QB ICS 71.100.70 分类号：Y42 备案号：65904-2018 中华人民共和国轻工行业标准 QB/T52922018 化妆品中禁用物质维生素K1的测定 高效液相色谱法 Determination ofprohibited Vitamin Kiin cosmetics High performance liquid chromatography 2018-10-22发布 2019-04-01实施 中华人民共和国工业和信息化部 发布 QB/T5292-2018 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会（SAC/TC257）归口。 本标准起草单位：广州质量监督检测研究院[国家化妆品质量监督检验中心（广州）]、广州市科能 化妆品科研有限公司、广州锦同生物科技有限公司、广州市娇兰化妆品有限公司、广州栋方生物科技股 份有限公司、广州市花安堂生物科技有限公司、广州卡迪莲化妆品有限公司、广州市洁宝日用品有限公 司。 本标准主要起草人：李慧勇、谭建华、王继才、刘冬虹、熊小婷、夏泽敏、席绍峰、郭长虹、 汪毅、李鑫宇、杨云、黎永锦、廖惠媚、梁嘉莹、杨培、陈意光。 本标准为首次发布。 QB/T5292-2018 引言 本标准的被测物质是我国《化妆品安全技术规范（2015年版）》规定的禁用物质。 禁用物质是指不能作为化妆品生产原料即组分添加到化妆品中的物质。《化妆品安全技术规范（2015 年版）》规定：若技术上无法避免禁用物质作为杂质带入化妆品时，应进行安全性风险评估，确保在正 常、合理及可预见的使用条件下不得对人体健康产生危害。 目前我国尚未规定这些物质的限量值，本标准的制定，仅对化妆品中测定这些物质提供检测方法。 II QB/T5292-2018 化妆品中禁用物质维生素K1的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了化妆品中维生素K1的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于化妆品中维生素K1的测定。 本标准方法对维生素K1的检出限为1.5mg/kg，定量限为4.0mg/kg。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 样品经乙醇-正已烷混合溶液直接提取，采用高效液相色谱-二极管阵列检测器进行测定，外标法定 量。 4试剂 除非另有规定，所用试剂均为分析纯。水为GB/T6682规定的一级水。 4.1 维生素K1标准品：INCI名称为Phytonadione，分子式为C3:H46O2，CAS号为84-80-0/ 81818-54-4，相对分子质量为450.7，纯度大于99%，结构式参见附录A图A.1。 4.2异丙醇：色谱纯。 4.3甲醇：色谱纯。 4.4丙酮：色谱纯 4.5 乙醇：色谱纯。 4.6 正已烷：色谱纯。 4.7 混合溶液：乙醇（4.5）+正已烷（4.6）=4+1（体积比）。 4.8 维生素K1标准储备液：称取维生素K1标准品10mg（精确至0.01mg）于10mL棕色容量瓶中， 加少量丙酮（4.4）溶解后，加入乙醇（4.5），定容，配成1g/L的标准储备液，该溶液于-18℃避光保 存。 4.9 维生素K1标准工作溶液：移取适当标准储备液（4.8），加入混合溶液（4.7），定容，配制成 0.2mg/L、0.5mg/L、2.0mg/L、5.0mg/L、20.0mg/L的系列标准工作溶液，于4℃避光保存。 5仪器和设备 5.1高 高效液相色谱仪，配二极管阵列检测器。 5.2超声波提取仪。 5.3分析天平：感量0.1mg和0.01mg。 5.4涡旋振荡器。 5.5 高速离心机：转速不低于10000r/min。 5.6 微孔滤膜：0.45μm，有机相。 1 QB/T5292-2018 6分析步骤 6.1试样处理 称取试样0.5g（精确至0.001g）于10mL具塞棕色比色管中，加入混合溶液（4.7）至刻度，涡旋 混匀，超声10min。取部分溶液转移至10mL具塞塑料离心管 中，以10000r/min离心10min，上清液经 0.45μm微孔滤膜过滤，供高效液相色谱测定。 测定条件 6.2 高效液相色谱测定参考条件 a) 色谱柱： C18,250 0mmx4.6mm，5μm； b) 流动相： 甲醇+异丙醇=85+15（体积比）： 流量：1.0mL/min c) d) 检测波长！ 271nm（部分精油样品可能在271nm处存在干扰，此时应选取检测波长330nm进 行测定） e) 柱温：40C； f) 进样体积！ 10μL 6.3标准曲线的绘制 将维生素K1标准工作溶液（4.8）按测定条 （6.2）进行测定， 出以峰面积为纵坐标，标准溶 录A图A.2。 液浓度（mg/L）为横坐标的标准工 电谱图参见附 6.4试样测定 将试样溶液按测定条件（62）进行测定，记录色谱峰的保留时间和峰面积，用外标法定量。样品 试样溶液中的被测物的响应值在仪器测定的线性范围之内。被测物含量高的试样可取适量试样溶液用流 动相稀释后进行测定。必要时，阳性样品应 谱进行确认试验，参见附录B。 6.5平行试验 按上述步骤，对同一样品进行平行实验测定。 结果计算 7 结果按公式（1） 让算 算结果应扣除空白值 C×V×K×1000 mx1000 式中： X 试样中维生素K1含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； 夜中维生素K1的浓度，单位为毫克每升 从标准工作曲线 查出的栏 （mg/L) 试样定容体积， V. 位为 K- 稀释倍数； 试样质量， 单位为克（g） m- 计算结果精确至小数点后1位数字。 回收率和精密度 在添加浓度4mg/kg~400mg/kg的范围内，回收率在91.3%~106.0%，相对标准偏差在0.4%~3.9%。 9允许差 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。 2 QB/T52922018 附录A （资料性附录） 维生素K1结构式和液相色谱图 维生素K1化学结构式参见图A.1，维生素K1标准溶液的液相色谱图参见图A.2。 HC.CH3 0 H3C CH3 CH3 图A.1 维生素K1化学结构式 吸光度mAU 12 10 1 81 维生素K1 61 41 01 10 时间min 2 4 8 图A.2维生素K1标准溶液的液相色谱图 3 QB/T5292—2018 附录B （资料性附录） 确认实验 B.1 液相色谱条件 液相色谱条件如下： a) 色谱柱：C18，2.6μm，100mmx4.6mm（内径），或相当者； b) 流动相：100%甲醇； c) 流量：0.6mL/min; 柱温：30℃； d) 进样体积：5μL。 e) B. 2 质谱条件 质谱条件如下： a) 离子源：大气压化学电离源（APCI）； b) 离子化模式：正离子模式； c) 采集模式：多反应监测（MRM）； (P 气帘气压力（CUR）：1.38×10°Pa； e) 碰撞气压力（CAD）：4.83×10*Pa； f) 放电电流（NC）：1.50μA； g) 离子源温度（TEM）：400.00C； h) 雾化气压力（GS1）：2.07×10°Pa； i) 入口电压（EP）：10.00V； j) 碰撞室入口电压（CXP）：10.00V。 B.3定性检测 进行试样测定时，将样液适当稀释，按液相色谱-质谱条件测定样液和标准工作溶液，如果所选择 的离子均出现，而且所选择的离子比与标准物质的相对丰度一致，允许偏差不超过表B.1规定的范围， 则可判断样品中含有维生素K1。维生素K1的多反应监测（MRM）质谱图参见图B.1。 表B.1维生素K1质谱分析参数 定量离子对 定性离子对 去簇电压 碰撞气能量 相对离子丰度 允许相对偏差 化合物 (m/z) (m/z) DP/V CE/eV / (%) / (%) 维生素K1 451.3/187.1 451.3/197.1 70 30, 35 100,15 30