ICS 71.100.40 QB 分类号：Y43 备案号：62762-2018 中华人民共和国轻工行业标准 QB/T5220-2018 口腔护理用品中精氢酸含量的测定方法 高效液相色谱法 Determination of dipotassium arginine in oral care products high performance liquid chromatography 2018-02-24发布 2018-07-01实施 中华人民共和国工业和信息化部 发布 QB/T52202018 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国口腔护理用品标准化技术委员会牙膏分技术委员会（SAC/TC492/SC1）归口。 本标准起草单位：高露洁棕榄（中国）有限公司、国家轻工业牙膏蜡制品检测中心、广州质量监督 检测研究院、好来化工（中山）有限公司。 本标准主要起草人：朱文渊、宋伟、严鹏、谢柳青、赵姗姗、刘文玉、郭长虹、何琪莹。 本标准为首次发布。 QB/T5220-2018 口腔护理用品中精氨酸含量的测定方法高效液相色谱法 1范围 本标准规定了高效液相色谱法测定牙膏中精氨酸的方法要点、试剂与标准物质、仪器、分析步骤、 结果计算、回收率、标准偏差和允许差。 本标准适用于牙膏、漱口水、牙粉和精氨酸碳酸氢盐原料中精氨酸含量的测定。 本标准精氨酸的方法检出浓度为0.5mg/L，定量浓度为2mg/L；若取样品0.2g，检出限为250mg/kg， 定量限为1000mg/kg。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 3方法要点 将样品用含有三氟乙酸和硫酸钠的水进行分散，超声波提取其中的精氨酸成分，样品过滤后，用含 有酸性离子对基团的反相混合模式色谱柱进行色谱分离，通过紫外检测器检测，外标法通过峰面积进行 定量计算。 4试剂与标准物质 4.1一般规定 除非另有说明，在分析中仅适用确认为分析纯的试剂和水为GB/T6682一2008规定的一级水。 4.2试剂 4.2.1乙腈，HPLC级。 4.2.2硫酸，HPLC级。 4.2.310%硫酸溶液：取18.4g硫酸，定容至100mL。 4.2.4三氟乙酸（TFA），HPLC级。 4.2.5无水硫酸钠，优级纯。 4.2.6L-精氨酸标准品，USP/EP级或等同的。 4.3稀释液的制备 4.3.1溶液A 体积分数为1%的三氟乙酸与0.02g/mL硫酸钠水溶液混合。用于稀释标准品。例如，将10mL三氟 乙酸，20g无水硫酸钠用500mL水溶解，并用水定容至1000mL，混合均匀。 4.3.2溶液B 体积分数为2%的三氟乙酸与0.04g/mL硫酸钠水溶液混合。用于稀释样品。例如，将40mL三氟乙 酸，80g无水硫酸钠用1000mL水溶解，并用水定容至2000mL，混合均匀。 4.4流动相 将乙腈、水和10%硫酸（4.2.3），按700：292.5：7.5（体积比）比例混合，真空过滤备用。 4.5标准溶液的准备 准确称取一定量的L-精氨酸标准品，用溶液A（4.3.1）配制成浓度10mg/L、20mg/L、50mg/L、 100mg/L、200mg/L、300mg/L的标准溶液。 1 QB/T5220-2018 5仪器与设备 5.1 高效液相色谱仪，配紫外检测器。 5.2色谱柱，Primesep100)，5μm，3.2mm×150mm或相当的色谱柱 5.3磁力搅拌器。 5.4超声波清洗器 5.5离心机。 分析天平：精度0.0001g。 5.7 过滤膜，0.45um，PTFE材质。 5.8SPEC18小柱，300mg。 6分析步骤 6.1# 样品前处理 6.1.1精氨酸碳酸氢盐原料 准确称量（精确到0.0001g）足够精氨酸碳酸氢盐原料（使待测精氨酸浓度在标准曲线范围以内） 到200mL容量瓶中，力 加入100mL溶液B（4.3.2）溶解，并用水定容到刻度。加入搅拌子搅拌至少15min， 直到样品完全溶解！ 将样品经0.45um滤膜过滤，滤液作为待测样液备用。 6.1.2牙膏样品 准确称量（精确到0.0001g）足够牙膏样品（使待测精氨酸浓度在标准曲线范围以内）到100mL 容量瓶中，加入10mL溶液B（4.3.2）并加入搅拌子搅拌将样品分散完金，然后在搅拌条件下加入40mL 溶液B，搅拌至少10min，再超声5min。取走搅拌子并用水定容到刻度，如果有大量泡沫，可加入几滴 乙腈，再加入搅拌子搅拌至少15min。将样品经SPEC18小柱（5.8）种过滤膜（5.7），过滤，滤液作为 待测样液备用。 6.1.3漱口水样品 准确称量（0.0001g）足够漱口水样品（使待测精氨酸浓度在标准曲线范围以内）到100mL容量瓶 中，加入50mL溶液B（4.3.2）用水定容到刻度，加入搅拌子搅拌至少15min，直到样品完全溶解。将 样品经0.45um滤膜过滤，滤液作为待测样液备用 6.2测定 6.2.1色谱条件 6.2.1.1液相色谱条件 按照表1设定液相色谱条件。 表1 液相色谱条件 仪器参数 设定值 205 紫外检测器波长/nm 进样量/μL 流量/（mL/min) 1.0 运行时间/min 5 柱温/℃ 30 色谱柱Primesep100是美国SIELC公司提供的产品的商品名，给出的仪器条件是按照此款色谱柱优化，给出这 1） 一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用 这些等效产品。 2 QB/T5220-2018 6.2.1.2色谱柱清洗程序 可用流动相保存色谱柱，为延长色谱柱使用寿命，可用100%乙睛反冲色谱柱60min保存。注意此 色谱柱不能接触含有酒精类的流动相。 6.2.2标准曲线 准确吸取4.5制备的标准工作液5uL，分别注入高效液相色谱仪，按照6.2.1的色谱条件及4.4的流动 相条件进行测定，以精氨酸的浓度为X轴，其相应的峰面积为Y轴，绘制标准工作曲线。 精氨酸标准溶液的液相色谱图，参照附录中的图A.1。 6.2.3测定 准确吸取5μL经6.1处理的试样溶液，洋入高效液相色谱仪测定精氨酸的峰面积， 由标准工作曲线 找出试样溶液中精氨酸的浓度。 试样溶液的液相色谱图，参照附录A中的图A.2。 7结果计算 试样中精氨酸的含量X（%）按式（1）计算： CxVxNxK X100. (1) X m×1000×1000 式中： 试样中精氨酸的含量，单位为质量分数(%)； c 试样溶液中对应的对照品的浓度，单位为微克每毫升(ug/mL)； V 试样定容体积，单位为毫升(mL); N 稀释倍数； K 对照品中精氨酸的纯度(%)； 试样的质量，单位为克（g)。 m 8回收率 精氨酸在添加浓度4.0μg/mL~46.0μg/mL范围内，本标准方法的回收率为97.3%~104.0%。 9标准偏差 本标准方法的相对标准偏差小于5%（n=6）。 10允许差 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算数平均值的10%！取其算术平均值 作为测定结果。 3 QB/T5220-2018 附录A （资料性附录） 液相色谱参考谱图 211 :1 23 23 清氨设 3::2 : 7 :2: 32 min 图A.1 对照品液相色谱图 0065 0075 0 070 0.C65 O C55 G t G tco 0 C2 0 020- 015 0010- G GCO -0 C05 -0 010 4 49 iin 图A.2 牙膏试样液相色谱 QB/T5220-2018