SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T0212.22017 代替SN/T0212.2—1993 出口禽肉中二氯二甲吡啶酚残留量测定 Determination of clopidol residues in poultry meat for export 2017-11-07发布 2018-06-01实施 中华人民共和国 发布 80 国家质量监督检验检疫总局 徐屋立真伪 SN/T0212.2—2017 前言 本部分是SN/T0212的第2部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分与SN/T0212.21993相比主要修改如下： -对标准的名称进行了修改； 一略去了抽样步骤； 一对原标准的检测范围进行了扩展，除鸡肉外增加了鸡肝； 一对衍生化方法进行改进； 一用气相色谱-质谱法和气相色谱串联质谱法替代气相色谱法 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局。 本部分主要起草人：陈迪、朱坚、樊祥、吴启明、于瑞祥、郭德华、邓晓军、王敏、韩丽、伊雄海、彭觅、 张浩。 本部分所代替标准历次版本发布情况为： SN/T0212.2—1993。 I SN/T0212.2—2017 出口禽肉中二氯二甲吡啶酚残留量测定 1范围 SN/T0212的本部分规定了禽肉和肝脏中二氯二甲吡啶酚残留量的气相色谱-质谱和气相色谱串 联质谱测定法。 本部分适用于禽肉和肝脏中二氯二甲吡啶酚残留量的测定。 2方法提要 采用甲醇提取样品中二氯二甲吡啶酚，提取液经中性氧化铝柱净化，在碱性条件下的吡啶催化下， 以丙酸酐衍生。用气相色谱-质谱仪和气相色谱串联质谱仪测定，外标法定量。 3试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为蒸馏水。 3.1 甲醇：液相色谱纯。 3.2 正已烷：残留级。 3.3 吡啶。 3.4丙酸酐：纯度≥98.0%。 3.5 四硼酸钠。 3.6 50.1mol/L四硼酸钠溶液：称取38.0g四硼酸钠（3.5），加水溶解并定容至1000ml。 3.7氧化铝：中性，层析用，粒度100目～200目，在300℃灼烧3h，并在130℃烘箱中烘烤1h后，放 入干燥器中备用。 3.8二氯二甲吡啶酚标准物质：（Clopidol,C,H,Cl2NO,CAS号：2971-90-6），纯度>98%。 3.9二氯二甲吡啶酚标准储备液：准确称取适量的二氯二甲吡啶酚标准物质，以甲醇配成0.10mg/mL 标准储备溶液，于4℃冰箱内避光保存。保存期为12个月。 3.10 0二氯二甲吡啶酚标准工作液：根据需要用甲醇将二氯二甲吡啶酚标准储备液（3.9)稀释成适当浓 度的标准工作溶液，于4℃冰箱内避光保存。保存期为6个月。 4 仪器和设备 4.1气相色谱-质谱仪，配EI源。 4.2气相色谱串联质谱仪，配EI源。 4.3组织捣碎机。 4.4均质器。 4.5离心机，4000r/mim。 4.6 涡旋混合器。 4.7旋转蒸发仪。 4.8 氮吹仪。 1 SN/T 0212.2—2017 4.9 带螺旋盖塑料离心管，15mL。 4.10 带螺旋盖塑料离心管，50mL。 4.11 玻璃层析柱：20mm(id）×400mm。装人16g氧化铝（3.7)轻轻敲打装实。 4.12 电子天平：感量0.1mg和0.01g。 4.13 梨形瓶：250mL。 5试样的制备与保存 5.1试样制备 取样品中有代表性的约500g·用组织捣碎机捣碎，混勾：平均分为两份，分别装人洁净容器中，密封 并标明标记。 5.2试样保存 将试样于一18℃以下冷冻保存。 6测定步骤 6.1提取 称取5g试样（精确至0.01g）于50ml塑料离心管中，加人25mL甲醇（3.1)，均质1min，以 4000r/min离心5min。 6.2净化 用40mL甲醇活化氧化铝柱（4.11），用移液管移取20mL样品提取液（6.1）于氧化铝柱中，当液面 与氧化铝上表面相切时加入10mL甲醇淋洗，弃去流出液。然后用55mL甲醇洗脱，收集洗脱液于 250mL梨形瓶（4.13）中。在50℃水浴下旋转蒸发至干。用2mlL甲醇溶解残渣，转入15ml带螺旋 盖离心管（4.9），并用1ml甲醇洗涤裂形瓶，合并至15mL带螺旋盖离心管中。用氮气流吹至大 约0.5mL。 6.3衍生化 在上述试管中依次准确加人小mL0.1mol/L四硼酸钠溶液（3.6），0.25ml.正已烷（3.2）（使用气相 色谱串联质谱仪时加入1.00mL）.25μl吡啶（3.3）和50μL丙酸酐（3.4）。加塞，涡旋混合1min。在 4000r/min下离心5min，将上层正已烷移人进样小瓶中，供气相色谱-质谱或气相色谱串联质谱分析。 6.4测定 6.4.1 气相色谱质谱条件 6.4.1.1 1气相色谱条件 气相色谱条件如下： 色谱柱：毛细管柱DB-5MS，长30m，内径0.25mm，膜厚0.25um，或相当者； 升温程序：初始温度80℃，保持1min，以10℃/min升高到250℃，保持5min； c) 进样口温度：260℃； 载气：氢气，纯度≥99.999%； 2 SN/T0212.2—2017 载气流速：1.0mL/min； f) 进样模式：不分流进样，1min后开阀； g） 进样量：1μL。 6.4.1.2J 质谱条件 质谱条件如下： 接口温度：280℃； b） 离子源：电子轰击源（EI）； c) 电子能量：70eV； d) 离子源温度：230℃； e) 检测方式：选择离子监测（SIM)； f) 选择离子（m/）：191（100），193（65），195（11），其中191为定量离子。 6.4.2 气相色谱串联质谱条件 6.4.2.1 气相色谱条件 气相色谱条件如下： 色谱柱：毛细管柱DB-5MS：长30m，内径0.25mm，膜厚0.25μm，或相当者； 升温程序：初始温度50℃，保持1min，以20℃/min升高到250℃，保持5min； b） c） 进样口温度：260℃； d) 流速：1.0mL/min； 载气：氨气，纯度≥99.999%； e) f) 进样模式：不分流进样，1min后开阀； 进样量：1μL。 g） 6.4.2.2 串联质谱条件 串联质谱条件如下： a） 接口温度：280℃； b) 离子源：电子轰击源（EI） 碰撞能量：15eV； (P 离子源温度：230℃； e) 检测方式：多反应监测（MRM)； f) 离子对（m/）：191/128，191/156。 6.4.3色谱测定 根据样液中二氯二甲吡啶酚含量的情况，选定与样液中二氯二甲吡啶酚浓度相近的标准工作溶液。 标准工作溶液和样液中二氯二甲吡啶酚的响应值应在仪器检测的线性范围内。标准溶液和样液等体积 穿插进样测定。在上述气相色谱-质谱条件下（6.4.1.1），二氯二甲吡啶酚的保留时间约为11.60min，标 准物质的色谱图参见附录A中图A.1，全扫描质谱图参见图A.2，在上述气相色谱串联质谱条件下 （6.4.2.1），二氯二甲吡啶酚的保留时间约为9.1min，标准物质的色谱图参见图A.3。 6.4.4定性测定 按照气相色谱质谱条件测定样品和标准工作溶液，如果检测的色谱峰保留时间与标准品一致，定性 SN/T0212.2-2017 离子对的相对丰度，是用相对于最强离子丰度的强度百分比表示，应当与浓度相当标准工作溶液的相对 丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表1规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。 表1定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度/% >50 >20~50 >10~20 ≤10 ±15 ±20 ±50 允许的相对偏差/% ±10 6.4.5 空白实验 除不加试样外，按上述测定步骤进行。 6.5结果计算和表述 用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中二氯二甲吡啶酚的残留量，计算结果应扣除空白值： A.c.V X = ..( 1) A.·mR 式中： X 样品中二氯二甲吡啶酚含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； 样液中二氯二甲吡啶酚丙酯峰面积； A 标准工作溶液中二氯二甲吡啶酚浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； c V 样液最终定容体积，单位为毫升（mL)； A 标准工作溶液中二氮二甲吡啶酚丙酯峰面积； 试样量，单位为克（g）； m R 浓缩倍数。 7方法的测定低限(LOQ)和回收率 7.1测定低限 本方法二氟二甲吡啶酚的测定低限（LOQ)：鸡肉中的测定低限为5μg/kg，鸡肝中的测定低限为 10 μg/kg。 7.2 回收率 回收率的实验数据（在不同添加浓度范围内）见表2。 表2 不同基质中二氯二甲吡啶酚添加浓度和回收率范围 回收率/% 样品名称 添加浓度/（ug/kg） GC-MS GC-MS/MS 70.1~96.5 71.5~93.6 10 71.1~94.6 72.8~92.7 鸡肉 20 70.3~88.4 70.1~86.9 5 000 75.7~93.8 76.8~96.8 4 SN/T 0212.2—2017 表2（续） 回收率/% 样品名称 添加浓度/（μg/kg) GC-MS GC-MS/MS 10 70.5~91.2 70.2~90.8 15 73.4~93.5 72.7~90.1 鸡肝 30 76.5~96.7 73.9~91.4 15 000 75.3~93.1 78.6~96.4 5