ICS 11.080 C 50 WS 中华人民共和国卫生行业标准 WS/T 686—2020 消毒剂与抗抑菌剂中抗病毒药物检测方法 与评价要求 Analytical method and evaluation requirements of antiviral drugs in disinfectant and antibacterial and ba cteriostatic agents 2020 - 07 - 20发布 2021 - 02 - 01实施 中华人民共和国国家卫生健康委员会 发布 WS/T 686—2020 I 前 言 本标准按照 GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准起草单位： 北京市疾病预防控制中心、中国计量科学研究院、北京市理化分析测试中心、中 国食品药品检定研究院、 江苏省疾病预防控制中心、 中国疾病预防控制中心、 山东省疾病预防控制中心 。 本标准主要起草人： 丁晓静、王萍、杨奕、高运华、赵新颖、勾新磊、牛夏梦、李莉、李硕、李洁、 赵珊、徐燕、 李放、张流波、李炎、崔树玉、苏冠民 。 WS/T 686—2020 1 消毒剂与抗抑菌剂中抗病毒药物检测方法与评价要求 1 范围 本标准规定了消毒剂与抗抑菌剂中抗病毒药物的检测方法和评价要求。 本标准适用于消毒剂与抗抑菌剂中更昔洛韦、阿昔洛韦、喷昔洛韦和利巴韦林及其它抗病毒药物的 测定和评价。 2 规范性引用文件 下列文件对于本标准的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 中华人民共和国药典 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 抗病毒药物 antiviral drugs 用于预防和治疗病毒感染的药物 。 4 更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦的 检测方法 4.1 高效液相色谱法 4.1.1 原理 以乙酸甲醇混合溶液超声提取试样中的更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦，提取液经离心、过滤， C18色谱柱分离，紫外检测器或二极管阵列检测器检测，外标法定量。 4.1.2 试剂和材料 除另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682规定的一级水。 4.1.2.1 试剂 4.1.2.1.1 甲醇（CH3OH）：色谱纯。 4.1.2.1.2 冰乙酸（ CH3COOH）。 4.1.2.1.3 乙酸铵（ CH3COONH 4）。 4.1.2.2 试剂配制 WS/T 686—2020 2 4.1.2.2.1 样品提取溶液： 分别移取甲醇 80 mL和冰乙酸 10 mL，置于试剂瓶中，加入水 10 mL，混匀。 4.1.2.2.2 乙酸铵乙酸缓冲溶液：称取乙酸铵 0.77 g，置于试剂瓶中，加入水 400 mL溶解，再加入 冰乙酸2 mL，加水至 500 mL，混匀。 4.1.2.3 标准品 更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦纯度均大于 97%或经国家认证并授予证书的标准物质 ，其它相关信 息参见附录 A。 4.1.2.4 标准溶液配制 4.1.2.4.1 标准储备液：准确称取更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦各 25.0 mg，分别置于50 mL容量 瓶中，加入样品提取溶液约 40 mL，超声10 min，溶解，用样品提取溶液定容至刻度，配制成质量浓度 均为500 mg/L的标准储备液。冷藏保存，有效期为 3个月。 4.1.2.4.2 混合标准中间液：分别移取更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦标准储备液，用样品提取溶液 稀释成质量浓度均为 50 mg/L的混合标准中间液。冷藏保存，有效期为 1个月。 4.1.2.4.3 混合标准系列溶液： 取不同体积的混合标准中间液，用样品提取溶液稀释成混合标准系列 溶液，如 0.5 mg/L、2.5 mg/L、5.0 mg/L、10.0 mg/L、20.0 mg/L。临用现配。 4.1.2.5 材料 4.1.2.5.1 有机系滤膜：孔径为 0.45 m。 4.1.2.5.2 玻璃珠：Φ＜ 5 mm。 4.1.3 仪器和设备 4.1.3.1 高效液相色谱仪：带二极管阵列检测器或紫外检测器。 4.1.3.2 分析天平：最小分度值为 0.1 mg。 4.1.3.3 离心机：≥ 3 000 r/min。 4.1.3.4 涡旋混合器。 4.1.3.5 超声波清洗器。 4.1.4 分析步骤 4.1.4.1 样品前处理 4.1.4.1.1 液体剂型 称取0.5 g（精确至 1 mg）试样于 10 mL具塞带刻度离心管（比色管）中，加入样品提取溶液至 10 mL 刻度，涡旋混匀 1 min，超声10 min，经滤膜过滤，备用。 4.1.4.1.2 其它剂型 称取0.5 g（精确至 1 mg）试样于 10 mL具塞带刻度离心管（比色管）中，加入样品提取溶液至 10 mL刻度，加入 1至2颗玻璃珠，涡旋混匀至溶液呈均匀状态，超声 10 min，离心5 min，取上清液 经滤膜过滤，备用。 4.1.4.2 高效液相 色谱参考条件 高效液相色谱参考条件如下： a) 色谱柱： C18柱（柱长 250 mm，内径4.6 mm，粒径5 m），或相当者； WS/T 686—2020 3 b) 流动相： A相为甲醇， B相为乙酸铵乙酸缓冲溶液； c) 流速：1.0 mL/min； d) 柱温：30℃； e) 进样体积： 5 L； f) 检测波长： 254 nm； g） 梯度洗脱程序：见附录 B.1。 4.1.4.3 标准曲线的制作 将混合标准系列溶液，按浓度由低到高依次注入高效液相色谱仪 ，以色谱峰的峰面积为纵坐标，与 其对应的质量浓度为横坐标，绘制峰面积 —质量浓度（ mg/L）标准曲线。 更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛 韦混合标准溶液的高效液相色谱图参见附录 C.1。 4.1.4.4 测定 将处理好的试样溶液注入高效液相色谱仪，根据标准曲线计算试样溶液中目标化合物的质量浓度。 4.1.4.5 结果计算和表述 试样中目标化合物 的含量按式（1）计算： )1.( .......... .......... ..........mVX 式中： X——试样中目标化合物 的含量，单位为毫克每 千克（mg/kg）； ——标准曲线计算的试样溶液中 目标化合物的 质量浓度，单位为毫克每升（ mg/L）； V——定容体积，单 位为毫升（ mL）； m——称样量， 单位为克（ g）。 结果保留三位有效数字。 4.1.4.6 精密度 在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的 10%。本方法回收率和精 密度见附 录D。 4.1.4.7 检出限和定量限 当取样量为 0.5 g，定容体积为 10 mL，本方法的检出限和定量限：更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦 的检出限均为 2.0 mg/kg；定量限均为 7.0 mg/kg。 4.2 胶束电动毛细管色谱法 4.2.1 原理 以含有十二烷基硫酸钠的样品提取溶液提取试样中的更 昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦 ，用胶束电动 毛细管色谱分离模式进行分离，紫外检测器或二极管阵列检测器检测， 外标法定量。 4.2.2 试剂和材料 除另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682规定的一级水。 WS/T 686—2020 4 4.2.2.1 试剂 4.2.2.1.1 十二烷基硫酸钠（ SDS，C12H25SO4Na）。 4.2.2.1.2 硼砂（Na2B4O7·10H2O）。 4.2.2.1.3 无水磷酸二氢钠（ NaH2PO4）。 4.2.2.1.4 氢氧化钠（ NaOH）。 4.2.2.2 试剂配制 4.2.2.2.1 分离缓冲溶液：称取 SDS 2.019 g、硼砂0.191 g和无水磷酸二氢钠 0.150 g，置于同一具 塞带刻度塑料离心管中，加水至 50 mL刻度，超声溶解、混匀，配制成含有 140 mmol/L SDS、10 mmol/L 硼砂和25 mmol/L磷酸二氢钠的分离缓冲溶液。 4.2.2.2.2 样品提取溶液：将分离缓冲溶液用水稀释 10倍，配制成样品提取溶液。 4.2.2.2.3 氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠 2 g，加入预先装有 40 mL水的塑料离心管中，振摇溶解， 再加水至 50 mL刻度、混匀，配制成 1 mol/L氢氧化钠溶液。 4.2.2.3 标准品 同4.1.2.3。 4.2.2.4 标准溶液配制 4.2.2.4.1 标准储备液： 准确称取更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦各 10.0 mg，分别置于 10 mL容量 瓶中，加入样品提取溶液约 5 mL，振摇（或超声） 溶解，用样品提取溶液定容至刻度，配制成质量浓 度均为1000 mg/L的标准储备液。临用现配。 4.2.2.4.2 混合标准中间液：分别移取更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦标准储备液，用样品提取溶液 稀释成质量浓度均为 100 mg/L的混合标准中间液。临用现配。 4.2.2.4.3 混合标准系列溶液：取不同体积的混合标准中间液，用样品提取溶液稀释成混合标准系列 溶