QB ICS71.100.40 分类号：Y43 中华人民共和国轻工行业标准 QB/T54532019 口腔清洁护理用品 牙膏中香草酚含量 的测定 高效液相色谱法 Oral care and cleansing products -Determination of thymol in toothpastes High performance liquid chromatography 2019-12-24发布 2020-07-01实施 中华人民共和国工业和信息化部 发布 QB/T5453-2019 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国口腔护理用品标准化技术委员会牙膏分技术委员会（SAC/TC492/SC1）归口。 本标准主要起草单位：广州质量监督检测研究院、中国口腔清洁护理用品工业协会、黑龙江省轻工 科学研究院。 本标准主要起草人：谭建华、肖梅、陈意光、夏泽敏、刘文玉、王继才、汪毅、熊小婷、李鑫宇、 梁文耀、吴谦、席绍峰、郭长虹、吴玉銮 本标准为首次发布。 I QB/T5453—2019 口腔清洁护理用品牙膏中麝香草酚含量的测定高效液相色谱法 1范围 本标准规定了牙膏等口腔护理用品中麝香草酚的高效液相色谱测定方法的原理、试剂、仪器和设备、 分析步骤、计算结果、检出限和定量限、回收率和精密度、允许差。 本标准适用于牙膏等口腔护理用品中麝香草酚含量的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 试样经90%甲醇水溶液提取，离心过滤后，用高效液相色谱仪测定麝香草酚，以保留时间和紫外光 谱图定性，外标法定量。 4试剂 4.1除另有规定外，本试验用水均为GB/T6682中规定的一级水。 4.2麝香草酚对照品（CAS号：89-83-8）：纯度不小于98%。 4.3甲醇：色谱纯。 4.4乙晴：色谱纯。 4.5石英砂：25目～150目。 4.690%甲醇水溶液（体积分数）：准确量取900mL甲醇（4.3）至烧杯中，再加入100mL纯水，混 匀。 置于10mL容量瓶中，用90%甲醇水定容至刻度，混匀。 4.8麝香草酚标准工作溶液：用甲醇水溶液（4.6)将标准储备溶液（4.7)分别配成一系列浓度1.0μg/mL、 2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、25.0μg/mL、50.0μg/mL、100.0μg/mL的标准工作溶液。 5仪器和设备 5.1高效液相色谱仪：配二极管阵列检测器。 5.2分析天平：感量为0.1mg和0.01mg 5.3离心机：转速不低于10000r/min。 5.4涡旋振荡器。 5.5超声波清洗器。 5.6微孔滤膜：0.45μm，材质为尼龙。 6分析步骤 6.1试样处理 将牙膏试样挤去20mm后，称取约1g试样（精确至0.001g）置于25mL具塞比色管中，加入约1g 石英砂（4.5），再加入甲醇水溶液（4.6）25mL，涡旋混匀后超声提取15min，取适量提取液以 1 QB/T5453-2019 10000r/min离心5min，上清液经0.45μm滤膜（5.6）过滤，供高效液相色谱测定。 漱口水等液体样品，直接称取1g试样（精确至0.001g）置于 25mL具塞比色管中，用甲醇水溶液（4.6） 定容至刻度，混匀，过滤， 供高效液相色谱测定 6.2参考色谱条件 参考色谱条件如下 a）色谱柱：g8柱（4. mmx250mm，5μm 或等 效色谱柱； b) 流动相： 乙晴/水一 （体积分数） c) 流量：1.0mL/min 检测波长 276nm e）柱温：30 f）进样量： 10μL 6.3测定 6.3.1标准曲线绘制 分别将标准工 非溶液（4.8）注入高效液相色谱仪，在（ 【6.2）的色谱条件下测定标准溶液，以浓度 为横坐标，峰面积 为纵坐标， 绘制标准曲线 6.3.2样品测定 将按（6.1）处 少理好的待测试样溶液注入高效液相色谱仪，在（6.2）的免谱条件 下进行测定，根据 保留时间和紫外吸收光谱图定性，采用外标法定量。麝香草酚的紫外吸收光谱图见附 附录A中的图A.3。 试样溶液中麝 香草酚的响应值应在标准曲线的线性范围内，超过线性范围则 希释后再进行分析。 7计算结果 试样中麝香草酚的含量X按公式（ 10计算： X=cxVxf ... (1) 式中： X 试样 香草酚的含量，单位为毫克每千克 (mg/kg） 试 溶液中 c 香草酚浓度 单位为微克每毫开 (μg/mL) 圭容体积 单位为毫开（mL）； 稀释倍数 不稀释 寸为1； f m 试样质量 单位为克（g）。 8检出限和定量限 麝香草酚的检出限为10m/kg：定量限为 9 回收率和精密度 在添加浓度25mg/kg～500mg/kg的浓度范围内，方法的回收率在92.0%／101.8%之内，相对标准偏 差小于3.2%。 10允许差 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%，取其算术平均值 作为测定结果。 2 QB/T 54532019 附录A （资料性附录） 麝香草酚标准溶液及阳性样品HPLC色谱图及紫外吸收光谱图 麝香草酚-6.853 0. 6 10 12 14 时间/min 图A.1 香草酚标准溶液HPLC色谱图 90 30. 腐香草酚 0 2 4 6 8 10 12 时间/min 图A.2 2阳性样品的HPLC色谱图 3 QB/T5453-2019 吸光度/mAU 300 320 340 240 280 360 220 280 波长/nm 图A.3/ 麝香草酚紫外吸收光谱图