ICS 67. 160. 10 X62 备案号： QB 中华人民共和国轻工行业标准 QB/T5299—XXXX 葡萄酒中甘油稳定碳同位素比值（13C/12C) 测定方法液相色谱联用稳定同位素比值质 谱法 Determination of the 13C/12C isotope ratio of glycerol in wines-Method using Liquid Chromatography coupled to Isotope Ratio Mass Spectrometry 报批稿 XXXX-XX-XX 发布 XXXX-XX-XX实施 发布 中华人民共和国工业与信息化部 XXXX—XXXXX 1/XX 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国食品发酵标准化中心归口。 本标准起草单位：中国食品发酵工业研究院有限公司、北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心、 新疆中信国安葡萄酒业有限公司、江南大学。 本标准主要起草人：钟其顶、王道兵、韩深、毛健、赵玉玲、岳红卫。 本标准为首次发布。 I XX/T XXXXX—XXXX 葡萄酒中甘油稳定碳同位素比值（13C/12c）测定方法液相色谱联用 稳定同位素比值质谱法 1范围 本标准规定了应用液相色谱-稳定同位素比值质谱法测定甘油稳定碳同位素比值（13C/12C）的方法， 本标准适用于葡萄酒中甘油稳定碳同位素比值（13c/2c）的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再 现性的基本方法 GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法 3符号、缩略语及含义 下列符号和缩略语适用于本文件。 3.113c/2C：稳定碳同位素比值，是稳定碳同位素13c与'2c的原子丰度之比。 3.2"3C：样品的稳定碳同位素比值相对于参考物质的稳定碳同位素比值的千分差。 3.3VPDB：ViennaPee-DeeBelemnite，美国南卡罗来纳州白垩纪皮狄组层位中的拟箭石化石，是稳 定碳同位素比值的国际基准物质。 3.4LC-IRMS：LiquidChromatographycoupledtoIsotopeRatioMassSpectrometry，液相色谱联用稳定 同位素比值质谱仪。 4原理 用LC-IRMS测定样品中甘油经分离纯化后转化成的二氧化碳中的稳定碳同位素比值，并通过公式 计算得出甘油的稳定碳同位素比值，记作3l3CvPDB。 5试剂和材料 除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682-2008规定的一级水。 5.1参考物质 1 XX/T xxxXX—XxXx 可选择国际原子能机构或全国标准物质管理委员会认定/认可，或选择同类获得国际/国家认可的参 考物质，根据实际工作需要选择其中一种或几种，参见附录A。 5.2氢气：纯度不应小于99.999%。 5.3二氧化碳工作标准气：纯度不应小于99.99%。 5.4浓硫酸。 5.5硫代硫酸钠：纯度不应小于99%。 5.6磷酸：纯度不应小于99%。 5.7甘油：纯度不应小于99%。 6 仪器和设备 6.1液相色谱-稳定同位素比值质谱仪。 6.2溶剂过滤器。 6.3分析天平。 6.4水系滤膜：0.22um。 6.5移液枪：100μL。 75 分析步骤 7.1样品处理 用水将葡萄酒样品稀释至甘油含量0.3g/L~0.4g/L，样品溶液用水系滤膜过滤（6.4）后保存待用。 7.2工作标准溶液配制 选择sl3CvPDB值分布范围为-35%~-5%（定值方法参见附录B）的甘油（5.7）作为工作标准物质， 称取0.02g甘油并用水稀释至甘油含量0.3g/L~0.4g/L，用水系滤膜过滤后保存待用。 7.3试剂配制 7.3.10.0005mol/L硫酸溶液：移取27μL浓硫酸（5.4），用水定容至1000mL，混匀后用溶剂过滤器 （6.2）过滤。 7.3.20.25mol/L硫代硫酸钠溶液：称取39.5g硫代硫酸钠（5.5），用水溶解并定容至500mL，混匀 后用溶剂过滤器过滤。 7.3.30.5mol/L磷酸溶液：称取49.0g磷酸（5.6），用水溶解并定容至500mL，混匀后用溶剂过滤器 过滤。 7.4参考色谱条件 7.4.1色 色谱柱：H弱阳离子交换色谱柱（300mm×7.7mm×8μm）或性能相当者。 2 XX/T xxXXX—XXXx 7.4.2流动相：0.0005mol/L硫酸溶液（7.3.1）。 7.4.3流量：300μL/min。 7.4.4色谱柱温度：60℃。 7.5反应炉条件 7.5.1全 氧化剂：0.25mol/L硫代硫酸钠溶液（7.3.2），流速50uL/min。 7.5.2酉 酸剂：0.5mol/L磷酸溶液（7.3.3），流速50μL/min。 7.5.3 反应炉温度：99.7℃。 7.6测定 7.6.1 仪器准备 7.6.1.1LC-IRMS稳定性检查：连续测定同一个工作标准溶液，三次测量结果sl3C的标准偏差≤0.2%o 为合格。 7.6.1.2LC-IRMS线性检查：取s13CvPDB值已知但不同的甘油工作标准溶液，分别测定后对比测定值 al3C和给定值sl3CvpDB，测定值与给定值的线性相关系数R≥0.99为合格。 7.6.2样品分析 样品置于LC-IRMS的进样盘中，取10μL样品按照7.4和7.5中的条件进行样品分析。 7.6.3分析序列 采用两点标准漂移校正模式安排分析序列，测试序列的开始和结束各测定三次参考物质或甘油工作 标准物质，序列中每隔六次至十次测试后应再次测定参考物质或甘油工作标准物质。 8计算 8.1分析结果的表述 样品中甘油的碳同位素组成以其对标准物质中相应同位素比值的干分差表述，按公式（1）计算： (1) (13 C/12 C)sT 式中： 一样品中甘油转化的CO2气体13c/2c测定结果相对于二氧化碳工作标准气13c/2c测定结果的 千分差； (1"c/l2C)sA——样品中甘油转化的CO2的"3c//2C测定结果； (13c/2C)sT- -二氧化碳工作标准气的13c/12c测定结果。 8.2结果计算 所测的碳同位素组成结果应校准到国际标准VPDB值。可根据7.6.3中甘油工作标准物质的测定值 和给定值建立回归方程，通过回归方程计算中得出葡萄酒甘油s3CvPDB值，或按公式（2）计算： 3 XXxXxXXxX 1/XX 式中： 13CvPDB（%） 一一样品相对VPDB的s13C（%）同位素值。 Sl3CsA"RM (%o) 样品相对工作标准溶液的l3℃（%）同位素值。 S13CRM-VPDB (%0) 一工作标准溶液相对VPDB的s3C（%）同位素值 结果保留至小数点后两位。 9 精密度 本标准的精密度数据按照GB/T6379.2的规定确定，重复性和再现性的值以95%的可信度计算。 9.1重复性限 在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限（r）：r=0.40%o。 如果差值超过重复性限（r），应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。 9. 2 再现性限 在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限（R）：R=0.60%0。 4 XX/TXXXXX—XXXX 附录A （资料性附录） 参考物质 表A.1参考物质示例 参考物质编号 13CpDB(%) 认定/认可机构 IAEA-CH-6 -10.40±0.20 国际原子能机构 USGS40 26.39±0.09 美国国家标准与技术研究院 GBW04407 -22.43±0.07 全国标准物质管理委员会 GBW04408 -36.91±0.10 全国标准物质管理委员会 5