ICS 65.020.30 SN B 41 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4924—2017 进出口食用动物中四环素类药物残留量 的测定 放射受体分析法 Determination of tetracyclines in edible animals for import and export- Radio-receptor assay 以正式出 2017-11-07发布 2018-06-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中华人民共和国出人境检验检疫 以正式出版文本为准 行业标准 进出口食用动物中四环素类药物残留量 的测定放射受体分析法 SN/T 4924—2017 * 中国海关出版社有限公司出版发行 北京市朝阳区东四环南路甲1号（100023） 编辑部：（010）65194242-7509 网址www.customskb.com/book 北京中献拓方科技发展有限公司印刷 开本880×12301/16 印张0.5字数14千字 2021年3月第一版 2021年3月第一次印刷 印数1—10 * 书号：155175·423 定价14.00元 SN/T4924—2017 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、中华人民共和国锦州出入境检验检 疫局。 本标准主要起草人：肖珊珊、董振霖、庞艳华、杨春光、那晗、杨璐、闫超杰、姚佳、曹际娟 袁文泽。 以正式出版文本为准 SN/T4924—2017 进出口食用动物中四环素类药物残留量 的测定放射受体分析法 1范围 本标准规定了食用活动物中四环素类抗生素残留的放射受体分析方法 本标准适用于禽类血清和猪牛羊等畜类血清和尿液中四环素、金霉素、土霉素、强力霉素抗生 素残留总量的筛选检测 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 放射受体分析（CharmⅡI）方法的基础是竞争性受体免疫反应，当样品中含有四环素族抗生素时， 样品中四环素类抗生素残留物与受体上的结合位点结合，从而阻止了『H标记的四环素与受体试剂 位点的结合。样品中的四环素族药物含量越高，竞争的结合位点越多，[H标记的四环素结合的则越 少，用液体闪烁计数仪测定样品中『H含量的计数值cpm（countperminute）越低。样品中四环素族 抗生素残留量与cpm值成反比。 4试剂和材料 除特殊说明外，试验用水应符合CB/T6682的要求 4.1四环素族药物测定试剂盒"。 主要包括以下内容： a） 组织阴性对照浓缩干粉：储存于2℃~6℃； b） MSU多抗标准品浓缩干粉：储存于2℃~6℃； 组织萃取缓冲液（MSU萃取缓冲液）干粉：储存于2℃~6℃； c） M2缓冲液干粉：用于调节pH，储存于2℃~6℃； (P e) 四环素类受体药片：白色，于-15℃以下的条件保存； f）四环素类氛标记药片：橙色，于-15℃以下的条件保存。 4.2组织阴性对照溶液：使用时取组织阴性对照浓缩干粉【4.1a）】按照试剂盒说明书配制成阴性对 照溶液。配制好阴性组织对照液可在2℃~6℃中保存48h 4.3MSU多抗标准溶液：使用时取MSU多抗标准品浓缩干粉4.1b）」按试剂盒说明书配制成多抗 生素标准溶液，其中金霉素浓度为4000ng/mL。溶液保存方法同4.2。 1）给出该信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对某一产品的认可。如果其他产品具有相同的效果，应经实验评估后使用这些 等效产品。 1 SN/T 4924—2017 4.4组组萃取缓冲溶液（MSU萃取缓冲溶液）：使用时取组织萃取缓冲流（MSU萃取缓冲液）干粉 ［4.1c）]，按试剂盒说明书配制成组织萃取缓冲液。可在2℃~6℃下保存2个月。 4.5M2缓冲溶液：使用时取M2缓冲液干粉【4.1d）]，按试剂盒说明书配制成组织萃取缓冲液。可 在2℃~6℃下保存2个月。 4.6控制点用MSU多抗标准溶液：取0.25mLMSU多抗标准溶液（4.3），加0.75mL水，混勾，使金 霉素浓度为1000ng/mL，临用现配。 4.7闪烁液。 性对照液，在室温下混匀，该对照溶液可在室温下保持6h以上。此溶液用于分析仪器和试剂的性能 监测。 4.9阳性对照液：取0.3mLMSU多抗标准溶液（4.3），加至15mL组织阴性对照溶液（4.2）中，混 匀，取0.3mL混合溶液加到6mLMSU萃取缓冲溶液（4.4）中制成阳性对照液（金霉素浓度4ng/mL）， 在室温下混合均匀。该对照液可在室温下保持6h以上。此溶液用于分析仪器和试剂的性能监测。 4.101mol/L盐酸：8.32mL浓盐酸加水定容至1000mL。 4.11pH试纸：pH值范围5~10 4.12 具塞塑料离心管：50mL。 4.13石 硅硼酸盐玻璃试管及试管塞。 4.14药片压杆。 试剂盒的控制点使用。 5仪器和设备 出版文 5.1 5.2分析天平：感量为0.01g和0.0001g 5.3离心机：转速大于3000r/min。 5.4涡旋混合器。 5.5孵育器。 5.6禾 移液器：1mL~5mL，100μL~1 000μL，10μL~100μL。 试样的制备与保存 6.1 试样的制备 6.1.1血清 将采集到的血液样本于室温下避光静止过夜、离心，上层清液即为血清。转移血清至洁净容器 内作为试样，加封并标明标记。制样过程中应防止试样受到微生物或化学物的污染或发生残留变化。 6.1.2尿液样品 尿液样品装入洁净容器内加封并标明标记。制样过程中应防止试样受到微生物或化学物的污染或 发生残留变化。 6.2试样的保存 血清、尿液样品于-18℃条件下保存。 2 SN/T4924—2017 7分析步骤 7.1提取 7.1.1禾 称取1g（精确到0.01g）混合均匀的试样于50mL离心管，加入30mLMSU萃取缓冲溶液 （4.4），涡旋振荡5min 7.1.2将离心管置于（80±2）℃孵育器内孵育45min，再将离心管置于冰水内10min，转速大于 3000r/min离心10min 7.1.3吸取上清液，注意不要将漂浮的脂肪颗粒混入上清液内。恢复至室温后，用pH试纸（4.11） 检查pH值是否7.5。如不准确，用M2缓冲溶液（4.5）或1mol/L盐酸（4.10）调整至pH值7.5，即 为样品测试液。 7.2测定 7.2.1用药片压杆的平端将受体试剂片剂［ ［4.1e）]压入一结净的玻璃试管内，加300μL水到试管内 用涡旋混合器（5.4）振荡10s，使药片溶解。 7.2.2用移液器加4mL样品测试液（测控制点时取阴性对照液，做阳性对照检测时取阳性对照液）。 7.2.3用药片压杆的平端压入「H标记的四环素族药物片剂【4.1f）】用涡旋混合器（5.4）振荡15s， 上下来回10次。置于（65±1）℃孵育器内，孵育3min 7.2.4取出试管，转速大于3000r/min离心3min，离心停止后立即取出试管，倒掉上清液，用吸水 材料吸干管口边缘处的污渍 7.2.5加300μL水到试管内，振荡并混合均匀，再加人3mL闪烁液（4.7），将试管塞盖上后，涡旋 混匀。将试管放入液体闪烁计数仪（5.1）内，读『H)项的计数值。 7.3控制点的确定 7.3.1控制点是判断样品阴性与初筛阳性的一个界定值，可根据筛选水平自行设定。对于同一批号 的试剂盒，正常情况下只需测定 次控制点 7.3.2尿液控制点（金霉素20μg/kg，相对应： 四环素20 μg/kg、 土霉素20ug/kg、强力霉素20ug/kg） 设定如下：取空白样品，称样1g。 加人0.2mL控制点用MSU多抗标准溶液（4.6），按7.1处理和7.2 测试，取6个加标样本平行测试的 om读数平均值， 乘以系数1.1作为筛选测定的控制点。 7.3.3血清控制点（金霉素20μg/kg，相对应： 四环素20μg/kg、 土霉素20μg/kg、强力霉素20μg/kg） 设定如下：同7.3.2。 7.4结果判定 每次检测前需要同时测定阴性对照液和阳性对照液。阴性对照液和阳性对照液的计数值，应在正 常范围内波动。当样品的计数值大于控制点时，判定为“阴性”，即样本中四环素类抗生素含量低于 筛选水平；当样品的计数值小于或等于控制点时，判定为“初筛阳性”。 8判断限 血清、尿液中四环素、金霉素，土霉素和强力霉素残留总量为20μg/kg。 9结果判断 本方法为初筛方法，如果被测试样品结果为阳性，则应取组织样品采用仪器方法进行确证