ICS 11.080 C 50 WS 中华人民共和国卫生行业标准 WS/T 684—2020 消毒剂与抗抑菌剂中抗菌药物检测方法与 评价要求 Analytical method and evaluation requirements for antibacterial drugs in disinfectant and antibacterial and bacteriostatic agents 2020 - 07 - 20发布 2021 - 02 - 01实施 中华人民共和国国家卫生健康委员会 发布 WS/T 684—2020 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 —2009给出的规则起草。 本标准起草单位：江苏省疾病预防控制中心、中国疾病预防控制中心 环境与健康相关产品安全所 、 北京市疾病预防控制中心、江苏省食品药品检验研究院、中国药科大学、国家食品安全风险评估中心、 山东省疾病预防控制中心、徐州市疾病预防控制中心、东南大学附属中大医院。 本标准主要起草人：徐燕、吴晓松、朱峰、胡小键、王嵬、李放、吉文亮、张流波、丁晓静、李舸 远、钱海、崔树玉、陈越英、沈瑾、李炎、赵云峰、陈达炜、苏冠民、常桂秋、褚宏亮、谈智、范晶晶、 孔庆芳、孙宏。 WS/T 684—2020 1 消毒剂与抗抑菌剂中抗菌药物检测方法与评价要求 1 范围 本标准规定了消毒剂与抗抑菌剂中抗菌药物的检测方法和评价要求。 本标准适用于消毒剂与抗抑菌剂中四环素类（四环素、土霉素、金霉素、米诺环素、强力霉素）、 大环内酯类（红霉素）、 β-内酰胺类（头孢拉定）、磺胺类（磺胺嘧啶）、喹诺酮类（氧氟沙星、诺氟 沙星）、林可酰胺类（克林霉素）、氯霉素类（氯霉素）及其它抗菌药物的测定和评价。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本 （包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 中华人民共和国药典 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 抗菌药物 antibacterial drugs 具有抑菌和（或）杀菌活性、用于预防和治疗细菌性感染的药物，包括抗生素和按处方药管理的化 学合成药物。 4 检测方法 4.1 原理 试样中抗菌药物用甲醇或乙腈超声提取，提取液过滤后，与水混合，用超高效液相色谱 -串联质谱 仪测定，内标法定量。 4.2 试剂和材料 除非另有说明，所用试剂均为色谱纯，实验用水为 GB/T 6682 规定的一级水。 4.2.1 试剂 4.2.1.1 乙腈（ CH 3CN）。 4.2.1.2 甲酸（ HCOOH）。 4.2.1.3 甲醇（ CH 3OH）。 4.2.1.4 氯化钠（ NaCl）：分析纯。 WS/T 684—2020 2 4.2.2 试剂配制 4.2.2.1 0.1%甲酸水溶液：取甲酸 1.0 mL，用水定容至 1000 mL，混匀。 4.2.2.2 甲醇水溶液：取甲醇 800 mL，加水 200 mL，混匀。 4.2.3 标准品 四环素、土霉素、金霉素、米诺环素、强力霉素、红霉素、头孢拉定、磺胺嘧啶、氧氟沙星、诺氟 沙星、克林霉素、氯霉素、四环素 -D6、土霉素 -13C22-15N2、米诺环素 -D6、强力霉素 -D3、磺胺嘧啶 -D6、 头孢氨苄 -D5、左氧氟沙星 -D8、红霉素 -13C-D3、噻菌灵 -D4、氯霉素 -D5，纯度均大于 98.5 %或经国家认 证并授予标准物质证书的标准物质，其他相关信息 参见附录 A。 4.2.4 标准溶液配制 4.2.4.1 标准储备液 (约1.0 mg/mL) ：分别准确称取四环素、土霉素、金霉素、米诺环素、强力霉素、 红霉素、头孢拉定、磺胺嘧啶、氧氟沙星、诺氟沙星、克林霉素、氯霉素约 10.0 mg于10 mL容量瓶中， 用甲醇溶解并定至刻度，配成浓度约为 1.0 mg/mL 的标准储备液，在 -20℃±2˚C下冷冻保存，有效期为 3个月。 4.2.4.2 混合标准中间液 (10 μg/mL) ：分别准确吸取适量各单一标准 储备液于 25 mL容量瓶中，用甲 醇稀释并定容至刻度，配制成浓度为 10 μg/mL 的混合标准中间液，冷藏避光保存，有效期为 1个月。 4.2.4.3 内标化合物标准储备液 (约1.0 mg/mL) ： 分别称取四环素 -D6、 土霉素 -13C22-15N2、 米诺环素 -D6、 强力霉素 -D3、磺胺嘧啶 -D6、头孢氨苄 -D5、左氧氟沙星 -D8、红霉素 -13C-D3、噻菌灵 -D4、氯霉素 -D5约 10.0 mg于10 mL容量瓶中， 用甲醇溶解并定容至刻度， 配成浓度约为 1.0 mg/mL 的内标储备液， 在 -20℃ ±2˚C下冷冻保存，有效期为 6个月。 4.2.4.4 混合内标化合物标准中间液：分别吸取适量单一内标储备液于 10 mL容量瓶中，用甲醇稀释 并定容至刻度，配制成 1 μg/mL的混合内标中间液，冷藏避光保存，有效期为 3个月。 4.2.4.5 混合标准溶液：用甲醇水溶液将抗菌药物标准中间液配制成混合标准系列溶液，如 1 μg/L、2 μg/L、5 μg/L、10 μg/L、20 μg/L、50 μg/L、100 μg/L，各系列溶液中混合内标化合物浓度均为 10 μg/L， 超高效液相色谱 -串联质谱仪测定。临用现配。 4.2.5 材料 有机系滤膜：孔径为 0.22 μm。 4.3 仪器和设备 4.3.1 超高效液相色谱 -串联质谱仪：带电喷雾离子源（ ESI源）。 4.3.2 分析天平：感量为 0.1 mg。 4.3.3 离心机：转速 ≥9000 r/min 。 4.3.4 涡旋混合器。 4.3.5 超声波清洗器。 4.4 分析步骤 4.4.1 样品前处理 4.4.1.1 液体剂型 WS/T 684—2020 3 称取 0.2 g（精确至 1 mg）混合均匀的样品，置于 15 mL离心管中，先加入 10.0 μL混合内标化合物标 准中间液，再加 3.0 mL甲醇，涡旋 1 min使样品分散，超声提取 10 min，加入 0.15 g氯化钠，涡旋混匀， 9000 r/min 离心 5 min，吸取上清液，滤膜过滤，取 0.8 mL滤液至进样瓶中，加入 0.2 mL水，混合均 匀， 供超高效液相色谱 -串联质谱测定。 4.4.1.2 其它剂型 4.4.1.2.1 凝胶剂型 称取 0.2 g（精确至 1 mg）混合均匀的样品，置于 15 mL离心管中，先加入 10.0 μL混合内标化合物标 准中间液，再加 3.0 mL乙腈，涡旋 1 min使样品分散，超声提取 10 min，9000 r/min 离心 5 min，吸取上清 液，滤膜过滤，取 0.8 mL滤液至进样瓶中，再加入 0.2 mL水，混合均匀，供超高效液相色谱 -串联质谱 测定。 4.4.1.2.2 膏霜剂型 称取 0.2 g（精确至 1 mg）混合均匀的样品，置于 15 mL离心管中，先加入 10.0 μL混合内标化合物标 准中间液，再加 3.0 mL甲醇，涡旋 1 min使样品分散，超声提取 10 min，9000 r/min 离心 5 min，吸取上清 液，滤膜过滤，取 0.8 mL滤液至进样瓶中，加入 0.2 mL水，混合均匀，供超高效液相色谱 -串联质谱测 定。 4.4.2 样品测定 4.4.2.1 超高效液相色谱参考条件 超高效液相色谱参考条件如下： a) 色谱柱： C18柱（柱长 100mm，内径 2.1mm，粒径 1.8μm），或相当者； b) 流动相： A相为 0.1% 甲酸水溶液， B相为乙腈； c) 流速： 0.3 mL/min ； d) 柱温： 40˚C； e) 进样体积： 5 μL； f) 梯度洗脱程序：见附录 B。 4.4.2.2 质谱参考条件 质谱参考条件如下： a) 电离方式： ESI+、ESI-同时扫描； b) 离子源温度： 550 ℃； c) 毛细管电压： ESI+：5.5 kV；ESI-：-4.5 kV； d) 气帘气： 2.1 × 105 Pa； e) 雾化气： 4.5 × 105 Pa； f) 辅助气： 4.5 × 105 Pa； g) 监测模式：多反应监测（ MRM）模式； h) 其它质谱参数：见附录 C。 4.4.2.3 标准曲线的制作 WS/T 684—2020 4 将混合标准系列溶液，按浓度由低到高依次注入超高效液相色谱 -串联质谱仪中，测得相应的峰面 积，以被测组分定量离子峰面积与内标化合物定量离子峰面 积之比对相应的质量浓度做标准曲线，以离 子对定性，采用内标法进行定量分析，标准图谱参见附录 D。 4.4.2.4 定性测定 在相同测试条件下，试样中目标化合物色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，变 化范围应在 ±2.5%之内，且检测到的相对离子丰度，应与浓度相当的标准溶液中相对离子丰度一致， 其相对丰度比偏差应符合表 1要求。 表1 相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 /% ＞50 ＞20～≤50 ＞10～≤20 ≤1