SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2206.14—2017 化妆品微生物检验方法 第14部分：腐生葡萄球菌 Determination of microbiologies in cosmetics- Part 14:Staphylococcus saprophyticus 行业标准信息服务平台 2017-05-12发布 2017-12-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2206.14—2017 前 言 SN/T2206《化妆品微生物检验方法》分为14个部分： 第1部分：沙门氏菌； 第2部分：需氧芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌； 第3部分：肺炎克雷伯氏菌； 第4部分：链球菌； 第5部分：肠球菌； 一第6部分：破伤风梭菌； 第7部分：蛋白免疫印迹法检测疯牛病病原； 第8部分：白色念珠菌； 第9部分：胆汁酸耐受革兰氏阴性杆菌； 第10部分：金黄色葡萄球菌PCR法； 第11部分：金黄色葡萄球菌多重实时荧光PCR法； 第12部分：绿脓杆菌PCR法； 第13部分：嗜麦芽窄食单胞菌； 第14部分：腐生葡萄球菌。 本部分为SN/T2206的第14部分 本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中华人民共和国江苏出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出人境检验检 疫局。 本部分主要起草人：石建华、王毅谦、李晓虹、瀚慧萍、祝长青、邵景东、蒋原。 行业标准信息服务平台 1 SN/T2206.14—2017 化妆品微生物检验方法 第14部分：腐生葡萄球菌 1范围 SN/T2206的本部分规定了化妆品中腐生葡萄球菌的定性检测方法。 本部分适用于化妆品中腐生葡萄球菌的定性检测 2 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T7918.1化妆品微生物标准检验方法总则 SN/T1193基因检验实验室技术要求 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3.1 腐生葡萄球菌 Staph.saparophytics 葡萄球菌属的一种，革兰氏阳性，血琼脂上呈橙色或灰白色，无溶血，血浆凝固酶阴性，尿素酶阳性， 发酵葡萄糖、麦芽糖、草糖、松二糖，不发酵乳糖和甘露糖。 4试剂和材料 4.1试剂 怡息服务平台 除另有规定的外，试剂为分析纯或生化试剂，水为灭菌双蒸水，符合GB/T6682中一级水的规格。 4.1.10.85%生理盐水。 4.1.2 SCDLP液体培养基（见附录A的A.1)。 4.1.3 血琼脂平板（见A.2)。 4.1.4 腐生葡萄球菌定位显色培养基（见A.3) 4.1.5 胰蛋白陈大豆琼脂培养基（TSA)（见A.4）。 4.1.6 生化反应试剂。 4.1.7 VITEK全自动微生物鉴定系统GP测试卡。 者，并不表示对该产品的唯一认可。如果其他等效产品具有相同的效果，也可使用等效产品。 4.1.8 Taq DNA 聚合酶。 4.1.9dNTP:dATP,dTTP,dCTP,dGTP 4.1.10 DNA提取试剂：称取0.1gchelex100粉末，加人100mL灭菌蒸馏水中，摇匀即可。 1 SN/T 2206.14—2017 4.1.11 10×PCR缓冲液:200mmol/LTris-HCl(pH8.4)200mmol/L氯化钾(KCl),15mmol/L氯 化镁（MgCl2）。 4.1.12引物和探针： 上游引物：5'-TGAAGCTGTTTTTGGTAGCGA-3” 下游引物：5'-AGTTCCTGGTTTAGCACCTTCA-3 TaqMan探针:5'-TCGCAAAGATGTTGCTTGTCACACA-3' 探针5端由FAM标记，3'端由TAMRA标记。 4.2材料 4.2.1 刻度吸管：2.0mL和10.0mL，分刻度0.1mL。 4.2.2 三角瓶：150mL，250mL。 4.2.3 培养皿：90mm。 4.2.4 普通光学显微镜（1000×）及载玻片。 4.2.5 1.5mL离心管。 5仪器和设备 5.1 天平：感量0.1g。 5.2均质器：转速1000r/min以上。 5.3 恒温培养箱：36℃±1℃。 5.4 恒温水浴锅。 5.5 VITEK全自动微生物鉴定系统或类似设备"） 5.6 实时荧光PCR仪。 5.7 离心机：最大转速13000r/min以上。 5.8 微量移液器：10μ，100μL.200μL，1000μL。 5.9 低温冰箱：-20℃~4℃。 6 检验程序 化妆品中腐生葡萄球菌检验方法是通过增菌、分离纯化、生化鉴定或增菌后进行实时荧光PCR检 信息服务平台 测，对化妆品中可能存在的腐生葡萄球菌进行定性检验 具体检验程序见图1。 1）VITEK是由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本部分的使用者，并不表示 对该产品的唯一认可。如果其他等效产品具有相同的效果，也可使用等效产品。 2