以正式出版文本为准I C S6 5.0 2 0 .0 1 C C SB 1 6 中华人民共和国检验检疫行业标准 S N/T5 3 7 3—2 0 2 1 大灰蛞蝓检疫鉴定方法 D e t e c t i o n a n d i d e n t i f i c a t i o n o f l i m a x m a x i m u s L i n n a e u s ,1 7 5 8 2 0 2 1-0 6-1 8发布 2 0 2 2-0 1-0 1实施 中华人民共和国海关总署 发 布以正式出版文本为准以正式出版文本为准 1 2 0 2—3 7 3 5 T/N S 中华人民共和国出入境检验检疫 行 业 标 准 大灰蛞蝓检疫鉴定方法 S N/T 5 3 7 3—2 0 2 1 * 中国海关出版社有限公司出版发行 北京市朝阳区东四环南路甲 1号(1 0 0 0 2 3) 编辑部: (0 1 0)6 5 1 9 4 2 4 2 - 7 5 3 1 网址 www. c u s t o m s k b. c o m /b o o k 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 * 开本8 8 0×1 2 3 0 1 /1 6 印张1 字数2 3千字 2 0 2 1年7月第一版 2 0 2 1年7月第一次印刷 印数 1—5 0 0 * 书号: 1 5 5 1 7 5·6 6 6定价1 6.0 0元以正式出版文本为准前 言 本文件按照 G B/T 1. 1—2 0 2 0《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则 》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口 。 本文件起草单位 :中华人民共和国福州海关 。 本文件主要起草人 :王沛、周卫川、胡美玲、陈泰林、王宇、林阳武。 ⅠS N/T5 3 7 3—2 0 2 1以正式出版文本为准以正式出版文本为准大灰蛞蝓检疫鉴定方法 1 范围 本文件规定了大灰蛞蝓 l i m a x ma x i mu s L i n n a e u s , 1 7 5 8的检疫鉴定方法 。 本文件适用于大灰蛞蝓的检疫鉴定 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件 ;不注日期的引用文件 ,其最新版本 (包括所有的修改单 )适用于 本文件。 S N/T 3 0 6 7—2 0 1 1 软体动物常规检疫规范 3 术语和定义 S N/T 3 0 6 7—2 0 1 1界定的以及下列界定的术语和定义适用于本文件 。 3.1 呼吸孔 b l o w h o l e 为气体进出孔道 ,位于体右侧外套膜边缘靠后位置 。 3.2 生殖孔 go n opo r e 生殖系统的开口 ,位于右触角基部稍后位置 。 3.3 外套膜 m a n t l e 为陆生软体动物躯体背部皮质层皱褶延伸而成 ,是一层覆盖内脏囊的膜状物 ,肺血管网密布其上 , 可行呼吸作用 ,且能分泌碳酸钙形成贝壳 。 注: 软体动物外套膜通常由 3层组成:即靠近体外的表皮层 ,能分泌碳酸钙形成贝壳 ;中间的皮层 ,由肌肉与结缔组 织交织而成 ;靠近内脏团的皮层 ,常生有纤毛 。 3.4 阴茎 pe n i s 阴茎系统一般由阴茎 、阴茎本体 、阴茎牵引肌和鞭状体组成 ,其中后三者常因种类不同而缺失 。 注: 大灰蛞蝓无鞭状体 。 3.5 软体 s o f t b o dy 蛞蝓柔软的身体 。 注: 软体的颜色和长度可用于分类 。 3.6 盾板 s c u t u m 蛞蝓退化的贝壳 。 1S N/T5 3 7 3—2 0 2 1以正式出版文本为准3.7 尾嵴 t a i l k e e l 尾部中央的嵴状突起 。 注: 有些种类的尾嵴发达 ,可直达外套膜后缘 。 4 基本信息 中文名:大灰蛞蝓 ;豹纹蛞蝓 英文名:gr e a t gr ey s l ug; L e opa r d s l ug 学名:l i m a x ma x i mu s L i n n a e u s , 1 7 5 8 异名:l i m a x c i n e r e u s L i s t e r, 1 6 7 8; l i m a x c i n e r e u s Mu l l e r, 1 7 7 4; l i m a c e l l a pa r ma B r a r d, 1 8 1 5; l i m a x ma c u l a t u s N u n n e l ey, 1 8 3 7; l i m a x c e l l a r i u s L e s s o n a e t P o l o n e r a , 1 8 8 2; l i m a x c a r b o n a r i u s a l - b a n i c u s J a e c k e l, 1 9 5 4 分类地位 :软体动物门 Mo l l u s c a ,腹足纲G a s t r opo d a,柄眼目S tyl o mm a t o ph o r a,蛞蝓科L i m a c i d a e , 蛞蝓属L i m a x L i n n a e u s , 1 7 5 8。蛞蝓属有 3 5个种,大灰蛞蝓的近似种有 4个,分别为康氏蛞蝓 L.c o n e m e n o s i B o t tge r, 1 8 8 2、黄蛞蝓L.fl a v u s L i n n a e u s , 1 7 5 8、 杂色蛞蝓 L. a e o l i a n u s G i u s t i, 1 9 7 3 和维罗纳蛞蝓 L.v e r o n e n s i s L e s s o n a & P o l l o n e r a , 1 8 8 2。大灰蛞蝓的其他信息参见附录 A。 5 方法原理 传播方式和传播途径是确定现场检疫的依据 。软体、生殖系统形态特征和分子生物学特性是实验 室鉴定的主要依据 。 6 器具和试剂 6.1 仪器和用具 仪器:体视显微镜 、微型离心机 、恒温金属浴 、实时荧光 P C R仪、低温冰箱 。 用具:放大镜、手电筒、塑料自封袋 、广口标本瓶 、4 mm孔径土壤筛 、小铁铲、游标卡尺 、白瓷盘、培 养皿、镊子、剪刀、显微镊子 、显微剪刀 、微针、解剖蜡盘 、标签、移液枪、1. 5 mL离心管、八连排荧光 P C R 反应管。 6.2 试剂 除另有规定外 ,所有试剂均为分析纯 。 乙醇、硫酸镁、动物基因组 DNA 提取试剂盒 、实时荧光 P C R 检测试剂 、d d H 2O。 7 现场检疫 对来自疫区 (参见附录 A)的集装箱 、木质包装材料应重点检查 ,仔细观察集装箱的底部和四角部 位以及所装货物与木质包装材料是否有蛞蝓 。注意阴暗 、潮湿、蔽光处的检查 ,用手电筒仔细寻找蛞蝓 的行迹。对来自疫区的原木 、盆景、苗木、水果等未经加工的植物性原材料也应认真检查 ,对可能被蛞蝓 污染的物品可用高压水枪冲洗后再检查 。 蛞蝓爬行过后 ,会留下银灰色的丝带状黏液痕迹 ,这是判定是否有蛞蝓污染的重要依据 。发现蛞 蝓,装入塑料自封袋或标本瓶带回实验室做进一步的检验鉴定 。发现盆景等携带土壤或其他细碎衬垫 2S N/T5 3 7 3—2 0 2 1以正式出版文本为准材料时,需过筛检查是否有卵或幼体 。 8 实验室鉴定 8.1 饲养 单独查获的卵粒 ,按照 S N/T 3 0 6 7—2 0 1 1中 8. 4方法,将其孵化和饲养为成年蛞蝓后 ,再做进一步 的鉴定。 8.2 测量、观察和软体解剖 用游标卡尺测量蛞蝓软体的长度 、卵粒的直径 。用肉眼或放大镜或体视显微镜仔细观察卵和蛞蝓 的形态特征 。 将闷杀处理后的标本 ,按照S N/T 3 0 6 7—2 0 1 1中8. 3. 1进行软体解剖 ,分离出生殖系统 。 8.3 蛞蝓属鉴定特征 软体中型至大型 ,外套膜大约覆盖软体的 1/4。呼吸孔位于体右侧外套膜边缘靠后位置 ,尾嵴短 小,清晰可见 。阴茎长,管状,卷曲缠绕 ,无鞭状体 。阴茎和阴茎牵引肌交叉相连 。输精管插入阴茎顶部 靠上位置 。 8.4 大灰蛞蝓鉴定特征 8.4.1 卵 卵圆形,相互粘连呈簇状 ,透明,有弹性,颜色稍发黄 ,直径为4 mm~5. 5 mm(参见图B. 1) 。 8.4.2 软体 体长1 0 0 mm~2 0 0 mm,分布较多的不连续的纵向条纹 ,尾部有一较短尾嵴 ,约3 0 mm~6 0 mm。 软体底色多变 ,呈浅灰色 ,褐色或者黄白色 ,常常布满大的黑色斑点 ,斑点形状多变 。腹足底部灰色或者 黄灰色,边缘颜色比较浅 ,布满一排黑色结节 。触角细长 。生殖孔位于右触角基部稍后位置 。外套膜长 度约是软体的 3 0%。盾板椭圆形 ,大小约为 1 3 mm×7 mm,颜色与软体一致 。盾板前部圆润 ,后部隆 起成角,当身体蠕动时形成弓形 。呼吸孔位于体右侧外套膜边缘靠后位置 。在背部中线和呼吸孔之间 有2 1条~