ICS71.100.40 QB 分类号：Y43 备案号：67504-2019 中华人民共和国轻工行业标准 QB/T5346-2018 口腔清洁护理用品牙膏中叶酸含量的测定 高效液相色谱法 Oral care and cleansing productsDetermination of folic acid in toothpaste- High performance liquid chromatography 2018-12-21发布 2019-07-01实施 中华人民共和国工业和信息化部 发布 QB/T5346-2018 前言 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国口腔护理用品标准化技术委员会牙膏分技术委员会（SAC/TC492/SC1）归口。 本标准起草单位：北京斯利安药业有限公司、广州质量监督检测研究院、浙江方圆检测集团股份有 限公司、黑龙江省轻工科学研究院。 本标准主要起草人：易斌、王曙宾、沙欧、胡丹、杨云、王继才、刘暄、路崴、吴智慧。 本标准为首次发布。 QB/T5346-2018 口腔清洁护理用品牙膏中叶酸含量的测定高效液相色谱法 1范围 本标准规定了牙膏中叶酸含量的测定方法。 本标准适用于牙膏、口腔清洁护理液、牙粉等口腔护理用品中叶酸含量的测定 本标准叶酸检出浓度为0.01μg/mL，定量浓度为0.03μg/mL；当取样量为1.0g时，本方法的检出 限为1.0mg/kg，定量限为3.0mg/kg。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。 3原理 将牙膏用稀释液分散，用超声波提取其中的叶酸成分，离心分离，滤膜过滤后用高效液相色谱仪分 析测定，通过峰面积外标法定量计算。 4试验方法 4.1一般规定 所用试剂除特殊规定外均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.2仪器和设备 仪器和设备的配置，按下面要求进行： a）高效液相色谱仪（配有紫外检测器或光电二极管阵列检测）； C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），或相当的色谱柱； c) 磁力搅拌器； d) 超声波清洗器； 离心机； 电子天平，精确至0.0001g; f) g) 酸度计：分辨率0.01pH； 0.45μm滤膜； i） SPEC18固相萃取柱（300mg） 注：固相萃取适用于部分存在基质干扰的样品，处理样品时，可先不采用固相萃取，若有干扰时再采取此方式。 4.3试剂 标准品、试剂及配制按下面要求进行： a）叶酸对照品：具有证书的标准物质，含量≥90.0%； b）乙腈（HPLC级）； c）25%氨水（分析纯）； d）磷酸二氢钾（分析纯）； e）5%氨水：用量筒量取4.3c）氨水溶液40mL于2L容量瓶中，用超纯水定容至刻度，摇匀即可； QB/T5346-2018 f）流动相：准确称取磷酸二氢钾13.609g，用水定容至2L，配制得到0.05mol/L磷酸二氢钾溶 液，用氢氧化钾溶液或磷酸在经校正的酸度计下调节pH-6.0。将磷酸二氢钾溶液与乙腈按体 积比为95：5混合，滤膜过滤 4.4测定步骤 4.4.1色谱条件 a）液相色谱条件如表 所示。 表1 液相色谱条件 参数 设定值 紫外检测波长/nm 284 进样量 LL 流量/（mL /min) 见表 运行时间 /min 20 柱温/ b）流动相采用梯度流速法，见表2。 表2流速梯度条件 时间/min 流量/（mL/min） 0 1.00 8 1.00 9 1.23 17 1.2 1.00 1.00 20 4.4.2标准储备液 精密称取叶酸对照品0.01g（精确至0.0001g），置于100mL棕色容量瓶中，用5%氨水（4.3e）） 溶液稀释定容至刻度，作为含叶酸100μg/mL标准储备液。 4.4.3标准工作液 分别取标准储备液0.1mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL，用5%氨水（4.3））溶液稀释， 配制成0.1μg/mL、 、0.5ug/mL、1.0ug/mL、2.0μg/mL、4.0μg/mL的标准工作溶液。 4.4.4样品的处理 精密称取牙膏样品1g（精确至0.0001g），于100mL棕色容量瓶中，用5%氨水（4.3e））溶液定 容。磁力搅拌15min， 超声处理10min后，将样品溶液以不小于4000r/min的速度离心分离15min。冷 却至室温后，上清液经SPEC18固相萃取柱（300mg）处理与0.45μum滤膜过滤，滤液进样分析。 4.4.5标准溶液的测定 准确吸取4.4.3制备的标准工作液10uL，分别注入液相色谱仪，按照表1、表2的色谱条件进行测定。 以叶酸的含量为X轴，以其相应的峰面积为Y轴，绘制标准曲线。 4.4.6样品溶液的测定 准确吸取10μL样品溶液，注入液相色谱仪测定其峰面积，由标准曲线查找出试样溶液中叶酸的浓 度。 2 QB/T5346-2018 4.4.7结果计算 按式（1）计算样品中叶酸的含量（X）： X=CxVxK （1） m 式中： X一一牙膏中叶酸含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； 由标准曲线查出试样溶液中叶酸的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； V——样品最终定容体积，单位为毫升（mL）； K一—标准品的纯度，单位为质量百分数（%）； m一—试样质量，单位为克（g）。 4.4.8精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。 4.4.9加标回收率 色谱条件下，以不含叶酸的牙膏样品加标，进样分析，回收率在95.0%~102.7%之间。 QB/T5346-2018 附录A （资料性附录） 液相色谱参考谱图 0.002 0.0024 响应值/AU 叶酸 0.0024 0 002 0.020 0.0018 0.0018 0.0014 0.0012 0.0010 0.000 0.000 0.004 0.000 保留时间/min 图A.1 叶酸对照品色谱图 响应值/AU 0.002 叶酸 0.01 0.0010 0.001 Z1000 0.0010 0.0008 0.000 0.000 0.0005 保留时间/min 图A.2叶酸牙膏样品色谱图 QB/T 5346-2018 中华人民共和国 轻工行业标准 口腔清洁护理用品牙膏中叶酸含量的 测定高效液相色谱法 QB/T5346-2018 中国轻工业出版社出版发行 地址：北京东长安街6号 邮政编码：100740 发行电话：（010）85119832/38 网址：http://www.chlip.com.cn Email:[email protected] 轻工业标准化编辑出版委员会编辑 地址：北京西城区月坛北小街6号院 邮政编码：100037 电话：（010)68049923 版权所有侵权必究 书号：155019·5336 印数：1-200册定价：25.00元