ICS 65.160 YC X 87 备案号：69312—2019 中华人民共和国烟草行业标准 YC/T570—2018 烟草及烟草制品 抑芽丹农药残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Tobaccoand tobaccoproductsDeterminationofmaleichydrazideresidues- Liquid chromatography tandem mass spectrometry method 2018-12-17发布 2019-01-15实施 国家烟草专卖局 发布 YC/T570—2018 前言 本标准按照GB/T1.1—2009和GB/T20001.4—2015给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家烟草专卖局提出。 本标准由全国烟草标准化技术委员会卷烟分技术委员会（SAC/TC144/SC1)归口。 本标准起草单位：国家烟草质量监督检验中心、湖北省烟草产品质量监督检验站、郑州烟草研究院、 广西中烟工业有限责任公司、四川省烟草质量监督监测站、浙江中烟工业有限责任公司、贵州省烟草质 量监督检测站、福建中烟工业有限责任公司、云南省烟草质量监督检测站。 本标准主要起草人：邓惠敏、边照阳、李中皓、王康、李小兰、潘立宁、陶晓秋、刘泽春、陈晓水、 楼小华、张燕、杨飞、熊巍、刘珊珊、范子彦、陈黎、王颖、高川川、李苓、张建平、王维刚、孟冬玲、李韵、 陈丹、刘惠民、唐纲岭。 I YC/T570—2018 烟草及烟草制品扌 抑芽丹农药残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 1范围 本标准规定了烟草及烟草制品中抑芽丹农药残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于烟草及烟草制品中抑芽丹农药残留量的测定。本方法检出限为0.6mg/kg，定量限 为2mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682 2分析实验室用水规格和试验方法 YC/T31烟草及烟草制品试样的制备和水分测定 烘箱法 3 3原理 检测，内标法定量。 4试剂和材料 4 所有试剂应适用于农药残留量分析，并应采用与样品测定（萃取和液相色谱-串联质谱法测定）相同 的方法做空白实验以检查其纯度，空白溶剂色谱图的基线上应没有影响抑芽丹农药残留测定的峰出现。 水应达到GB/T6682三级水的要求。 4.1抑芽丹 纯度≥99%（质量百分比）。 4.2 2氛代抑芽丹 纯度≥97%（质量百分比）。 4.3 3浓盐酸 质量分数为36%~38%。 4.4 冰醋酸（HAc） 色谱纯。 4.5乙 色谱纯。 1 YC/T570—2018 4.6 6甲醇 色谱纯。 4.73 盐酸溶液（4.0mol/L) 在通风橱中，将浓盐酸（4.3)缓慢加人到水中，浓盐酸（4.3)与水的体积比为1：2，不断搅拌至均匀。 4.8 抑芽丹标准溶液（100μg/mL） 称取0.01g抑芽丹（4.1)，精确至0.0001g，用水溶解后定容至100mL容量瓶中。标准溶液应避 光贮存于0℃～4℃条件下，有效期1年。 4.9 9氙代抑芽丹内标溶液（200μg/mL） 称取0.01g氛代抑芽丹（4.2)，精确至0.0001g，用水溶解后定容至50mL容量瓶中。内标溶液应 避光贮存于0℃～4℃条件下，有效期1年。 4.10抑芽丹标准工作溶液 同的100mL容量瓶中，各加人250μL氛代抑芽丹内标溶液（4.9），用水稀释定容至刻度。抑芽丹标准 工作溶液的浓度范围应覆盖预计检测到的样品含量。 4.111%HAc水溶液 准确移取10mLHAc(4.4)于1000mL容量瓶中，用水稀释定容至刻度。 4.12 21%HAc乙睛溶液 准确移取10mLHAc(4.4)于1000mL容量瓶中，用乙（4.5)稀释定容至刻度 5 仪器设备 5.1( C1s固相萃取小柱，体积为3mL，填料为500mg。 5.2 电加热套或油浴锅，使用其他加热设备应验证其适用性。 5.3球形冷凝管。 5.4 分析天平，感量为0.0001g。 5.5 离心机，应能使用50mL离心管。 5.6 水相滤膜，0.45μm。 液相色谱-串联质谱仪，配备电喷雾离子源（ESI）。 6 试样制备 按YC/T31制备样品，并测定样品水分含量。 7 操作步骤 7.1萃取 YC/T570—2018 250μL氛代抑芽丹内标溶液（4.9）。将圆底烧瓶放入电加热套或油浴锅（5.2)中，装上球形冷凝管（5.3）， 10 min。 7.2 C18小柱预处理 取2mL甲醇（4.6)淋洗C8固相萃取小柱（5.1），排干，再取2mL水平衡小柱，柱筛板上保留少 量水。 7.3净化 取2mL离心后的上清液（7.1)加到经预处理后的C18固相萃取小柱（7.2)上，并即刻开始收集流出 液，然后用2mL水洗脱，合并流出液及洗脱液，并经0.45μm水相滤膜（5.6)过滤后得试样净化液，待液 相色谱-串联质谱分析。 7.4 测定 7.4.1 测定条件 色谱柱推荐使用多孔石墨化碳液相色谱柱（柱长100mm，内径4.6mm，固定相粒径5μm），使 用其他色谱柱应验证其适用性； 柱温：30℃； 进样量：10μL； 流动相组成、流速及梯度变化见表1； 监测方式：多反应监测； 扫描方式：正离子扫描； 电喷雾电压：5500V； 气帘气压力：207kPa（30psi)； 辅助加热气压力：414kPa(60psi)； 碰撞气压力：41.4kPa(6psi)； 离子源温度：500℃； 抑芽丹及氛代抑芽丹的质谱参数见表2。 表1 液相色谱流动相组成、流速及梯度变化 时间 流速 1%HAc水溶液 1%HAc乙腈溶液 min mL/min % % 0 0.3 100 0 8 0.3 85 15 15 0.3 85 15 16 0.3 10 90 20 0.3 10 06 21 0 100 0 36 0.3 100 3 YC/T570—2018 表 2 化合物质谱参数 去簇电压 碰撞能量 驻留时间 化合物名称 定量离子对 定性离子对 V V ms 抑芽丹 113/85 113/67 110 27, 24 50 氛代抑芽丹 115/87 115/69 110 27, 24 50 7.4.2 标准工作曲线制作 对抑芽丹标准工作溶液（4.10)进行液相色谱-串联质谱分析，以各标准工作溶液中抑芽丹与氛代抑 芽丹的定量离子峰面积的比值为纵坐标，以各标准工作溶液中抑芽丹的质量（）为横坐标，制作标准 工作曲线。标准工作曲线应为线性，相关系数R²≥0.99。 每次试验均应制作标准工作曲线，每进样20次后应加入一个中等浓度的标准工作溶液，如果测得 值与原值相差超过10%，则应重新进行标准工作曲线制作。 7.4.3样品测定 对试样净化液（7.3)进行液相色谱-串联质谱分析，依据内标法由标准工作曲线（7.4.2）得到试样净 化液中抑芽丹含量的测定值。平行进行两次样品测定，以两次平行测定结果的平均值作为最终测定结 果。两次平行测定结果的相对平均偏差应不大于10%。标准工作溶液和实际样品色谱图可参见附 录A。 8 结果表述 以干基计的抑芽丹农药残留量R，，单位为毫克每千克（mg/kg），按式（1)计算： #;+1000 R,= .(1) m 1 000× (1-w) 式中： 试样净化液（7.3)中抑芽丹含量的测定值，单位为微克（μg）； 样品的质量，单位为克（g）； m m 样品的含水率。 9 回收率 本方法的回收率见表3。 表3 方法的回收率 加标量 回收率 农药名称 mg/kg % 10.2 111 抑芽丹 20.4 107 51.0 102 YC/T570—2018 10 重复性和再现性 限和再现性限，见表4。 表 4 4方法的重复性限和再现性限 单位为毫克每千克 样品 抑芽丹残留平均值 重复性限(r) 再现性限(R) 烤烟 62.4 5.2 6.1 白肋烟 49.2 3.8 4.9 香料烟 23.0 2.6 5.2 11 试验报告 试验报告应说明： 识别被测样品需要的所有信息； 参照本标准所使用的试验方法； 检测结果，包括各单次测定结果及其平均值； 与本标准规定的分析步骤的差异； 在试验中观察到的异常现象； 试验日期； 试验人员。 5