SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4773—2017 玩具材料中N-亚硝胺和N-亚硝基 化合物迁移量的测定 高效液相色谱-串联质谱法 Determination of the migration of N-nitrosamines and N-nitrosatable substances intoys materialsHighperformance liquid chromatography couples with tandem mass spectrometry (BS EN71-12:2013,Safety of toys—Part 12:N-nitrosamines and N-nitrosatable,MOD) 2017-05-12发布 2017-12-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4773—2017 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准使用重新起草法修改采用BSEN71-12：2013《玩具安全 第12部分：N-亚硝胺和N-亚硝 基化合物》。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国江苏出入境检验检疫 局、中华人民共和国广东出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：杨荣静、望秀丽、董涵、卫碧文、李敬、黄理纳、高欢、林莉、郑翊。 SN/T 4773—2017 玩具材料中N-亚硝胺和N-亚硝基 化合物迁移量的测定 高效液相色谱-串联质谱法 1范围 本标准规定了玩具材料中N-亚硝胺和N-亚硝基化合物迁移量的高效液相色谱-串联质谱测定 方法。 本标准适用于指画颜料中N-亚硝基二乙氧基胺迁移量，以及橡胶制玩具中N-亚硝胺和N-亚硝基 化合物迁移量的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 3.1 以水为提取液，提取指画颜料样品中的N-亚硝基二乙氧基胺（NDELA），以高效液相色谱-串联质 谱法（HPLC-MS/MS)测定N-亚硝基二乙氧基胺在水中的迁移量，外标法定量。 3.2以人工睡液盐为提取液，提取橡胶制玩具样品中的N-亚硝胺和N-亚硝基化合物，N-亚硝基化合 物在酸性条件下亚硝胺化后，以高效液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。 4 试剂和材料 除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1 碳酸氢钠。 4.2 氯化钠。 4.3 碳酸钾。 4.4 亚硝酸钠。 4.5 甲醇：色谱纯。 4.6 甲酸：色谱纯。 浓盐酸。 4.7 4.8 氢氧化钠。 4.9 盐酸溶液I（浓度为1mol/L）：量取8.2mL浓盐酸（4.7），加少量水稀释，并转移到100mL容量 瓶中，加水定容至刻度，摇匀。 4.10盐酸溶液Il（浓度为0.1mol/L)：量取0.82mL浓盐酸（4.7)，加少量水稀释，并转移到100mL容 量瓶中，加水定容至刻度，摇匀。 1 SN/T4773—2017 4.11氢氧化钠溶液I（浓度为1mol/L）：称取4.0g氢氧化钠（4.8），加少量水溶解，并转移到100mL 的容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀。 4.12 2氢氧化钠溶液I（浓度为0.1mol/L)：称取0.4g氢氧化钠（4.8），加少量水溶解，并转移到100mL的 容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀。 酸钠（4.4)溶解于水中，并用水定容至1L，需用盐酸溶液Ⅱ（4.10)或氢氧化钠溶液Ⅱ（4.12）调节pH至 9.0，摇匀后密封保存。人工睡液盐溶液现配现用。 4.14N-亚硝胺标准品：见附录A。 4.15标准储备溶液： a) N-亚硝基二乙氧基胺标准储备溶液：准确称取适量的N-亚硝基二乙氧基胺标准品（4.14），用 水配制成浓度均为200mg/L的标准储备溶液。 N-亚硝胺混合标准储备溶液：分别准确称取适量的N-亚硝胺标准品（4.14），用甲醇（4.5）配制 b) 成N-亚硝胺浓度均为200mg/L的混合标准储备溶液。 注：标准储备溶液在0℃～4℃环境下避光保存，有效期3个月。 4.16 5标准工作溶液： [4.15a)]逐级稀释，配制成N-亚硝基二乙氧基胺浓度分别为0.005mg/L、0.010mg/L、 0.050mg/L、0.100mg/L、0.200mg/L、0.500mg/L的标准工作溶液。 b) N-亚硝胺混合标准工作溶液：以人工唾液盐溶液（4.13)为稀释溶剂，将N-亚硝胺混合标准储 备溶液[4.15b)逐级稀释，配制浓度分别为0.005mg/L、0.010mg/L、0.050mg/L、0.100mg/L、 0.200mg/L、0.500mg/L的标准工作溶液。标准工作溶液现配现用。 5 仪器和设备 5.1. 高效液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子化电离源。 5.2分析天平：感量0.1mg。 5.3振荡仪。 5.4 恒温水浴振荡器，温度可维持在（40土2）℃。 5.5 离心机：转速不低于2500r/min。 5.6 锥形瓶：棕色，具磨口塞，100mL。 离心管：具平盖，15mL。 分析步骤 6.1 试样制备 6.1.1 指画颜料试样的制备 取约5.0g指画额料样品，混匀后作为待测试样。 6.1.2 橡胶制玩具样品的制备 6.1.2.1 气球试样的制备 取完整的气球数个，沿纵向切成四等分作为待测试样。 2 SN/T4773—2017 6.1.2.2其他橡胶玩具试样的制备（除气球样品外） 如果整个玩具或者玩具中橡胶部分的表面积小于10cm’，则不需将玩具或者其橡胶部分剪碎，橡 胶玩具或取下玩具中橡胶部分直接作为试样待测。样品数量不少于0.2g。 如果玩具中测试部分的表面积大于10cm²，选择其中表面积最接近10cm²的部分，剪切成表面积 约（10士1)cm²的试样，剪切样品时，应保证因剪切而形成的断面积最小且边缘光滑。当客户有需求或 对测试结果有问时，可将橡胶部分直接作为待测试样。 6.2N-亚硝基化合物的提取 6.2.1指画颜料 准确称取约2.0g（精确至0.001g）制备好的指画颜料试样（6.1.1）于锥形瓶（5.6）中，加人20.0mL 水，振荡1min使试样充分润湿，置于恒温水浴振荡器（5.4）提取15min，再以离心机（5.5）分离15min， 取5.0mL上清液置于离心管（5.7)中再以离心机（5.5）分离15min，取上清液约1.0mL作为提取液 待测。 6.2.2橡胶制玩具 6.2.2.1气球试样 准确称取气球试样（6.1.2.1)3.5g～4.5g（精确至0.001g），置于锥形瓶（5.6)中，按人工唾液盐溶液 （40士2)℃的人工睡液盐溶液（4.13），并使液体覆盖试样。将具塞的锥形瓶放人温度为（40士2）℃的恒 温水浴振荡器（5.4）中振荡提取（60士3）min，取上清液作为提取液待测。 6.2.2.2其他橡胶玩具试样（气球样品除外） 取已制备好的试样（6.1.2.2)准确称重（精确至0.001g），置于锥形瓶（5.6）中，按人工睡唾液盐溶液体 积（单位为mL)与试样重量（单位为g）比值为10.0的比例准确加人适量温度为（40士2)℃的人工唾液 盐溶液（4.13)，并使液体覆盖试样。将具塞的锥形瓶放入温度为（40士2)℃的恒温水浴振荡器（5.4)中 振荡提取（60士3)min，取上清液作为提取液待测。 6.2.3提取液的亚硝化 准确移取5.0mL提取液（6.2.2.1或6.2.2.2）置于锥形瓶（5.6）中，加人0.5mL盐酸溶液I（4.9），具 塞，充分振荡5min后放入温度为（40土2）℃恒温水浴振荡器（5.4），振荡（30士1）min，取出并加人 1.0mL氢氧化钠溶液I（4.11），再充分振荡5min，取约1.0mL亚硝化后的提取液待测。 6.3测定 6.3.1高效液相色谱-串联质谱工作条件 由于测试结果取决于所使用的仪器，因此不可能给出色谱分析的通用参数，设定的参数应保证测定 时，被测组分与其他组分能够得到有效的分离，以下参数可供参考： a）高效液相色谱条件： 1） 色谱柱：C18反相高效液相色谱柱（3.0mm×100mm，1.8um）或相当者； 2） 流动相：A为0.1%的甲酸水溶液，B为甲醇； 3） 流速：0.3mL/min； 3 SN/T 4773—2017 4) 梯度洗脱梯度：参见附录B； 5） 柱温：40℃； 6 进样量：10μL。 b) 串联质谱条件： 参见附录C。 6.3.2 定性测定 进行样品测定时，如果检出的质量色谱法保留时间与标准样品一致，并且在扣除背景后的样品谱图 中，各定性离子的相对丰度与浓度接近的相同条件下得到的标准溶液谱图相比，最大允许相对偏差不超 过表1中规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。 表1定性确认时相对离子丰度的最大允许相对偏差 相对离子丰度 >50% >20%~50% >10%~20% ≤10% 允许的相对偏差 ±20% ±25% ±30% ±50% 6.3.3定量测定 按高效液相色谱-串联质谱条件（6.3.1)对标准工作溶液（4.16）和提取液（6.2）分别进样测定，以标 准物质色谱峰面积为纵坐标，工作溶液浓度（mg/L）为横坐标，绘制标准工作曲线（0.005mg/L～ 0.500mg/L），样品溶液中目标物的响应值应在标准工作曲线的线