书书书　 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛 犖／犜４ ６ ５ ５—２ ０ １ ６ 出口食品中草甘膦及其代谢物残留量测定方法 　液相色谱 质谱／质谱法 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 犵犾狔 狆犺 狅 狊 犪 狋 犲犪 狀 犱犻 狋 狊犿 犲 狋 犪 犫 犾 犻 狕 犲狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊犻 狀犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳 狊犳 狅 狉犲 狓 狆狅 狉 狋—犎 犘 犔 犆  犕 犛 ／犕 犛犿 犲 狋 犺 狅 犱 ２ ０ １ ６０ ８２ ３发布 ２ ０ １ ７０ ３０ １实施 中 华 人 民 共 和 国 国家质量监督检验检疫总局发 布 rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.书书书前　　言 　　本标准按照 Ｇ Ｂ／Ｔ１． １—２ ０ ０ ９给出的规则起草 。请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 。本标准起草单位 ：中华人民共和国厦门出入境检验检疫局检验检疫技术中心 、宁波出入境检验检疫局、福建出入境检验检疫局 。本标准主要起草人 ：徐敦明、陈树兵、吴敏、杜凤君、余宇成、刘正才、张缙、张志刚。 Ⅰ犛 犖／犜４ ６ ５ ５—２ ０ １ ６ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.出口食品中草甘膦及其代谢物残留量测定方法 　液相色谱 质谱／质谱法 １　范围 本标准规定了出口食品中草甘膦及其代谢物 （氨甲基磷酸 ）残留量的液相色谱 质谱／质谱测定方法。本标准适用于茶叶 、小麦、玉米、稻谷、甘蔗、大豆、柑橘、苹果、桃、葡萄、香蕉、西瓜、大麦茶、棉籽油中草甘膦及其代谢物残 （氨甲基磷酸 ）残留量的检测和确证 。 ２　规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本文件 。 Ｇ Ｂ／Ｔ６ ６ ８ ２　分析实验室用水规格和试验方法 ３　方法提要 试样用水提取 ，经透析袋 、Ｒ Ｐ柱及石墨化碳黑吸附剂净化 ，用液相色谱 质谱／质谱仪测定 ，外标法定量。 ４　试剂材料 除非另有说明 ，所用试剂均为分析纯 ，水为Ｇ Ｂ／Ｔ６ ６ ８ ２规定的一级水 。 ４．１　甲醇，色谱纯。 ４．２　乙腈，色谱纯。 ４．３　乙酸铵，色谱纯。 ４．４　乙酸铵溶液 （５ｍｍ ｏ ｌ／Ｌ，ｐＨ：１ ０～１ １） ：准确称取 ３． ８ ５ ５ｇ（精确至０． ０ ０ ０１ ｇ）乙酸铵，用水定容至 ５ ０ｍＬ，配制成１ｍ ｏ ｌ／Ｌ乙酸铵溶液 ：再取其中 ５ｍＬ，用水定容至 １０ ０ ０ｍＬ ，氨水调节 ｐＨ至１ ０～１ １。 ４．５　标准物质 ：草甘膦（ｇｌｙ ｐｈ ｏ ｓ ａ ｔ ｅ，ＧＬ Ｙ，ＣＡ Ｓ：１ ０ ７ １  ８ ３  ６ ） ，纯度≥９ ８． ０％；氨甲基磷酸 （ａ ｍ ｉ ｎ ｏ ｍ ｅ ｔ ｈ ｙｌ ｐｈ ｏ ｓｐｈ ｏ ｎ ｉ ｃａ ｃ ｉ ｄ ，ＡＭＰ Ａ，ＣＡ Ｓ：１ ０ ６ ６  ５ １  ９ ） ，纯度≥９ ８． ０％。 ４．６　透析袋：直径２ ２ｍｍ，压平宽度 （半周长）３ ４ｍｍ，截留分子量 ３５ ０ ０Ｄ ａ 。 ４．７　标准品溶液的配制 ：准确称取 ＧＬ Ｙ和ＡＭＰ Ａ标准品各 １ ０ｍｇ，用水定容至 １ ０ｍＬ，配置成浓度为 １ｍｇ／ｍＬ的标准储备溶液 。 ４．８　标准储备的配制 ：吸取标准品溶液 ，用水稀释 ，分别配制成浓度为 １ ０μｇ／ｍＬ的标准储备液 。 ４．９　标准工作溶液的配制 ：根据需要 ，临用时吸取一定量的标准储备液 ，用水溶液稀释成适当浓度的混合标准工作溶液 。 ４．１ ０　透析袋处理 ：用剪刀剪至 １ ０ｃ ｍ～２ ０ｃ ｍ小段，用水煮沸 １ ０ｍ ｉ ｎ，二次水洗净 ，保存至乙醇中 ；使用前后均用二次水清洗净 。 ４．１ １　Ｏ ｎ Ｇ ｕ ａ ｒ ｄ ｜ ｜Ｒ Ｐ柱（１． ０ｃ ｃ柱） ：使用前５ｍＬ甲醇、５ｍＬ水活化，静置半小时 ；使用后甲醇清洗 １犛 犖／犜４ ６ ５ ５—２ ０ １ ６ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.保存。 ４．１ ２　石墨化碳黑吸附剂 （ＧＣ Ｂ） ：４ ０μｍ～６ ０μｍ，Ｐ ｒ ｏ Ｅ ｌ ｕ ｔ 填料，或相当者 。 ４．１ ３　微孔滤膜 ：０． ２ ２μｍ，有机系，聚四氟乙烯 （Ｐ Ｔ Ｆ Ｅ）膜。 ５　仪器与设备 ５．１　液相色谱 质谱／质谱仪：配有电喷雾离子源 （Ｅ Ｓ Ｉ） 。 ５．２　电子天平 ：感量分别为 ０． ０ １ｇ，０． ０ ０ ０１ ｇ。 ５．３　组织捣碎机 。 ５．４　粉碎机。 ５．５　均质器：１ ５０ ０ ０ｒ ／ｍ ｉ ｎ。 ５．６　离心机：５０ ０ ０ｒ／ｍ ｉ ｎ以上。 ５．７　高速离心机 ：１ ５０ ０ ０ｒ ／ｍ ｉ ｎ以上。 ５．８　超声仪。 ５．９　离心管：５ ０ｍＬ。 ５．１ ０　试管：５ ０ｍＬ ５．１ １　注射器。 ５．１ ２　涡漩混匀器 。 ５．１ ３　氮吹仪。 ６　试样制备与保存 ６．１　试样制备 ６．１．１　液体样品 液体样品混匀备用 。 ６．１．２　果蔬类 取代表性样品约 ５ ０ ０ｇ，将其切碎后 ，用组织捣碎机将样品加工成浆状 ，混匀，装入洁净容器 ，密封， 标明标记 。 ６．１．３　粮谷类和茶叶类 取代表性样品约 ５ ０ ０ｇ，用粉碎机粉碎 ，过２ ０目筛，混匀，装入洁净容器 ，密封，标明标记 。 ６．２　试样保存 将试样于 －５℃以下避光保存 。 注：在抽样及制样的操作过程中 ，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化 。 ７　分析步骤 ７．１　提取 液体样品 、粮谷类、及果蔬样品称取试样 ４ｇ（精确到０． ０ １ｇ） ，于５ ０ｍＬ离心管（５． ９）中，加入６ｍＬ ２犛 犖／犜４ ６ ５ ５—２ ０ １ ６ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.水，于高速（１ ５０ ０ ０ｒ ／ｍ ｉ ｎ）均质器（５． ５）上均质３ｍ ｉ ｎ，以１ ５０ ０ ０ｒ ／ｍ ｉ ｎ离心（５． ７）５ｍ ｉ ｎ，收集水相 ，用水 定容至１ ０ｍＬ。 茶叶类样品称取试样 ２ｇ（精确到０． ０ １ｇ） ，于５ ０ｍＬ 离心管（５． ９）中，加入１ ０ｍＬ 水，于高速 （１ ５０ ０ ０ｒ ／ｍ ｉ ｎ）均质器（５． ５）上均质３ｍ ｉ ｎ，将离心管以 １ ５０ ０ ０ｒ ／ｍ ｉ ｎ离心（５． ７）５ｍ ｉ ｎ，收集上层液 ，用水 定容至１ ０ｍＬ。 ７．２　净化 取样品提取液 １ ０ｍＬ加入经活化了的透析袋 （４． １ ０）中，并将透析袋置于已加入 １ ０ｍＬ水的５ ０ｍＬ试管（５． １ ０）中，超声（５． ８）１ｈ。取出透析袋 ，从玻璃管中取出 ５ｍＬ残液，用５ｍＬ注射器（５． １ １）注入已 活化的Ｒ Ｐ柱（４． １ １） ，弃去Ｒ Ｐ柱前２ｍＬ流出液，用５ｍＬ离心管收集后 ３ｍＬ流出液；加入２ ０ｍｇＧＣ Ｂ（４． １ ２） ，旋窝震荡 ２ｍ ｉ ｎ后于１ ５０ ０ ０ｒ ／ｍ ｉ ｎ离心５ｍ ｉ ｎ，取２ｍＬ上清液至洁净的玻璃管中 ６ ０℃下 氮吹（５． １ ３）至干，残渣用０． ５ｍＬ 的水溶液溶解 ，过聚四氟乙烯 （Ｐ Ｔ Ｆ Ｅ）膜，供液相色谱 质谱／质谱仪 （Ｌ Ｃ  ＭＳ／ＭＳ）分析。 ７．３　测定 ７．３．１　液相色谱 质谱／质谱条件 液相色谱 质谱／质谱条件如下 ： ａ）　色谱柱：ＮＨ ２ Ｐ  ５ ０２ Ｄ 柱，长１ ５ ０ｍｍ ，内径２． ０ｍｍ ，粒径５μｍ或相当者 ； ｂ）流动相：Ａ：５ｍｍ ｏ ｌ／Ｌ乙酸铵水溶液 （氨水调ｐＨ １ ０～１ １） ，Ｂ：乙腈溶液 ；流速：０． ２ ５ｍＬ ／ｍ ｉ ｎ，梯 度洗脱程序见表 １； ｃ）柱温：３ ５℃； ｄ）进样量：１ ０μＬ； ｅ）离子源：电喷雾（Ｅ Ｓ Ｉ） ； ｆ）扫描方式 ：负离子； ｇ）监测方式 ：多反应监测 （ＭＲＭ） ； ｈ）质谱条件参见附录 Ａ。 表１　流动相梯度洗脱程序 时间／ｍ ｉ ｎ 流动相Ａ／％ 流动相Ｂ／％ ０ ２ ０． ０ ８ ０． ０ ２． ０ ０ ２ ０． ０ ８ ０． ０ ２． ０ １ ８ ０． ０ ２ ０． ０ ８． ０ ０ ８ ０． ０ ２ ０． ０ ８． ０ １ ２ ０． ０ ８ ０． ０ １ ２． ０ ０ ２ ０． ０ ８ ０． ０ ７．３．２　色谱测定 ７．３．２．１　定性测定 按照液相色谱 质谱／质谱条件测定样品和标准工作溶液 ，样品的质量色谱峰保留时间与标准品中 ３犛 犖／犜４ ６ ５ ５—２ ０ １ ６ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.对应的保留时间一致 ；且样品中各组分定性离子的相对丰度与接近浓度的标准工作溶液中相应的定性 离子的相对丰度进行比较 ，偏差不超过表 ２规定的范围 ，则可判定样品中存在对应的被测物 。 表２　定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 ＞５ ０％ ＞２ ０％～５ ０％ ＞１ ０％～２ ０％ ≤１ ０％ 允许的相对偏差 ±２ ０％ ±２ ５％ ±３ ０％ ±５ ０％ ７．３．２．２　定量测定 在仪器最佳工作条件下 ，对标准工作溶液进样 。用标准工作曲线按外标法定量 ，样品溶液中被测物 的响应值均应在仪器测定的线性范围内 。根据试样中被测样液的含量情况 ，选取响应值相近的标准工 作液进行色谱分析 。标准工作液和样液中