ICS 67.250 SN C53 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4945—2017 食品接触材料检测方法 高分子材料 食品模拟物中N-羟甲基丙烯酰胺的测定 液相色谱法 Test method forfood contact materialsPolymersDetermination of N-Methylol acrylamide in food simulantsHigh performance liquid chromatography 2017-11-07发布 2018-06-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 SNT .75207 前言 本标一2009起 S SN/T49452017 食品接触材料检测方法 高分子材料 食品模拟物中N-羟甲基丙烯酰胺的测定 液相色谱法 范围 本标准规定了食品模拟物中N-羟甲基丙烯酰胺的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于水、3%质最浓度）乙酸溶液、4%（体积分数）乙酸溶液、10%（体积分数）乙 醇溶液、20%（体积分数） 乙醇溶减、50%（体积分数）乙醇溶液和撒榄油7种食品模拟物中N-羟 甲基丙烯酰胺的测定。 规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB5009.156食品安全国家标准食品接触材料及制品迁移试验预处理方法通则 CB/T6682 2分析实验室用水规格和试验方法 塑料中受限物质 质塑料中物质向食品及食品模拟物特定迁移试验 CB/T23296.1 食品接触材料 和含量测定方法以及食品模拟物量震条件选择的指南 GB31604.1 食品安全国家标楼 食品接触材料及制品迁移试验通则 3方法提要 采用高效液相色谱法测定食品模拟物中的-羟甲基内烯腹肢。水基食品模拟物直接进样，橄榄 油模拟物通过水激涡提取后进样，通过高效液相色谱（色谱住为离子排斥柱）采用外标法定量。 4试剂 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682中规定的一级水。 4.1 乙睛：色谱纯。 4.2 甲醇：色谱纯。 4.3 无水乙醇：色谱纯。 4.4 硫酸：优级纯。 4.5 冰醋酸。 4.6 精制微榄油（市售） 4.7 N-羟甲基丙烯胺（H-Methylolacrylamide，HAM，C,H,NO，，CAS号：924-42-5）标准品：纯度 99.0% 4.8 3%（质量浓度）乙酸溶液：称取30g（精确至0.1名）冰醋酸（4.5）于1L容量瓶中，用水定容。 4.9 4%（体积分数）乙酸溶液：称取40mL冰醋酸（4.5）于1L容量瓶中，用水定容。 4.10 10%（体积分数）乙醇溶液：量取100mL无水乙醇（4.3）于1000mL容量瓶中，用水定容。 SN/T4945—2017 4.11 20%（体积分数）乙醇溶液：量取200mL无水乙醇（4.3）于1000mL容量瓶中，用水定容。 4.12 50%（体积分数）乙醇溶液：量取500mL无水乙醇（4.3）于1000mL容量瓶中，用水定容。 4.13 硫酸溶液（0.0036mol/L）：量取0.2mL硫酸（4.4），用水定容至1000mL，混匀。 4N-轻甲基丙烯配胺标准备液（1000mg/L）：准确称取N-羟甲基丙烯酸胺标准品（4.7）0.1g 4.14 （精确至0.1mg）于100mL容量瓶中，加人甲醇（4.2）溶解并定容至刻度，在0℃~4℃C密封避光保 存，3个月内浓度保持稳定。 5N-轻甲基丙烯酰胺标准中间液（10mg/L）：准确取1mLN-羟甲基丙烯能胺标准储备液（4.14） 4.15 于100mL容量瓶中，用甲醇（4.2）定容至刻度。 4.16 水系滤膜，0.22μmo 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪：配有紫外检测器 5.2 涡旋混合仪。 5.3 高心机：转速不小于4000r/min。 5.4 分析天平：感量0.1mg。 5.5 容量瓶：10mL、100mL、1000mL。 5.6 微量注射器：10μL、50叫 5.7 具塞离心管，10mL。 5.8 量筒：100mL、500mL。 5.9 移液器。 6 样品制备 6.1 标准工作溶液的制备 6.1.1 水基食品模拟物标准工作溶液 准确移取适量的N-羟甲基内烯酰胺标准中间液（4.15） 于10L容量瓶（5.5）中，用水稀释成 浓度分别为0mg/L、0.03mg/L 0.05mg/L、0.1sa/、0.mg/L、1.0mg/L的N-轻甲基丙婚酰胺标准 工作溶液。采用同样的方式， 分别用3%乙酸游激（4.8）4%乙脚溶液（4.9）、10%乙醇游液（4.10） 20%乙醇溶液（4.11）和50%乙降馨液（4.12） ）配制同样浓度漂列的标准工作溶液，经0.22μm水系 滤膜（4.16）过滤后供高效液相色谱进样。 橄榄油标准工作溶液 6.1.2 分别准确称取2g（精确至0.1）精制微榄油（市售）（4.6）于5个10mL具寒离心管（5.7） 中，向每个具塞离心管（5.7）中依次加入适量的N-羟甲基丙烯酰胺标准中间液（4.15），涡旋混匀， 得到橄榄油中N-羟甲基丙烯酰胺的浓度为0mg/kg、0.03mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、 1.0mg/kg。加入2mL水，混勾，涡旋混合提取1.5min，然后4000/min离心5min使两相分层，用 移液器取下层水溶液过滤膜（4.16）后供高效液相色谱进样。 6.2食品模拟物试液的制备 6.2.1总则 食晶模拟物试液按照GB31604.1或GB/T23296.1的要求从迁移试验中获取，在0℃-4C冰箱中 2 SN/T49452017 避光保存。 6.2.2水基食品模拟物 移取迁移实验（6.2.1）中得到的水基食品模拟物约2mL，经0.22mm滤膜（4.16）过滤后供高效 液相色谱进样，平行制取两份试液。 6.2.3 橄榄油模拟物 准确称取2g（精确至0.1mg）精制撤榄油提取物于10mL具塞离心管（5.7）中，加入2mL水， 混匀，涡旋混合提取1.5min，然后4000/min离心5min使两相分层，用移液器取下层水溶液过滤膜 （4.16）后供高效液相色谱进样。 6.3空白试液的制备 按6.2所还方法处理未与食品接触材料接触的食品模拟物。 7测定 7.1 液相色谱参考条件 液相色谱参考条件参见附录A。 7.2 绘制标准工作曲线 按照7.1所列测定条件，对6.1中的标准工作落液进行测定。以食品模拟物标准工作液中N-羟 甲基丙烯醛胺浓度为横坐标，以对应的色谱峰面积为纵坐标，分别绘制标准工作曲线，得到线性方 程。标准溶液色谱图参见附录B.1~B.6。 8结果计算 8.1 食晶模拟物试液中N-羟甲基丙烯酰胺液度的计算 食晶模拟物试液中N-羟甲基丙娜酰胺的浓度c按公式（1）计算： () .. C = C = Co 式中： 食品模拟物试液中丙烯酰胺的浓度，单位为毫克每升或毫克每千克（mg/L或mg/kg）； C从标准曲线上得到的食品模拟物中丙烯酰胺的含量，单位为毫克每升或毫克每千克（mg/L 或mg/kg); 一从标准曲线上得到的空白试液中丙烯酰胺的含量，单位为毫克每升或旁克每千克（m或 mg/kg )。 8.2N-羟甲基丙烯酰胺特定迁移量的转换计算 由8.1结果计算得到的食品模拟物试液中N-羟甲基丙烯酰胺的浓度，根据迁移试验中所使用的 食品模拟物的体积和测试试样与食品模拟物接触面积，按照GB5009.156或GB/T23296.1通过数学换 算计算出N-羟甲基丙烯酰胺的特定迁移量，单位以“mg/kg”或mg/dm2”表示。 SN/T4945—2017 测定低限 6 N-羟甲基丙烯酰胺在7种食品模拟液中的测定低限及检出限见表1。 表1 N-羟甲基丙烯酰胺在7种食品模拟液中的测定低限及检出限 编号 食品模拟液 测定低限 检出限 - 水 0.03 mg/lL 0.01 mg/L 2 10%（体积分数）乙醇溶液 0.03 mg/L 0.01 mp/L 3 20%（体积分数）乙醇溶液 0.03 mg/L 0.01 mg/L 4 50%（体积分掌）乙醇游诚 0.03mg/l 0.01 mg/L 3%（质量分鹭）乙酸滑液 0.03mg/l 0.01 mg/L 0.03 mg/lL 6 4%（体积分露 乙酸溶液 0.01 mg/L 0.01 mg/kg 7 橄榄油 0.034g 10 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 S 4 SN/T4945—2017 录A （资料性附录） 液相色谱参考条件 A.1 色谱柱：离子排斥色谱柱，250mm×4.6mm（内径），粒径5mm，或相当者。 A.2 流动相：A为0.0036mol/L硫酸（4.13）；B为乙晴。 A.3 棉度洗脱，条件见表A.1。 表A.1 1梯度洗脱程序 时间/min A/S B/% 97 3 97 3 10 90 10.01 97 3 17 L6 3 A.4 进样量：100μL A.5 检测波长：205nmc 柱温：25℃。 A.6 A.7 流速：1.0mL/mino 5