ICS_11.060.10 YY C 33 中华人民共和国医药行业标准 YY/T0127.18—2016 口腔医疗器械生物学评价 第18部分：牙本质屏障细胞毒性试验 Biological evaluation of medical devices used in dentistry Part 18:Dentine barriercytotoxicity test 2016-01-26发布 2017-01-01实施 国家食品药品监督管理总局 发布 YY/T0127.18—2016 前言 YY/T0127《口腔医疗器械生物学评价》分为18个部分： YY/T0127.1口腔材料生物试验方法溶血试验； -YY/T0127.2 口腔医疗器械生物学评价第2单元：试验方法急性全身毒性试验：静脉 途径； -YY/T0127.3 口腔医疗器械生物学评价第3部分：根管内应用试验； YY/T0127.4 口腔医疗器械生物学评价第2单元：试验方法骨埋植试验； —YY/T0127.5 口腔医疗器械生物学评价第5部分：吸入毒性试验； YY/T0127.6 口腔材料生物学评价第2单元：口腔材料生物试验方法显性致死试验； -YY/T0127.7 口腔材料生物学评价第2单元：口腔材料生物试验方法牙髓牙本质应用 试验； YY/T0127.8 口腔材料生物学评价第2单元：口腔材料生物试验方法皮下植人试验； —YY/T0127.9 口腔医疗器械生物学评价第2单元：试验方法细胞毒性试验：琼脂扩散法 及滤膜扩散法； —YY/T0127.10 口腔医疗器械生物学评价第2单元：试验方法鼠伤寒沙门氏杆菌回复突 变试验（Ames试验）； —-YY/T0127.11口腔医疗器械生物学评价第11部分：盖髓试验； YY/T0127.12 牙科学口腔医疗器械生物学评价第2单元：试验方法微核试验； YY/T0127.13 口腔医疗器械生物学评价第2单元：试验方法口腔黏膜刺激试验； 一YY/T0127.14口腔医疗器械生物学评价第2单元：试验方法急性经口全身毒性试验； YY/T0127.15 口腔医疗器械生物学评价第2单元：试验方法亚急性和亚慢性全身毒性 试验：经口途径； -YY/T0127.16口腔医疗器械生物学评价第2单元：试验方法 哺乳动物细胞体外染色体 畸变试验； YY/T0127.17 口腔医疗器械生物学评价 第17部分：小鼠淋巴瘤细胞（TK)基因突变 试验； --YY/T0127.18 口腔医疗器械生物学评价第18部分：牙本质屏障细胞毒性试验。 本部分为YY/T0127的第18部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分参考ISO7405：2008《牙科学用于口腔的医疗器械生物相容性评价》附录B“牙本质屏障细 胞毒性试验”。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本部分由国家食品药品监督管理总局提出。 本部分由全国口腔材料和器械设备标准化技术委员会（SAC/TC99）归口。 本部分起草单位：国家食品药品监督管理总局北大医疗器械质量监督检验中心。 本部分主要起草人：林红、蒋若丹、郑刚。 I YY/T0127.18—2016 口腔医疗器械生物学评价 第18部分：牙本质屏障细胞毒性试验 1范围 YY/T0127的本部分规定了口腔材料牙本质屏障细胞毒性试验方法。 胞毒性的影响。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T16886.5医疗器械生物学评价第5部分：体外细胞毒性试验（GB/T16886.5一2003， ISO 10993-5:1999,IDT) GB/T16886.12 2医疗器械生物学评价第12部分：样品制备与参照样品（GB/T16886.12- 2005,ISO10993-12:2002) ISO7405-AMD:2013 DentistryEvaluationof biocompatibilityof medicaldevicesused inden tistry(牙科学用于口腔的医疗器械生物相容性评价） 3目的 本试验用于通过细胞培养的方法，评价牙体充填材料的细胞毒性。细胞和材料被一个牙本质屏障 分隔开，从而模拟临床牙齿窝洞用修复材料充填的情况。 如果采用琼脂覆盖法或滤膜滤过法所得细胞毒性为0～1级时，则不必进行该试验。 4器具和材料 4.1细胞 使用已建立细胞系的细胞，例如来自ATCC(AmericanTypeCultureCollection)[如ATCCCCL1 (NCTCclone929)小鼠成纤维细胞］或者选择克隆SV40大T抗原基因转染的细胞，例如来源于小牛 牙乳头的细胞。细胞应保持在温度为（37士2）℃、含5%CO2的潮湿空气的生长培养基中。也可以使用 其他拥有类似成牙本质细胞性质的或其他具有与牙髓组织生理相关性质的已经建立细胞系的细胞。 4.2培养基 培养基应适宜所选细胞系，例如由ATCC或类似机构提供。 胎牛血清（FBS)的MEMa、150IU/mL青霉素、150μg/mL链微素、0.125μg/mL两性德素B和0.1mg/mL遗传 莓素。 1 YY/T0127.18—2016 4.3试剂 4.3.1四唑盐(MTT)[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide] 4.3.2抗菌素/抗真菌剂 青霉素、链霉素、两性霉素B和遗传霉素（遗传霉素仅适用于克隆SV40转染细胞）。 4.4设备和器具 4.4.1培养血 插人式细胞培养皿［例如Millicell"]。 4.4.2培养板 6孔、24孔、48孔和96孔培养板。 4.4.3三维细胞培养网 如直径8mm聚酰胺网[例如Sefar或三维网状支架，宽网150μm～200μm，纤维直径150μm， 厚0.6mm。 4.4.4分隔小室灌注器具 分隔灌注小室（简称灌注小室）可以是3DBioreactor3"或Minucells"（图1)或其他合适的灌注小室。 3DBioreactor"灌注小室是一个由聚碳酸酯制成的圆柱形空腔，其内径约6mm，高约20mm。灌注小 室被一片牙本质片分隔成上下两个腔（上腔即“宽洞”，下腔即“牙髓腔”），牙本质片被固定在合适的位置 （图2）。3DBioreactor>装置的“牙髓腔”部分一侧入口与提供培养基的瓶子相连，另一侧出口与一个转 动的泵相连，该泵与回收废培养基的瓶子相连。或者此装置的“牙髓腔”部分一侧人口与提供培养基的 瓶子和一个转动的泵相连，另一侧出口与回收废培养基的瓶子相连。 1）Millicell是Millipore，Billercia，USA产品的商品名。此信息是给本部分用户提供方便，不代表我们认可其产 品。用户可以使用其他类似的产品，只要它们可以达到相同的结果。 2) Sefar是Sefar，Wasserburg/Inn，Germany产品的商品名。此信息是给本部分用户提供方便，不代表我们认可其 产品。用户可以使用其他类似的产品，只要它们可以达到相同的结果。 3) 3DBioreactor是3DBiotek，NewJersey，USA产品的商品名。此信息是给本部分用户提供方便，不代表我们认 可其产品。用户可以使用其他类似的产品，只要它们可以达到相同的结果。 Minucells是德国BadAbbach，Minucells&MinutissueGmbH公司产品的商品名。此信息是给本部分用户提 4) 供方便，不代表我们认可其产品。用户可以使用其他类似的产品，只要它们可以达到相同的结果。 2 YY/T0127.182016 C 说明： 1- 一培养基的供应； 一加热板或合适装置以保证细胞在适宜环境里生长； 2- 一灌注小室； 3- 4- 一泵； 5- 一废液瓶。 图1牙本质屏障细胞毒性试验装置示意图 说明： 一试验材料； 1- 2- 有细胞的网子； 3- 牙本质片； 不锈钢或合适材料制成的小室壁； 4- 5- 一不锈钢或合适材料制成的固定牙本质片的支架。 图2固定牙本质片的支架和细胞培养灌注小室示意图 4.4.5 酶标仪 96孔板，波长540nm，或者任何其他适合的光度计。 4.4.6 牙本质片 来自于人或者牛的牙本质。 注：如果使用非人源牙本质，使用前应先确定牙本质的通透性，以确保其通透性与人牙牙本质的牙髓-牙本质界面处 是同一水平。同一试验所用牙本质片的通透性应尽可能相近。可采用毛细管系统，如Flowdec测试。测试原 理见附录A。通透性测试结果应在同一数量级。 5）Flowdec是DeMarcoEngineering，Geneva，Switzerland产品的商品名。此信息是给本部分用户提供方便，不代 表我们认可其产品。用户可以使用其他类似的产品，只要它们可以达到相同的结果。 3