SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4811—2017 进出口食用动物艾玛菌素残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of emamectin benzoate residues in live animal for import and export--LC-MS/MS method 2017-07-21发布 2018-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4811—2017 前 創言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：陈兵、肖陈贵、林彦星、胡运发、沈金灿、刘建利、陈沛金、孙洁、杨俊兴、秦智锋、 花群义、卢体康。 1 SN/T4811—2017 进出口食用动物艾玛菌素残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅等进出口食用动物中艾玛菌素药物残留量的液相色谱-质谱/质 谱检测和确证方法。 本标准适用于猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅的血液以及猪、牛羊尿液中艾玛菌素药物残留量的测定。 本标准适用于出人境检验检疫工作。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 试样中艾玛菌素药物残留用乙睛提取，经无水硫酸镁及Cis萃取净化，液相色谱-质谱/质谱仪测定， 外标法定量。 4试剂材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.12 乙睛：色谱纯。 4.2甲酸：色谱纯。 4.3 净化填料：500mg硫酸镁与100mgC18粉末的混合物。 4.40.1%甲酸水溶液：取1mL甲酸（4.2)用去离子水定容到1000mL，摇匀。 4.50.1%甲酸乙腈溶液：取1mL甲酸（4.2)用乙腈（4.1)定容到1000mL，摇匀。 4.6 标准曲线定溶液：取50mL0.1%甲酸水溶液（4.4)和50mL0.1%甲酸乙溶液（4.5）混合，摇匀。 4.7 标准物质：艾玛菌素（EmamectinBenzoate），纯度≥99.4%（艾玛菌素的基本信息见附录A）。 4.8标准储备溶液：100mg/L。准确称取适量的艾玛菌素（4.7），用乙腈配制成浓度为100mg/L的艾 玛菌素标准储备溶液。 4.9标准工作溶液：吸取适量的标准储备溶液（4.8），用标准曲线定溶液（4.6)配制成不同浓度系列的标 准工作溶液（现用现配）。 4.10微孔滤膜：0.22μm有机膜。 5仪器和设备 5.1液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 SN/T4811—2017 5.2 高速组织匀浆机。 5.3旋涡混匀器。 5.4分析天平：感量0.0001g、0.001g和0.1g。 5.5 5移液器：量程10μL100μL、100μL1000μL和1000μL～5000μL。 5.6 聚丙烯离心管：50mL和15mL，具塞。 5.7 离心机：转速不低于5000r/min。 6 试样制备与保存 血浆：将新鲜血液采集后加人含抗凝剂的试管中，混匀，5000r/min离心10min（温度低于10℃）， 取上层血浆；尿液：5000r/min离心去除沉淀物，取上清液备用。 血浆、尿液试样均分为2份，装入洁净容器，密封，并标明标记，于一18℃以下冷冻存放。 在制样操作过程中，应防止样品被污染或残留物含量发生变化。 7 测定步骤 7.1 提取 吸取5mL试样于50mL聚丙烯离心管中，加入20mL乙睛（4.1），漩涡混匀1min，超声提取 20min，5000r/min离心5min，将提取液转移至另一离心管中，待净化。 7.2 净化 5min，取上层溶液过0.22μm有机滤膜，液相色谱-质谱/质谱仪测定。 7.3 测定 7.3.1 液相色谱条件 液相色谱条件如下： a) 色谱柱：Cis柱，2.1×100mm，2.7um，或相当者； b) 流动相及梯度洗脱条件见表1。 柱温：40℃； c) d) 进样量：10uL； e) 流速：0.3mL/min。 表1 流动相及梯度洗脱条件 时间 0.1%甲酸水溶液 0.1%甲般乙脂溶液 min % % 50 50 5.0 5 9.5 6.0 5 95 6.1 50 50 10.0 50 50 2 SN/T4811—2017 7.3.2 质谱条件 参见附录B。 7.3.3 液相色谱-质谱/质谱测定 7.3.3.1 定性测定 化合物的质谱定性离子至少应包括一个母离子和两个子离子，且定性离子的相对丰度与浓度相当的标 准溶液相比，其允许偏差不超过表2规定的范围。 表2定性时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 >50% >20%~50% >10%~20% ≤10% 允许的相对偏差 ±20% ±25% ±30% ±50% 7.3.3.2 定量测定 根据样液中化合物含量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液，标准工作溶液和样液中化合物的响 应值均应在仪器检测的线性范围内，以外标法定量。标准工作溶液和样液应等体积参插进样测定。标 准溶液的选择反应监测色谱图参见附录C中图C.1。 7.4空白实验 除不加试样外，按上述测定步骤进行。 7.5 5结果计算和表述 试样中艾玛菌素残留量可用数据处理系统按外标法自动计算，也可按式（1)计算残留量： V1000 X=cX .(1) mx1000 式中： X--——样品中化合物残留量，单位为微克每升（μg/L）； 由标准工作曲线得到的试样溶液中化合物含量，单位为微克每升（μg/L）； V———样品的最终定容体积，单位为毫升（mL）； 777 样品溶液所代表的试样体积，单位为毫升（mL）。 8 测定低限和回收率 8.1 测定低限 本方法所有基质中艾玛菌素测定低限均为0.5μg/L。 8.2 回收率 添加浓度水平分别为0.5g/1、1.0ug/L和2.0ug/L时，不同基质中艾玛菌素回收率数据参见 附录D。 3