ICS 71.100.40 QB 分类号：Y43 备案号：65157-2018 中华人民共和国轻工行业标准 QB/T5289-2018 蜂胶牙膏中白杨素含量的测定 高效液相色谱法 Determination of chrysin in propolis toothpaste - high performance liquid chromatography 2018-07-04发布 2019-01-01实施 中华人民共和国工业和信息化部 发布 QB/T5289-2018 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国口腔护理用品标准化技术委员会牙膏分技术委员会（SAC/TC492/SC1）归口。 本标准起草单位：福建爱洁丽日化有限公司、浙江方圆检测集团股份有限公司、广州质量监督检测 研究院、国家轻工业牙膏蜡制品质量监督检测中心。 本标准主要起草人：杨俊武、杨铭、郭长虹、刘家滔、刘文玉。 本标准为首次发布。 I QB/T5289-—2018 蜂胶牙膏中白杨素含量的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了蜂胶牙膏中自杨素含量测定方法的原理 试验方法、精密度、 检出浓度和定量浓度。 本标准适用于蜂胶牙膏中白杨素的含量的测定 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单） 适用于本文件 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3方法原理 取牙膏以乙醇振荡溶解，超声波提取其中的蜂胶特征性活性物（白杨素） ，离心过滤处理，取清液 用带二极管阵列检测器的高效液相色谱仪分析测定， 通过峰面积 脉法定量计算白杨素含量。 试验方法 4 4.1一般规定 除非另有说明，所用试剂均为色谱纯，水为符合GB/T6682的一级水， 4.2 仪器和设备 a) 高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器， b) C18色谱柱（250mm×4.6mm，5um），或相当的色谱 c) 0.45μm水相过滤膜； (P 0.45μm有机相过滤膜： e) 分析天平：精确至0.0001g f) 超声波仪； g) 振荡器； h) 高速离心机： 转速不小于4000r/min。 试剂 4.3 a) 白杨素对照品， 纯度不小于98%； b) 甲醇； c) 乙醇； d) 磷酸； 0.15%磷酸水溶液：移取1.5mL磷酸（4.3.4）至1L容量瓶中，用水定容，用0.45μm水相过 (e 滤膜过滤。 4.4测定步骤 4.4.1 色谱条件 a) 流动相：甲醇、0.15%磷酸水溶液；分离条件如表1所示； b) 流量：1.0mL/min； c) 柱温：30℃； (P 检测器：二极管阵列检测器； (0 检测波长：270nm； 1 QB/T5289-2018 进样量：10μL。 f) 时间/min 甲醇 0.15%磷酸水溶液 0~24 64 36 24~25 75 25 25~32 25 32~33 64 36 33~45 64 36 4.4.2标准贮备液 称取白杨素对照品10mg，精确至0.000g，置于10mL棕色容量瓶中，以甲醇定容，混匀并使之溶 解。此溶液浓度为mg/mL 置于2℃~4℃保存。 保存时间为1个月。 4.4.3标准工作溶液 移取上述白杨素标准贮备液适量，以甲醇稀释配制标准工作系列溶液，浓度分别为1mg/L、5mg/L、 10mg/L、50mg/L、100mg/L。 4.4.4样品溶液的制备 先将牙膏样品挤去大约20mm，然后称取牙膏样品约10g于棕色容量瓶中（精确至0.0001g）， 加入约25mL水，分散完全后，用乙醇定容至100mL，磁力搅拌至均匀，超声处理20min后，4000r/min 离心分离15min，上清液用2mL的一次性注射器吸取，经0.45um微孔滤膜过滤后待测。 4.4.5标准溶液和样品溶液的测定 准确吸取上述白杨素标准工作溶液各10叫L，分别注入液相色谱仪，按色谱条件（4.4.1）进行测定， 谱图参照附录A中图A.1和A.2。以白杨素的含量为X轴，以其相应的峰面积为Y轴，绘制标准曲线。 准确吸取10μL样品溶液，注入液相色谱仪，测定其白杨素峰面积，由标准曲线计算试样溶液中白 杨素的浓度。 4.4.6结果计算 按公式（1）计算样品中白杨素的含量（） cV X=- .....(1) m 式中： X—一牙膏中白杨素含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； 由标准曲线查出试样溶液 中白杨素的浓度，单位为微克每毫升（ug/mL） V样品最终定容体积，单位为毫升（mL） 单位为克（g）。 m- 试样质量 精密度、检出浓度和定量浓度 5 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。 白杨素含量的检出浓度为0.1mg/L，定量浓度为0.3mg/L 2 QB/T5289-2018 附录A （资料性附录） 液相色谱参考谱图 mAU 0nm4nm(1.00) 100 75 50 25 0- 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0 27.5 min 图A.1 白杨素对照品色谱图 mAU 209 125 266 100 75 50 25 200 250 300 350 400 450 nm 图A.2 白杨素对照品吸收光谱图 3 QB/T5289-2018 中华人民共和 国 轻工行业标准 蜂胶牙膏中白杨素含量的测定 高效液相色谱法 QB/T5289-2018 * 中国轻工业出版社出版发行 地址：北京东长安街6号 邮政编码：100740 发行电话：（010）85119832/38 网址：http：//www.chlip.com.cn Email:[email protected] 轻工业标准化编辑出版委员会编辑 地址：北京西城区月坛北小街6号院 邮政编码：100037 电话：(010)68049923 * 版权所有1 侵权必究 书号：155019·5227 印数：1-200册 定价：22.00元 QB/T5289-2018 中华人民共和 国 轻工行业标准 蜂胶牙膏中白杨素含量的测定 高效液相色谱法 QB/T5289-2018 * 中国轻工业出版社出版发行 地址：北京东长安街6号 邮政编码：100740 发行电话：（010）85119832/38 网址：http：//www.chlip.com.cn Email:[email protected] 轻工业标准化编辑出版委员会编辑 地址：北京西城区月坛北小街6号院 邮政编码：100037 电话：(010)68049923 * 版权所有1 侵权必究 书号：155019·5227 印数：1-200册 定价：22.00元