ICS 11.020 C 59 ws 中 华 人 民 共 和 国 卫生行 业 标 准 WS/T 191—2017 代替WS 191—1999 软下疳诊断 Diagnosis for chancroid 2017 - 07 - 24发布 2018 - 02 - 01实施 中华人民共和国 国家卫生和计划生育委员会 发布 WS/T 191—2017 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 —2009给出的规 则起草。 本标准代替 WS 191—1999《软下疳 诊断标准及处理原则 》，本标准自实施之日起， WS 191—1999 同时废止。 本标准与 WS 191—1999相比，主要修改如下： ——标准性质由强制性改为推荐性。 ——标准名称改为“软下疳诊断” ； ——增加了术语和定义部分 (见第2章)； ——删除了治疗原则 (见1999年版的第 3章)； ——删除了临床治愈 (见1999年版的第 4章)； ——删除了管理及预防 (见1999年版的第 5章)； ——删除了附录A中荧光抗体染色法 (见1999年版的A.5)； ——增加了附录A中碱性磷酸酶试验 (见A.4.5)； ——删除了附录B软下疳治疗方案 (见1999年版的附录 B)； ——增加了附录B运送和分离 杜克雷嗜血杆菌常用培养基 (见附录B)； ——增加了附录 C软下疳简介(见附录C)。 本标准起草单位：中国医学科学院皮肤病医院（研究所） 、江苏省人民医院（南京医科大学第一附 属医院）、上海市皮肤病医院 。 本标准主要起草人：齐淑贞、王千秋、苏晓红、蒋娟、龚向东、龚匡隆 、骆丹、周平玉 。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： ——WS 191—1999。WS/T 191—2017 1 软下疳诊断 1 范围 本标准规定了软下 疳的诊断原则、 诊断依据、诊断和鉴别诊断。 本标准适用于全国各级各类医疗 卫生机构 及其医务人员 对软下疳的诊断。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本 文件。 2.1 软下疳 chancroid 由杜克雷嗜血杆菌感染所致的生殖器部位疼痛性、溃疡性性传播疾病，常合并腹股沟淋巴结化脓性 病变。 2.2 杜克雷嗜血杆菌 haemophilus ducreyi 杜克雷嗜血杆菌为兼性厌氧菌， 无运动能力， 无芽胞， 革兰染色阴性， 短杆状， 两端钝圆， 长 1.6 µm ～ 2 µm，宽0.5 µm，大多数在细胞外 呈链状或鱼群状排列 ，少数在细胞内 呈团状分布。 3 诊断原则 根据流行病学史、临床表现及实验室检查进行综合分析，作出诊断。 4 诊断依据 4.1 流行病学史 有不安全性行为史，或性伴 感染史，或多性伴史 。 4.2 临床表现 潜伏期3 d～14 d，平均4 d～7 d。 皮损初发为生殖器部位的炎性小丘疹， 1 d～2 d后迅速变为脓疱 ，2 d～3 d内脓疱破溃形成 疼痛 性溃疡。溃疡呈圆形或卵圆形，边缘不整，基底覆以脓性分泌物，除去渗出物，基底为血管丰富的肉芽 组织，有触痛，易出血；皮损周围可出现 卫星状溃疡。溃疡可在 1月～2月内愈合，残留瘢痕 。 男性好发于冠状沟、包皮、龟头、阴茎干、会阴及肛周等 处；女性好发于大小阴唇、尿道口、阴道 口、阴道壁、宫颈、会阴 和肛周等处。 WS/T 191—2017 2 原发损害出现后的 1周～2周内，约50%患者出现急性疼痛性化脓性腹股沟淋巴结炎，表现为腹股 沟和股淋巴结疼痛性肿大，常为单侧，也可双侧受累。肿大的淋巴结常有波动感，可自然破溃流脓，形 成一长而窄的浅 溃疡。 4.3 实验室检查 （见附录A） 4.3.1 显微镜检查 临床溃疡分泌物 标本涂片革兰染色，查见革兰染色阴性短杆菌 （见附录 A的A.2）。 4.3.2 培养 临床溃疡分泌物 标本细菌培养 （培养基制备 参见附录B），生化鉴定为杜克雷嗜血杆菌 （见 A.3和A.4）。 5 诊断 5.1 疑似病例 符合4.2，同时有或无 4.1及4.3.1，并符合：（ 1）发生7 d以上的溃疡，用暗视野显微镜检查溃疡 组织液查不到梅毒螺旋体，或梅毒血清学试验阴性； （ 2）临床上排除溃疡为单纯疱疹病毒（ HSV）感染， HSV-PCR检测或HSV抗原检测阳性 。 5.2 确诊病例 同时符合 4.3.2与5.1。 6 鉴别诊断 软下疳应与一期梅毒 的硬下疳、生殖器疱疹和性病性淋巴肉芽肿等进行鉴别诊断（ 参见附录C的 C.5）。 WS/T 191—2017 3 A A 附 录 A （规范性附录） 杜克雷嗜血杆菌的实 验室检查方法 A.1 标本采集 A.1.1 取材工具 棉拭子或藻酸钙拭子。 A.1.2 取材部位 生殖器溃 疡或有波动感的肿大淋巴结。 A.1.3 皮肤黏膜损害取材 用无菌棉拭子轻轻擦去 溃疡表面的痂皮和 污物，再用拭子采取分泌物 ，从溃疡基底部或边缘取材， 做涂片检查或培养。 A.1.4 淋巴结取材 选有波动的淋巴结， 消毒淋巴结表面皮肤，用无菌干棉球擦干。用 1mL无菌注射器配 12号针头，吸 取生理盐水0.25 mL～0.5 mL，以无菌操作穿 刺淋巴结并注入盐水，再吸入注射器内，反复 2次～3次后， 取抽吸液做涂片检查或培养。 A.2 显微镜检查 A.2.1 材料 光学显微镜、无菌拭子、载玻片、注射器、生理盐水。 A.2.2 方法 将标本均匀轻轻地涂在干净的玻片上，然后 在空气中干燥，火焰固定。 A.2.3 革兰染色 操作步骤如下： a) 将经过固定的涂片铺满结晶紫溶液，染 30 s～60 s，迅速在流水中洗净。 b) 用碘液铺满涂片，染 30 s～60 s，用流水洗净。 c) 用丙酮-乙醇液脱色，直到涂片无紫色脱下为止。通常要 10 s～20 s，取决于涂膜的厚薄。避 免脱色过分，否则革兰阳性菌可误认为阴性菌。很快在流 水中淋洗停止脱色，将过量的水用吸 水纸吸干。 d) 用复红液复染 1 min，用流水淋洗，用吸水纸吸干。 A.2.4 结果及解释 WS/T 191—2017 4 使用10×100倍油镜检查。 杜克雷嗜血杆菌为革兰染色阴性，短杆状，两端钝圆，长 1.6 µm～2 µm，宽0.5 µm，大多数在细胞 外呈链状或鱼群状排列，少数在细胞内 呈团状分布。 因生殖器溃疡中常有多种微生物寄居，临床标本直接涂片革兰染色镜检的结果不可靠，假阳性及假 阴性较高，故涂片检查只用于初步判断，不作为确诊依据。 A.3 杜克雷嗜血杆菌 运送与分离培养 A.3.1 材料 A.3.1.1 运送培养基 BM-SGA运送培养 基。主要成分包括 ：L-谷氨酰胺、小牛白蛋白Ⅴ、 3 mg/L万古霉素。 A.3.1.2 分离培养基 A.3.1.2.1 改良Thayer-Martin培养基。主要成分包括： GC基础培养基粉、血红蛋白、 1% IsoVitaleX 增菌剂、3 mg/L万古霉素。 A.3.1.2.2 巧克力琼脂培养基 。主要成分包括：肉浸液（肉膏液）琼脂、无菌脱纤维血、 3 mg/L万古 霉素（培养基制备 参见附录B）。 A.3.2 培养条件 将标本接种于培养基上，分区划线分离。接种了标本的培养基应置于 相对湿度 80%以上，培养温度 33 ℃～35 ℃，5% ～10%二氧化碳环境（烛缸）中培养 。48 h～72 h观看结果。未出 现阳性结果的平皿 应继续观察 7 d后才能丢弃。 A.3.3 培养菌落初步鉴定 A.3.3.1 菌落特征 ：杜克雷嗜血杆菌经 48 h～72 h培养后，可形成直径 1 mm～2 mm菌落，菌落光滑、 呈半透明状，浅灰色或黄灰色。陈旧性培养物，菌落扁平，颜色变成灰白到棕黄。用白金耳可以完整地 将菌落沿琼脂表面推动，即推动试验阳性，为杜克雷嗜血杆菌菌落的典型特征。 A.3.3.2 革兰染色：从菌落取材做涂片，革兰染色镜检（ 见A.2）。 A.4 生化鉴定试 验 A.4.1 氧化酶试验 A.4.1.1 原理：杜克雷嗜血杆菌酶系统不完善，但能产生弱氧化酶，它产生的氧离子能将氧化酶试剂 （盐酸二甲基对苯胺）氧化成醌 类化合物，出现弱颜色反应。但也有报告氧化酶试验阴性的菌株。 A.4.1.2 方法：将氧化酶试剂配制成 0.5%～1.0%水溶液。将溶液滴加于可疑菌落上，观察颜色变化。 A.4.1.3 结果：在滴加 1%盐酸二甲基对苯胺溶液后，一般于 15 s～20 s内菌落即呈淡红色，然后逐步 变成深紫蓝色，最后呈黑色。 A.4.1.4 临床意义： 氧化酶试验 、菌体形态和菌落形态是初步鉴定杜克雷嗜血杆菌的三个重要标准。 A.4.2 过氧化氢酶试验 WS/T 191—2017 5 A.4.2.1 原理：具有触酶（即过氧化氢酶）的细菌可催化过氧化氢放出初生态氧，继而形成氧分子出 现气泡。 A.4.2.2 方法（玻片法） ： 挑取培养基上的菌落，置于干净的玻片上，然 后加1滴3%～6%过氧化氢，立 即观察结果。 A.4.2.3 结果：于30 s内有气泡产生者为阳性 。 A.4.2.4 临床意义： 杜克雷嗜血杆菌不产生气泡因而为阴性。 A.4.3 卟啉试验 A.4.3.1 原理：用于检测细菌将盐酸 δ-氨基-γ