SN-T 4675.14-2016 出口葡萄酒中纳他霉素的测定液相色谱-质谱-质谱法

书书书　中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜４６７５．１４—２０１６出口葡萄酒中纳他霉素的测定液相色谱 质谱／质谱法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狀犪狋犪犿狔犮犻狀犻狀狑犻狀犲犳狅狉犲狓狆狅狉狋—犔犆  犕犛／犕犛犿犲狋犺狅犱２０１６１２１２发布２０１７０７０１实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布 rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.书书书前　　言　　ＳＮ／Ｔ４６７５《出口葡萄酒质量安全分析方法》共分为３０个部分： — — —ＳＮ／Ｔ４６７５．１　出口葡萄酒中甘油的测定　酶法； — — —ＳＮ／Ｔ４６７５．２　出口葡萄酒中２，３ 丁二醇的测定　气相色谱法； — — —ＳＮ／Ｔ４６７５．３　出口葡萄酒中乙醇稳定碳同位素比值的测定； — — —ＳＮ／Ｔ４６７５．４　出口葡萄酒中乳酸的测定　酶法； — — —ＳＮ／Ｔ４６７５．５　出口葡萄酒中有机酸的测定　离子色谱法； — — —ＳＮ／Ｔ４６７５．６　出口葡萄酒中葡萄糖、果糖和蔗糖的测定； — — —ＳＮ／Ｔ４６７５．７　出口葡萄酒中乙醛的测定　气相色谱 质谱法； — — —ＳＮ／Ｔ４６７５．８　出口葡萄酒中５ 羟甲基糠醛的测定　液相色谱法； — — —ＳＮ／Ｔ４６７５．９　出口葡萄酒中二甘醇的测定　气相色谱 质谱法； — — —ＳＮ／Ｔ４６７５．１０　出口葡萄酒中赭曲霉毒素Ａ的测定　液相色谱 质谱／质谱法； — — —ＳＮ／Ｔ４６７５．１１　出口葡萄酒中７种花色苷的测定　超高效液相色谱法； — — —ＳＮ／Ｔ４６７５．１２　出口葡萄酒中溶菌酶的测定　液相色谱法； — — —ＳＮ／Ｔ４６７５．１３　出口葡萄酒中２，４，６ 三氯苯甲醚残留量的测定　气相色谱 质谱法； — — —ＳＮ／Ｔ４６７５．１４　出口葡萄酒中纳他霉素的测定　液相色谱 质谱／质谱法； — — —ＳＮ／Ｔ４６７５．１５　出口葡萄酒中水杨酸、脱氢乙酸和对氯苯甲酸的测定　液相色谱法； — — —ＳＮ／Ｔ４６７５．１６　出口葡萄酒中富马酸的测定　液相色谱 质谱／质谱法； — — —ＳＮ／Ｔ４６７５．１７　出口葡萄酒中丁基锡含量的测定　气相色谱 质谱／质谱法； — — —ＳＮ／Ｔ４６７５．１８　出口葡萄酒中二硫代氨基甲酸酯残留量的测定　顶空气相色谱法； — — —ＳＮ／Ｔ４６７５．１９　出口葡萄酒中钠、镁、钾、钙、铬、锰、铁、铜、锌、砷、硒、银、镉、铅的测定； — — —ＳＮ／Ｔ４６７５．２０　出口葡萄酒中稀土元素的测定　电感耦合等离子体质谱法； — — —ＳＮ／Ｔ４６７５．２１　出口葡萄酒中可溶性无机盐的测定　离子色谱法； — — —ＳＮ／Ｔ４６７５．２２　出口葡萄酒中总二氧化硫的测定　比色法； — — —ＳＮ／Ｔ４６７５．２３　出口葡萄酒及葡萄汁中氨氮的测定　连续流动分析仪法； — — —ＳＮ／Ｔ４６７５．２４　出口葡萄酒福林 肖卡指数的测定　分光光度计法； — — —ＳＮ／Ｔ４６７５．２５　出口葡萄酒颜色的测定　ＣＩＥ１９７６（Ｌａｂ）色空间法； — — —ＳＮ／Ｔ４６７５．２６　出口葡萄酒浊度的测定　散射光法； — — —ＳＮ／Ｔ４６７５．２７　出口葡萄酒碱性灰分的测定； — — —ＳＮ／Ｔ４６７５．２８　出口葡萄酒细菌、霉菌及酵母的计数； — — —ＳＮ／Ｔ４６７５．２９　出口葡萄酒中酒香酵母检验　实时荧光ＰＣＲ法； — — —ＳＮ／Ｔ４６７５．３０　出口葡萄酒中拜氏接合酵母检验　实时荧光ＰＣＲ法。本部分为ＳＮ／Ｔ４６７５的第１４部分。本部分按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国北京出入境检验检疫局、中华人民共和国广东出入境检验检疫局。本部分主要起草人：崔淑华、程刚、刘萤、张雪琰、李正义、王宇、赵峰、刘青、李志勇。 Ⅰ犛犖／犜４６７５．１４—２０１６ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.出口葡萄酒中纳他霉素的测定液相色谱 质谱／质谱法１　范围ＳＮ／Ｔ４６７５的本部分规定了出口葡萄酒中纳他霉素的液相色谱串联质谱测定方法。本部分适用于葡萄酒中纳他霉素的测定。２　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ６６８２　分析实验室用水规格和试验方法３　方法提要样品经稀释，高速离心后，用液相色谱 质谱／质谱仪测定并确证，外标法定量。４　试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为优级纯，水为ＧＢ／Ｔ６６８２规定的一级水。４．１　乙腈：色谱纯。４．２　甲酸。４．３　５％乙腈 ０．１％甲酸溶液：准确量取５０ｍＬ乙腈、１ｍＬ甲酸，用水定容至１Ｌ，混匀后备用。４．４　０．１％甲酸水溶液：准确量取１ｍＬ甲酸，用水定容至１Ｌ，混匀后备用。４．５　纳他霉素标准品（ＣＡＳ编号７６８１  ９３  ８，分子量：６６５．７３）：纯度≥８９．９％。４．６　纳他霉素标准储备溶液：准确称取适量纳他霉素标准品，用甲醇配制成浓度为１．０ｍｇ／ｍＬ的标准储备液。４．７　纳他霉素标准中间溶液：准确吸取适量的纳他霉素标准储备溶液（４．６），用５％乙腈 ０．１％甲酸溶液（４．３）配制成浓度为１０μｇ／ｍＬ的标准中间溶液。４．８　纳他霉素标准工作溶液：准确吸取适量的纳他霉素标准中间溶液（４．７），用５％乙腈 ０．１％甲酸溶液（４．３）逐级稀释纳他霉素标准中间溶液，配制成０．２μｇ／Ｌ～１００μｇ／Ｌ系列标准工作溶液。５　仪器和设备５．１　高效液相色谱 质谱／质谱仪：三重四极杆串联质谱，配有电喷雾离子源（ＥＳＩ）。５．２　分析天平：感量０．０１ｍｇ。５．３　涡旋混合器。５．４　离心机：配２ｍＬ角转子，转速不低于１５０００ｒ／ｍｉｎ。５．５　具塞离心管：５０ｍＬ、２ｍＬ。１犛犖／犜４６７５．１４—２０１６ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.６　测定步骤６．１　样品处理检测前，将葡萄酒样品充分摇匀后，起泡酒需事先脱气。将１００ｍＬ试样倒入带排气塞的瓶中，在室温下使用水平振荡器或超声波水浴脱气，直至无气泡逸出。准确量取５ｍＬ试样于５０ｍＬ棕色容量瓶中，用５％乙腈 ０．１％甲酸溶液（４．３）定容至刻度，混匀后，将溶液移入２ｍＬ离心管中，１５０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ后，取上清液，待液相色谱 质谱／质谱测定。６．２　测定６．２．１　液相色谱参考条件ａ）　色谱柱：Ｃ１８柱，１００ｍｍ×２．１ｍｍ（内径），粒径１．８μｍ，或相当者；ｂ）流动相：Ａ（乙腈），Ｂ（０．１％甲酸水溶液）。梯度洗脱条件见表１；表１　液相色谱洗脱条件时间／ｍｉｎＡ／％Ｂ／％０．０５９５０．５５９５３．５９０１０５．０９０１０５．１５９５７．０５９５ｃ）进样量：１０μＬ；ｄ）柱温：３０℃；ｅ）流速：０．３ｍＬ／ｍｉｎ。６．２．２　液相色谱 质谱／质谱参考条件ａ）离子源：电喷雾离子源（ＥＳＩ）；ｂ）扫描方式：正离子扫描；ｃ）监测方式：多反应监测（ＭＲＭ）；ｄ）其它质谱参考条件参见附录Ａ中表Ａ．１和表Ａ．２。６．２．３　液相色谱 质谱／质谱测定按照确定的液相色谱 串联质谱条件测定样品和标准工作溶液（４．８），响应值均应在仪器检测的线性范围内，以色谱峰面积按外标法定量。在上述仪器条件下，纳他霉素的参考保留时间为３．０ｍｉｎ。液相色谱串联质谱多反应监测色谱图参见附录Ｂ图Ｂ．１。６．２．４　定性确证按照上述条件测定样品和标准工作溶液，如果检测的色谱峰保留时间与标准工作溶液一致，允许偏差小于±２．５％；定性离子对的相对丰度与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超２犛犖／犜４６７５．１４—２０１６ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0

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