将试剂盒在2℃～8℃下放置7d； 将试剂盒置于室温，待可冻结组分完全融化后，再放入储存条件下完全冻结，反复5次。 6 标识、标签和使用说明书 6.1 试剂盒外包装标识、标签 所使用的符号应满足YY/T0466.1的要求，至少应包含如下内容： 3