ICS 11.100.10 YY CCSC44 中华人民共和国医药行业标准 YY/T1204—2021 代替YY/T1204—2013 总胆汁酸测定试剂盒（酶循环法） Total bile acids assay kit (enzyme cycle method) 2022-12-01实施 2021-12-06发布 国家药品监督管理局 发布 YY/T1204—2021 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替YY/T1204——2013《总胆汁酸测定试剂盒（酶循环法）》，与YY/T1204—2013相比，主 要技术变化如下： 增加了规范性引用文件GB/T29791.2（见第2章）； 更改了测定原理（见第4章，2013年版的第3章）； 更改了5.2的项目名称，将“装量”修改为“净含量”（见5.2，2013年版的4.2)； 更改了要求及相应检测方法（见5.3~5.8和6.36.8，2013年版的4.3~4.8和5.8)； 更改了标签和使用说明书的规定（见第7章，2013年版的第6章）； 更改了包装、运输和贮存的规定（见第8章，2013年版的第7章）。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由国家药品监督管理局提出。 本文件由全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会（SAC/TC136)归口。 本文件起草单位：中国食品药品检定研究院、河南省医疗器械检验所、上海市临床检验中心、美康生 物科技股份有限公司、迪瑞医疗科技股份有限公司、北京利德曼生化股份有限公司、江西特康科技有限 本文件主要起草人：于婷、张娟丽、王华梁、欧元祝、沈敏、常淑芹、任轶昆、欧阳敏勇、陈汉艳、邹艳芳、 李伟甲、黄杰、曲守方、孙楠。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为： 2013年首次发布为YY/T1204-2013； 一本次为第一次修订。 YY/T1204—2021 总胆汁酸测定试剂盒（酶循环法） 1范围 本文件规定了总胆汁酸测定试剂盒（酶循环法）的测定原理、要求、试验方法、标签和使用说明书、包 装、运输和贮存。 本文件适用于酶循环法对人体血清或血浆中的总胆汁酸进行定量测定的试剂盒（以下简称试剂 盒），包括手工和半自动、全自动生化分析仪上使用的试剂。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 本文件。 GB/T191 包装储运图示标志 GB/T29791.2体外诊断医疗器械 成制造商提供的信息（标示）第2部分：专业用体外诊断试剂 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4测定原理 胆汁酸被3α-羟基类固醇脱氢酶（3α-HSD)及硫代氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（Thio-NAD+）特 异性地氧化，生成3α-酮类固醇（3α-KS)及硫代还原型烟酰胺腺嘌岭二核苷酸（Thio-NADH)。生成的 3α-KS在3α-HSD及还原型辅酶I(NADH)存在下，又生成胆汁酸和氧化型辅酶I(NAD+）。如此循环 往复产生大量Thio-NADH，Thio-NADH在405nm波长附近有吸收峰，在一定的反应时间内，其吸光 度变化与总胆汁酸浓度呈正比，根据校准品吸光度的变化率，从而计算总胆汁酸含量。 5要求 5.1外观 制造商应根据产品的包装特点规定适当的外观要求，一般应有试剂盒各组分组成、性状；内外包装、 标签清晰等的要求。 5.2净含量 液体试剂的净含量应不少于标示值。 5.3试剂空白 5.3.1试剂空白吸光度 在制造商规定的测试主波长（推荐405nm）、光径1.0cm的条件下，空白吸光度应不大于0.80。 1 YY/T1204—2021 6试验方法 6.1外观 目测检查，判定结果是否符合5.1的要求。 6.2净含量 采用通用量具测量，判定结果是否符合5.2的要求。 6.3试剂空白 6.3.1试剂空白吸光度 测定空白样本，在制造商规定的测试主波长（推荐405nm）、光径1.0cm以及37℃条件下，记录测 试启动时的吸光度值（A，），扣除反应的非线性段或制造商规定的测试完成后的吸光度值（A2），A2的测 试结果即为试剂空白吸光度测定值，判定结果是否符合5.3.1的要求。 注：空白样本可为纯水样本、生理盐水、零校准液等。 6.3.2试剂空白吸光度变化率 的要求。 6.4线性 用接近线性区间上限的高浓度样本和接近线性区间下限的低浓度样本混合成至少5个稀释浓度 ()的样本后，进行检测，每个稀释浓度样本测定3次，分别求出测定结果的均值（y）。以稀释浓度 (，)为自变量，以测定结果均值（y，)为因变量求出线性回归方程，计算线性回归的相关系数（r）；将 代人线性回归方程，计算y；与相应估计值的相对偏差或绝对偏差，判定结果是否符合5.4的要求。 6.5准确度 可选用以下方法之一进行验证（如适用，优先采用相对偏差的方法）： a）相对偏差 检测总胆汁酸有证参考物质，重复测定3次，测定结果记为（X），按式（1)计算相对偏差（B）。 如果3次结果都符合5.5a)的要求，即判为合格。如果大于或等于2次的结果不合格，即判为 不合格。如果有1次结果不符合要求，则应重新连续测定20次，并分别按照式（1)计算相对偏 差，如果大于或等于19次测定结果符合5.5a)的要求，即判为合格，否则判为不合格。判定结 果是否符合5.5a)的要求。 ...(1 ) T 式中： B相对偏差； X一一有证参考物质测定值； T—有证参考物质标示值。 b）回收试验 将已知浓度的总胆汁酸样本A加人到人血清样本B中，所加人样本A的体积不宜超过总体 3 YY/T1204—2021 积（A十B)的10%，平行测定3次，根据式(2)计算，判定结果是否符合5.5b)的要求。 R回收 ..(2) (VsXCs) 式中： R目收一 回收率； c 向样本B中加人样本A后的检测浓度； V。 样本B的体积； Vs- 一加人样本A的体积； 样本B的检测浓度； Cs 样本A的浓度。 c) 比对试验 用不少于40份覆盖区间[3，150]］μmol/L内不同浓度的人血清或血浆样本，以制造商指定具 有溯源性的分析系统进行比对试验。每份样本按照待测试剂盒操作方法及比对方法的要求， 分别进行检测，每份样本测定1次，用线性回归方法计算两组结果的相关系数（r）和斜率，同时 计算各样本在待测试试剂盒上的测定值与比对系统测定值之间的绝对偏差或相对偏差，判定 结果是否符合5.5c)的要求。 6.6分析灵敏度 测定1份浓度在10μmol/L～15μmol/L范围内的样本时，记录在试剂盒规定参数下产生的吸光度改 变，换算为15μmol/L的吸光度差值（△A)或吸光度变化率（△A/min），判定结果是否符合5.6的要求。 6.7精密度 6.7.1重复性 用同一批号试剂盒，对高低2个浓度的样本分别重复测定10次，计算测定结果的平均值（）和标 准差（s），根据式（3)计算变异系数（CV)，判定结果是否符合5.7.1的要求。 注：高浓度样本为病理浓度样本，低浓度样本为正常浓度样本。 CV= =×100% ..(3) 6.7.2批间差 用3个不同批号试剂盒，对高低2个浓度的样本分别重复测定3次，计算每批测定结果的平均值 ；(i=1,2,3)，根据式（4)和式(5)计算相对极差(R），判定结果是否符合5.7.2的要求。 注：高浓度样本为病理浓度样本，低浓度样本为正常浓度样本。 (++) T (4) 3 R= ........(5) 6.8稳定性 可选用以下方法之一进行验证： a）效期稳定性 取到效期后一定时间内的试剂，按照6.3～6.6、6.7.1的方法进行检测，判定结果是否符合 5.8a)的要求。 4 YY/T1204—2021 b) 热稳定性 取有效期内的试剂，根据制造商规定的热稳定性条件放置一定时间后，按照6.3～6.6、6.7.1方 法进行检测，判定结果是否符合5.8b)的要求。 7标签和使用说明书 标签和使用说明书应符合GB/T29791.2的规定。 包装、运输、贮存 8.1包装 包装储运图示标志应符合GB/T191的规定。包装容器应保证密封性良好、完整、无泄露、无破损。 8.2 运输 试剂盒应按制造商的要求运输。在运输过程中，应防潮，应防止重物堆压，避免阳光直射和雨雪浸 淋，防止与酸碱物质接触，防止内外包装破损。 8.3贮存 试剂盒应在制造商规定条件下保存。