中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4812—2017 进出口食用动物氨丙琳药物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of amprolium residues in live animal for import and export- LC-MS/MSmethod 2017-07-21发布 2018-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4812—2017 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：涂小珂、陈沛金、曾少灵、罗耀、岳振峰、胡运发、叶刚、康海宁。 一 SN/T4812—2017 进出口食用动物氨丙啉药物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1000mL容量瓶中，加人1.00mL甲酸（4.2），用水定容至刻度。 4.6乙酸铵溶液-甲醇溶液（9：1，体积比）：准确量取90mL乙酸铵溶液（4.5）至100mL容量瓶中，加 入甲醇（4.1），定容至刻度。 4.7无水硫酸镁：550℃灼烧4h，干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。 4.8氯化钠：优级纯。 4.9乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）吸附剂。 4.10石墨化炭黑。 4.11 标准物质：盐酸氨丙啉（amproliumhydrochloride，CAS：137-88-2），纯度大于98%。 4.12标准储备溶液：准确称取适量标准物质（4.11)，以甲醇溶液配制氨丙啉浓度为1000μg/mL的标 准溶液，-18℃避光保存。 4.13 标准工作溶液：移取适量的标准储备溶液（4.12），以甲醇配制浓度为10ug/mL的标准溶液，4℃ SN/T4812—2017 避光保存，可使用1个月。 4.14 4微孔滤膜：0.22μm，水系， 5 仪器和设备 5.1 液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 5.2电子天平：感量0.0001g、0.001g和0.1g。 5.37 离心机：10000r/min。 5.4 氮吹浓缩仪。 5.5 旋涡混匀器。 5.6 移液器：量程10μL~100μL、100μL~1000μL和1000μL~5000μL。 5.7 聚丙烯离心管：15mL，具塞。 6 6试样的制备与保存 血浆：将新鲜血液采集后加入含抗凝剂的试管中，混匀，10℃以下，5000r/min离心10min，取血 浆备用；尿液：5000r/min离心去除沉淀物，取上清液备用。 血浆、尿液试样均分为两份，装人洁净容器，密封，并标明标记，于一18℃以下冷冻存放。 在制样操作过程中，应防止样品被污染或残留物含量发生变化 7测定步骤 7.1提取 吸取1mL试样于15mL聚丙烯离心管中，加人2.5mL乙腈（4.3），涡旋混匀1min，再加人0.5g 无水硫酸镁（4.7）和1.0g氯化钠（4.8），涡旋混匀1min，10℃以下，10000r/min离心5min，转移上清 后再加人2.5mL乙腈，涡旋1min，10000r/min离心5min，合并两次提取的上清液并用乙定容到 5mL。 7.2净化 上清液加人50mg乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）（4.9），如血液样品色素过重再加入10mg石墨化炭 黑（4.10），涡旋1min，静止10min。准确吸取2.5mL上清液于氮吹浓缩仪40℃吹氮浓缩至近干，加 入1mL0.005mol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）-甲醇（9：1，体积比）（4.6），涡旋混匀1min，过 0.22um水系滤膜，液相色谱-质谱/质谱仪测定 7.3 标准工作溶液的制备 取空白样品，按7.1和7.2操作，制备空白样品提取液。吸取适量标准工作溶液（4.13），用空白样品 提取液配制一系列标准工作溶液，质量浓度为2μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L，、50μg/L、100μg/L。 7.4测定 7.4.1 液相色谱条件 液相色谱条件如下： a） 色谱柱：Cls色谱柱，2.1mm×150mm（内径），1.7μm，或相当者； N SN/T4812—2017 b) 柱温：35℃； c) 进样量：10μL； d) 流动相：0.005mol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）（A），甲醇（B)； e) 流速：0.2mL/min； f) 梯度洗脱条件见表1。 表1 流动相及梯度洗脱条件 时间/min A/% B/% 90 10 4.0 06 10 5.0 10 90 7.0 90 90 10.0 06 10 7.4.2 质谱条件 7.4.2.1 离子化模式：电喷雾离子源（ESI），正离子模式。 7.4.2.2 质谱扫描方式：选择反应监测（SRM)。 7.4.2.3 其他参考质谱条件参见附录A。 7.4.3 液相色谱-质谱/质谱测定 7.4.3.1 定性测定 在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间，与基质标准溶液的保留时间偏差在士2.5%之内； 化合物的质谱定性离子至少应包括一个母离子和两个子离子，且定性离子的相对丰度与浓度相当的标 准溶液相比，其允许偏差不超过表2规定的范围。 表2 定性时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 >50% >20%~50% >10%~20% ≤10% 允许的相对偏差 ±20% ±25% ±30% ±50% 7.4.3.2 定量测定 以峰面积为纵坐标，工作溶液质量浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定 量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述仪器条件下，氨丙啉的保留时间 参见附录A表A.1，标准溶液的选择反应监测色谱图参见附录B中图B.1。 7.4.4 空白试验 除不加试样外，按上述测定步骤进行。 8 结果计算和表述 按式（1)计算血液、尿液样品中目标物残留量，计算结果需扣除空白值： 3 SN/T4812-—2017 cxV. X: (1 )... V. 式中： X 样品中化合物残留量，单位为微克每升（μg/L)； 由标准工作曲线得 V.m 样品的最终定容体 V. 样品溶液所代表的 9 测定低限和回收率 本方法所有基质中氨丙啉 91.7%；添加浓度20μg/L，回 浓度100μg/L，回收率为90.8% SN/T4812—2017 附录A （资料性附录） 参考质谱条件 参考质谱条件如下： 电喷雾 b）气帘气压 c) 雾化气压 d) 辅助气压 e) 离子源温 f) 其他质谱 碰撞室 参考保 出口电压 碰撞气能量 化合物 出口电压 ev ev 15 12 氨丙啉 15 12 务质谱参数优化到最佳。