ICS67.050 CCSC53 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5359—2021 出口动物源食品中阿奇霉素残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of azithromycin residue in foodstuffs of animal origin for export—LC-MS/MS method 2021-11-22发布 2022-06-01实施 中华人民共和国海关总署发布 以正式出版文本为准以正式出版文本为准前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位:伊宁海关技术中心、伊犁师范大学、天津海关工业产品安全技术中心、天津海关动 植物与食品检测中心、成都海关技术中心。 本文件主要起草人:粟有志、李艳美、雷红琴、周均、李紫薇、周磊 肖亚兵、刘俊、王兴磊、李芳。 ⅠSN/T5359—2021 以正式出版文本为准以正式出版文本为准出口动物源食品中阿奇霉素残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1 范围 本文件规定了动物源食品中阿奇霉素残留量的液相色谱-质谱/质谱检测和确证方法。 本文件适用于鸡肉、牛肉、羊肉、猪肉、猪肝、鲤鱼、蜂蜜、蜂王浆、牛奶、奶粉、肠衣等动物源食品中阿 奇霉素残留量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 方法摘要 试样经加水涡旋分散均匀,用乙腈震荡提取其中的阿奇霉素,经N-丙基乙二胺(PSA)净化,正己烷 脱脂,采用高效液相色谱-质谱/质谱测定,内标法定量。 5 试剂与材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定中的一级水。 5.1 乙腈:色谱纯。 5.2 乙腈:分析纯 5.3 正己烷:色谱纯。 5.4 甲酸:色谱纯 5.5 甲醇:色谱纯 5.6 0.1%甲酸水溶液(体积分数):移取甲酸1 mL,用水溶解并稀释至1 000 mL。 5.7 乙腈-0.1%甲酸水溶液(25∶75,体积比,其中乙腈为色谱纯)。 5.8 氯化钠。 5.9 微孔过滤膜:0.22 μm,尼龙膜。 5.10 N-丙基乙二胺粉(PSA)吸附剂 5.11 阿奇霉素(Azithromycin,CAS:83905-01-5)标准物质。 5.12 阿奇霉素氘代内标(阿奇霉素-D5)(Azithromycin-D5)标准物质。 5.13 阿奇霉素标准储备液:准确称取折算纯度后的阿奇霉素标准物质(5.11)(精确到0.1 mg)适量, 1SN/T5359—2021 以正式出版文本为准用甲醇配制成1 000 μg/mL的标准储备液(避光4 ℃保存,有效期12个月)。 5.14 阿奇霉素标准中间溶液:移取阿奇霉素标准储备液(5.13)适量,用甲醇稀释成50 μg/mL(避光 4 ℃保存,有效期3个月)。 5.15 阿奇霉素氘代内标(阿奇霉素-D5)储备液:准确称取折算纯度后的阿奇霉素氘代内标(阿奇霉素- D5)标准物质(5.12)适量,用甲醇配制成1 000 μg/mL的标准储备液(避光4 ℃保存,有效期12个月)。 5.16 阿奇霉素氘代内标(阿奇霉素-D5)中间溶液:移取阿奇霉素氘代内标(阿奇霉素-D5)储备液 (5.15)适量,用甲醇稀释成50 μg/mL(避光4 ℃保存,有效期3个月)。 5.17 标准工作溶液:分别移取阿奇霉素标准中间溶液(5.14)适量和阿奇霉素氘代内标(阿奇霉素- D5)中间溶液(5.16)用乙腈-0.1%甲酸水溶液(25∶75,体积比)(5.7)稀释成合适的标准工作溶液,每 毫升标准溶液中含有阿奇霉素氘代内标10 ng。 5.18 阿奇霉素氘代内标(阿奇霉素-D5)工作液:移取阿奇霉素氘代内标(阿奇霉素-D5)中间溶液 (5.16)适量,用乙腈-0.1%甲酸水溶液(25∶75,体积比)(5.7)稀释成100 ng/mL。 6 仪器和设备 6.1 液相色谱-串联质谱仪:配有电喷雾离子源(ESI)。 6.2 分析天平:感量为0.1 mg和0.01 g。 6.3 组织捣碎机。 6.4 氮吹仪。 6.5 振动器。 6.6 离心机:10 000 r/min。 6.7 离心管:15 mL和50 mL。 6.8 涡旋器。 7 试样制备与保存 7.1 动物组织、内脏 鸡肉、牛肉、羊肉、猪肉、猪肝、鲤鱼、肠衣(需预先置于-18 ℃冰箱放置6 h以上)等取有代表性样 品约500 g,经高速组织捣碎机捣碎,均分成两份,装入干净容器中,加封后做出标记,一份作为试样,一 份作为留样。将试样置于-18 ℃条件下保存。 7.2 蜂王浆、牛奶、奶粉 取适量新鲜或者冷藏的样品约500 g,充分混匀分成两份,装入干净容器中,加封后做出标记,一份 作为试样,一份作为留样。将试样置于0 ℃~4 ℃条件下保存。 7.3 蜂蜜 蜂蜜从全部样品中取出有代表性样品约500 g,对无结晶样品的将其搅拌均匀,均分成两份,装入干 净容器中,加封后做出标记;对有结晶的蜂蜜样品,在密闭情况下,将样品置于不超过60 ℃水浴中温热, 振荡待样品完全融化后搅匀,迅速冷却至室温,均分成两份,装入干净容器中,加封后做出标记。将试样 置于0 ℃~4 ℃条件下保存。 2SN/T5359—2021 以正式出版文本为准8 测定步骤 8.1 提取 8.1.1 鸡肉、猪肝、肠衣等固态样品 称取样品2 g(精确到0.01 g)于50 mL具塞离心管中,加入阿奇霉素氘代内标(阿奇霉素-D5)工作 液(5.18)200 μL,加入8 mL水,涡旋30 s,将样品充分分散;依次加入3 g氯化钠和10 mL乙腈(5.2), 水平振荡10 min,8 000 r/min离心1 min;取6 mL上清液至15 mL具塞离心管中,待净化。 8.1.2 蜂蜜和牛奶等液体样品 牛奶等含水量较高的液体样品,称取5 g(精确到0.01 g)于50 mL具塞离心管中;若是蜂蜜等粘性 液体样品称取5 g(精确到0.01 g)于50 mL具塞离心管中,再加入5 mL水。加入阿奇霉素氘代内标 (阿奇霉素-D5)工作液(5.18)200 μL,涡旋30 s,将样品充分分散;依次加入3 g氯化钠和10 mL乙腈 (5.2),水平振荡10 min,8 000 r/min离心1 min;取6 mL上清液至15 mL具塞离心管中,待净化。 8.2 净化 向6 mL上清液中加入100 mg PSA,涡旋30 s,以8 000 r/min的速度离心1 min;取5 mL上清液 至15 mL试管中,于40 ℃水浴氮吹至干,用1.0 mL乙腈-0.1%甲酸水溶液(25∶75,体积比,乙腈为色 谱纯)溶解残渣,加入2 mL正己烷,涡旋10 s,将溶液转移至15 mL离心管中,以10 000 r/min的速度 离心5 min;取下层溶液过0.22 μm尼龙滤膜,滤液待测。 8.3 测定 8.3.1 液相色谱条件 液相色谱参考条件如下: a) 色谱柱:C18柱,2.1 mm×100 mm,3 μm或相当; b) 流动相A:含0.1%甲酸水溶液(5.5);流动相B:乙腈;洗脱梯度参见表1; c) 柱温:35 ℃; d) 进样体积:10 μL。 表1 流动相及梯度洗脱条件 时间/min 流速/(mL/min) 流动相A(0.1%甲酸水)/% 流动相B(乙腈)/% 0.00 0.25 90.0 10.0 1.00 0.25 90.0 10.0 4.50 0.25 5.0 95.0 5.50 0.25 5.0 95.0 5.51 0.25 90.0 10.0 10.00 0.25 90.0 10.0 8.3.2 质谱条件 质谱参考条件如下: 3SN/T5359—2021 以正式出版文本为准a) 电离方式:电喷雾电离(ESI); b) 干燥气温度:350 ℃; c) 干燥气流量:9.0 L/min; d) 鞘气温度:250 ℃; e) 鞘气流速:11.0 L/min, f) 毛细管电压:4 kV; g) 扫描方式:正离子扫描; h) 监测方式;多重反应监测(MRM),监测条件参见表2。 表2 多反应监测条件 化合物 母离子(m/z) 子离子(m/z) 碎裂电压/v 碰撞能量/eV 阿奇霉素 749.5 591.3*190 28 158.1 190 40 阿奇霉素-D5 754.5 596.3*190 28 *离子用于定量 8.3.3 液相色谱-串联质谱测定 8.3.3.1 定性测定 按照上述条件测定样品和标准工作溶液,待测样品中化合物色谱峰的保留时间与标准溶液相比变 化范围应在±2.5%之内。定性离子对的相对丰度与浓度相当标准工作液的相对丰度一致,相对丰度偏 差不超过表3的规定,且每个离子的信噪比均≥3,可判断样品中存在相应的被测物。 表3 定性时相对离子丰度的最大允许范围 相对离子丰度范围/%