ICS 67.050 SN C 53 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4961—2017 出口蜂蜜中寡糖的测定 高效液相色谱一质谱/质谱法 Determination of Oligosaccharides in honey for export- HPLC-MS/MS method 2017-11-07发布 2018-06-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 SN/T49612017 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：丁涛、刘芸、黄娟、柳菌、陈雷、高玲、姜珊、李静静、吴斌、张睿、 沈崇钰、陈惠兰、赵增运。 S SN/T4961—2017 出口蜂蜜中寡糖的测定 高效液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了出口蜂蜜中麦芽七糖的高效液相色谱-质谱/质谱的测定方法。 本标准适用于蜂蜜中麦芽七糖的定性和定量检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 样品经水溶解，利用液相色谱-质谱检测器测定，外标法定量。 4试剂和材料 除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1乙腈：HPLC级。 4.2甲醇：分析纯和HPLC级 4.3麦芽七糖（Maltoheptaose）：纯度≥98% 4.4标准储备溶液：1.0mg/mL。准确称取适量的麦芽七糖（4.3），用水配成1.0mg/mL的标准储备液， 冰箱中4℃贮存。 4.5标准工作溶液：取适量标准储备溶液（4.4），用乙腈水（1+1，V/V）配制系列标准工作溶液。 仪器和设备 5.1 液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源。 5.2 分析天平：感量0.1mg和0.01g各一台。 5.3 液体混匀器。 5.4 真空泵：真空度应达到80kPa 5.5 移液器。 5.6 有机滤膜：0.22μm。 SN/T4961—2017 6试样制备与保存 6.1试样制备 取有代表性样品约500g，装人洁净容器作为试样，密封并标明标记。 6.2 试样保存 试样于常温避光保存。在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。 测定步骤 7 7.1提取 准确称取1.0g试样（精确到0.01g）到适当刻度容器中，用水定容至10.0mL，涡旋至溶解，取 适量上层清液与等体积乙睛混合均匀后，过滤膜，准备进样分析。 7.2 测定条件 7.2.1 液相色谱参考条件 7.2.1.1 色谱柱：Carbohydrate5μm，150mm×4.6mmi.d或相当者。 7.2.1.2 流动相：A，0.1%（V/V）甲酸水溶液；B，乙腈 7.2.1.3 流速：1.2mL/min。 7.2.1.4 梯度洗脱程序：0min~2min35%A,2min~2.5min35%~50%A，2.5min~8.0min50%A， 8.0min~9.0min。 50%~35%A,9.0min~12.0min35%A。 7.2.1.5 柱温：室温。 7.2.1.6 进样量：25μL。 7.2.2 质谱检测器参考条件 7.2.2.1 离子源：电喷雾离子化电离源（ESI），正离子监测。 7.2.2.2 扫描方式：选择离子检测（SRM） 7.2.2.3 雾化气、鞘气和碰撞气均为高纯氮气。 7.2.2.4 喷雾电压、碰撞电压等电压值均优化至最佳灵敏度。 7.2.3定性测定 按照上述条件测定试样和标准工作溶液，如果试样中的质量色谱峰保留时间与标准工作溶液一 致（变化范围在±2.5%之内），并且在扣除背景后的样品谱图中，各定性离子的相对丰度与浓度接 近的同样条件下得到的标准溶液谱图相比，最大允许相对偏差不超过表1中规定的范围，则可判断样 品中存在对应的被测物。 表12 定性确证时相对离子丰度的最大允许相对偏差 相对离子丰度 >50% >20%~50% >10%~20% ≤ 10% 允许的相对偏差 ± 20% ± 25% ± 30% ± 50 2 SN/T4961—2017 7.2.4定量测定 麦芽七糖标准工作溶液（4.5）在高效液相色谱－质谱/质谱设定条件下分别进样，以特征离子的 质量色谱峰面积为纵坐标、工作溶液浓度（μg/mL）为横坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线 对样品进行定量，样品溶液响应值均在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，质谱参数参见附 录表A.1，选择离子流色谱图参见附录图B.1。 7.2.5空白试验 除不加试样外，均按上述步骤进行。 结果计算和表述 8 试样中麦芽糖的含量由色谱数据处理软件或按式（1）计算获得，计算结果应扣除空白值，并保 留两位有效数字： Xf (1) A.i×m×1000 式中： X, 试样中被测物的量，单位为毫克每千克（mg/kg） A, 样液中被测物的峰面积： 标准工作液中被测物的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； C; A 样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； 标准工作液中被测物的峰面积； Aat 试样的质量， 单位为克 (g) m f 稀释倍数。 9 检出低限、回收率和精密度 9.1 检出低限 本方法的检出低限：20.0mg/kg。 9.2回收率和精密度 在20.0mg/kg、50.0mg/kg和100.0mg/kg加标水平进行回收率测定，平均回收率为75%~82%，相 对标准偏差为3.1%~6.7%。 3 SN/T4961—2017 附录A （资料性附录） 质谱参数 质谱参数见表A.1。 表A.1质谱参数 测定物质 分子结构式 母离子[M+Na}（m/z） 子离子（m/z） 碰撞能量/eV 1013.3* 35 麦芽七糖 C42Hz2036 1175.4 851.3 36 *为定量离子。 4