ICS 65. 020. 30 SN B 41 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4922—2017 进出口食用动物、饲料中磺胺类药物的测定 放射受体分析法 Determination of sulfonamides in edible animals and feed for importandexport—Radio-receptorassay 2017-11-07发布 2018-06-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 SN/T4922—2017 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、中华人民共和国沈阳出人境检验检 疫局、沈阳农业大学。 本标准主要起草人：肖珊珊、苏明明、金雁、刘瑜、代弟、田宏暂、杨春光、李一尘、简中有。 1 SN/T4922—2017 进出口食用动物、饲料中磺胺类药物的测定 放射受体分析法 1范围 本标准规定了食用活动物和饲料中磺胺类药物的放射受体分析检测方法， 本标准适用于禽类血清、畜类血精、奋类尿液和饲料中磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺邻二甲氧腾啶 磺胺唾恶林、磺胺氧哒嗪、磺胺甲氧嗪、磺胺-5.甲氧瞻啶、磺胺-6.甲氧噻啶、磺胺二甲氧嘧 啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲基异恶喹、磺胺瞻啶、磺胺吡啶等磺胺类药物残留总量的筛 选检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件、 GB/T14699.1饲料采样 3方法提要 放射受体分析方法的基础是竞争性受体免疫反应，当样品中含有磺肢类抗生素时，样品中磺胺 类抗生素残留物与受体上的结合位点结合，从而阻止了【H标记的磺胺二甲啶与受体试剂位点的 结合。样品中的磺胺类药物含量越高，竞争的结合位点越多，H标记的磺胺二甲嘧啶结合得则越少 用液体闪炼计数仪测定样品中【H含量的计数值（cpm）越低，样品中磺胺类抗生素残留量与cpm值 或反比。 4试剂和材料 4.1磺胺类药物测定试剂盒1>： a) 组织阴性对照浓缩干粉：组织阴性对照浓缩干粉储存于2℃6℃。 b) MSU多抗标准品浓缩干粉：浓缩干粉储存于2C-6C。 e) 组织萃取缓冲波（MSU萃取缓冲液）干粉：储存于2C-6C。 d) M2缓冲液干粉：用于调节pH值，储存于2℃~6C。 e) 磺胺类受体药片：白色，-15℃以下的条件保存 f) 磺胺类氛标记药片：粉红色，-15芒以下的条件保存。 4.2组织阴性对照溶液：使用时取组织阴性对照浓缩干粉按照试剂盒说明书配制成阴性对照溶液 配制好的阴性对照溶液可在2℃~6℃中保存48h， 4.3MSU多抗标准溶液，使用时取浓缩干粉按试剂盒说明书配制成多抗生素标准溶液，其中磺胺二 甲啶浓度为1000ng/ml。溶液保存方法网4.2 给出该信息是为了方使本标准的使用者，并不表示对某一产品的认可。如果其他产品具有相同的效果，害 经试验评估后使用这些等效产品 1 SN/T4922—2017 4.4组织举取缓冲溶液（MSU幸取缓冲溶液）：使用时取浓缩干粉按试剂盒说明书配制成组织幸取 缓冲液。可在2℃~6℃下保存2个月。 4.5M2缓冲溶液：使用时取浓缩干粉按试剂盒说明书配制成M2缦冲液。可在2~6%下保存2 个月。 4.6控制点用MSU多抗标准溶液：取0.1mLMSU多抗标准溶液（4.3），加0.9mL水，混勾，使磺 胺二甲密啶浓度为100ng/mL，临用现配。 4.7[ 闪烁液。 4.8 阴性对照液：取2mL组织阴性对照溶液（4.2），加至6mLMSU举取缓冲溶液（4.4）中制成阴 性对照液。在室温下混匀，该对照溶液可在室温下保持6h以上。此落波用于分析仅器和试剂的性能 监测。 4.9 阳性对照液：取0.3mLMSU多抗标准溶波（4.3），加至6mL组织阴性对照溶波（4.2）中， 混匀。取2.0mL混合溶液加入6.0mLMSU举取缓冲溶液（4.4）中制成阳性对照液，在室温下混合均匀 该对照液可在室温下保持6h以上。此溶液用于分析仪器和试剂的性能监测 4.10 1mol/L盐酸：8.32mL浓盐酸加水定容至1000mL 4.11 0.1mol/L.盐酸：0.832mL浓益酸加水定容至1000mL。 4.12 伺料提取液：0.1mol/L盐酸+甲醇（1+1，体积比） 4.13 pH试纸：范围5~10。 4.14 具需塑料离心管：50mL 4.15 硅硼酸盐玻璃试管及试管塞 4.16 药片压杆。 4.17 空白基样： 选取确认不含有磺类抗生素的尿液、血液或间料，作为空白基质，用于测定当次 批次试剂盒的控制点使用。 5 仅器和设备 5.1 液体闪炼计数仅：7600分析仪或相当者，监控见附录A。 分析天平：感量为0.01g和0.0001g。 5.3 高速冷冻离心机：大于3000rmin。 5.4 组织搞碎机。 5.5 旋涡混合器。 5.6 孵育器。 5.7 移液器；1 mL~5 mL,100 μL~1 000 μL,10 μL~100 μL 6 试样的制备与保存 6.1 试样的制备 6.1.1血清 将采集到的血液样本于室温下避光静止过夜，离心，上层清液即为血清，转移血清至洁净容器 内作为试样，加封并标明标记。制样过程中应防止试样受到微生物或化学物的污染或发生残留变化 6.1.2尿液 尿液样品装入洁净容器内加封并标明标记。制样过程中应防止试样受到微生物或化学物的污染或 发生残留变化。 2 SN/T4922—2017 6.1.3饲料 按GB/T14699.1采样。选取有代表性的问料样品至少500g，四分法缩减至100g，磨碎，全部通 过40目筛，混匀，装人密闭容器中并标明标记 6.2 试样的保存 6.2.1 血清与尿液 血清、尿液样品于-18℃条件下保存。 6.2.2 2饲料 饲料样品避光低温保存。 73 分析步票 7.1提取 7.1.1 尿液、血清 7.1.1.1 称取1多（精确到0.1g）混合均匀的试样于50mL离心管，加入30mLMSU萃取缓冲落波 （4.4），涡旋振荡5min。 7.1.1.2将离心管置80℃±2℃孵育器内孵育45min，再将离心管置冰水内10min，大于3000/min 离心 10 min。 7.1.1.3吸取上清液，注意不要将漂浮的脂肪颗粒混入上清液内。恢复至室温后，用pH试纸（4.13） 检查pH是否为7.5。如不准确，用M2缓冲溶液（4.5）或1mol/L盐酸（4.10）调整至pH7.5，即为样 品测试液。 7.1.2 饲料 称取2g（精确到0.1g）混合均匀的试样于50mL离心管，加人10mL饲料提取渡，浸泡5min， 涡旋振荡1min，8000r/min高心5min 7.2测定 7.2.1用药片压杆的平端将受体试剂片剂（4.1e）压人一洁净的玻璃试管内，加300叫水到试管内 用旋涡混合器振荡10s，使药片溶解。 7.2.2尿液、血清：用移液器加4mL样品测试液；伺料：吸取0.2mL上清液，加入3.8mL.MSU萃 取缓冲溶液（4.4），混匀，测控制点时取阴性对照液，作阳性对照检测时取阳性对照液（4.9）。 7.2.3用药片压杆的平端压人[H)标记的磺胺类药物片剂（4.1f）用旋涡混合器振荡155，上下来回 10次。置65℃±1C孵育器内，孵育3min。 7.2.4取出试管，大于3000D'min离心3min，离心俘止后立即取出试管，倒掉上清液，用吸水材料 吸干管口边缘处的污溃。 7.2.5加300μ水到试管内，振荡并混合均勾，再加上3mL闪烁液（4.7）到试管内，将试管塞盖上 后，涡旋混匀。 7.2.6将试管放人波体闪炼计数仪内，读[H]项的计数值。 注：宜一次同时进行6支试管的测定。 o, SN/T4922—2017 7.3 控制点的确定 7.3.1控制点是判断样品阴性与初筛阳性的一个界定值，可根据筛选水平自行设定。对于同一批号 的试剂盒，正需情况下只需测定一次控制点。 7.3.2尿液、血液控制点（磺胺二甲腾啶20/kg）设定如下：取空白样品，称样1g，加人0.02mL MSU多抗标准溶液（4.3），按7.1.1前处理和7.2测试，取6个加标样本平行测试的cpm读数平均值， 乘以系数1.3作为筛选测定的控制点。 7.3.3饲料控割点（磺胺二甲嘧啶200g/kg）设定如下：取明性饲料样品，称样2g，加人0.04mL 控制点用MSU多抗标准溶液（4.6），按7.1.2前处理和7.2测试，取6个加标样本平行测试的cpm读 数平均值。乘以系数1.3作为饲料筛选测定的控制点。 7.4 结果判定 每次检测前需要同时测定阴性对照液（4.8）和阳性对照液（4.9）。阴性对照液和阳性对照液的计 数值，需在正常范围内波动。当检测样品的计数值大于控制点时，判定为“阴性”，即样本中碘磺胺类 抗生素含量低于筛选水平；当样品的计数值小于或等于控制点时，判定为“初筛阳性”。 8 判断限 本标准的方法判断限以磺胺二甲嘧啶计磺胺类药物总量。尿和血液：20吨/kg。饲料：200吨/kg 6 结果判断 本方法为初筛方法，如果被测试样品检测结果为阳性，则需取组织样品采用仪器检测方法进行 确证。 SN/T 4922—2017 附录A （规范性附录） 仪器和试剂的日常监控 A.1 试剂的监控 A.1.1 每一批新的试剂需要测定零基准平均值，测定三次阴性对照液epm值，其平均