书书书　 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛 犖／犜４ ６ ３ ８—２ ０ １ ６ 尖头旋蜗牛检疫鉴定方法 犇 犲 狋 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犻 犱 犲 狀 狋 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 犆 狅 犮 犺 犾 犻 犮 犲 犾 犾 犪犪 犮 狌 狋 犪 （犕ü 犾 犾 犲 狉，１ ７ ７ ４） ２ ０ １ ６０ ８２ ３发布 ２ ０ １ ７０ ３０ １实施 中 华 人 民 共 和 国 国家质量监督检验检疫总局发 布 rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.书书书前　　言 　　本标准按照 Ｇ Ｂ／Ｔ１． １—２ ０ ０ ９给出的规则起草 。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 。本标准起草单位 ：中华人民共和国福建出入境检验检疫局 、中华人民共和国厦门出入境检验检疫局、中华人民共和国中山出入境检验检疫局 、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局 、中华人民共和国宁波出入境检验检疫局 、中华人民共和国张家港出入境检验检疫局 。本标准主要起草人 ：王沛、周卫川、黄蓬英、王章根、徐浪、崔俊霞、陆军、林阳武。 Ⅰ犛 犖／犜４ ６ ３ ８—２ ０ １ ６ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.尖头旋蜗牛检疫鉴定方法 １　范围 本标准规定了尖头旋蜗牛 犆 狅 犮 犺 犾 犻 犮 犲 犾 犾 犪犪 犮 狌 狋 犪 （Ｍü ｌ ｌ ｅ ｒ，１ ７ ７ ４）的检疫鉴定方法 。本标准适用于尖头旋蜗牛的检疫鉴定 。 ２　规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注文件的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本文件 。 Ｓ Ｎ／Ｔ３ ０ ６ ７—２ ０ １ １　软体动物常规检疫规范 ３　术语与定义 Ｓ Ｎ／Ｔ３ ０ ６ ７ 界定的以及下列术语和定义适用于本文件 。 ３．１鞭状体　犳 犾 犪犵犲 犾 犾 狌 犿蜗牛雄性生殖系统中的附器 ，一般在阴茎本体末端分枝形成鞭状体 。 注：鞭状体的有无和形态常用于分类 。３．２阴茎鞘　狆犲 狀 犻 犪 犾 狊 犺 犲 犪 狋 犺阴茎外围一薄层 ，紧贴于阴茎 。 ３．３贮液囊　狉 犲 狊 犲 狉 狏 狅 犻 狉受精囊的附属器 ，着生于受精囊与受精囊柄连接处 ，用于贮存外来精液 。 ３．４缝合线　狊 狌 狋 狌 狉 犲蜗牛贝壳各螺层之间下陷的连接处 。缝合线有深有浅 ，有简单的或锯齿形的 ，这些特征常用于分类鉴定。 ３．５螺轴　犮 狅 犾 狌 犿 犲 犾 犾 犪蜗牛贝壳的旋转中轴即称螺轴 。 ３．６轴唇　犮 狅 犾 狌 犿 犲 犾 犾 犪犾 犻 狆贝壳壳口的边缘为口唇 ，按其在壳口中的位置不同可分为内唇 、外唇、轴唇、基唇、上唇和下唇 ，靠近螺轴的部位 。 注：有些种类的轴唇常外折导致脐孔部分或完全被覆盖 。 ４　基本信息 学名：犆 狅 犮 犺 犾 犻 犮 犲 犾 犾 犪犪 犮 狌 狋 犪 （Ｍü ｌ ｌ ｅ ｒ，１ ７ ７ ４） １犛 犖／犜４ ６ ３ ８—２ ０ １ ６ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.异名：犎 犲 犾 犻 狓犪 犮 狌 狋 犪 Ｍü ｌ ｌ ｅ ｒ，１ ７ ７ ４英文名：Ｐ ｏ ｉ ｎ ｔ ｅ ｄｓ ｎ ａ ｉ ｌ ，Ｃ ｏ ｎ ｉ ｃ ａ ｌｓ ｎ ａ ｉ ｌ俗名：尖头蜗牛 、圆锥蜗牛分类地位 ：软体动物门 Ｍｏ ｌ ｌ ｕ ｓ ｃ ａ ，腹足纲Ｇ ａ ｓ ｔ ｒ ｏｐｏ ｄ ａ，柄眼目Ｓ ｔｙｌ ｏ ｍｍ ａ ｔ ｏ ｐｈ ｏ ｒ ａ，旋蜗牛科 Ｃ ｏ ｃ ｈ ｌ ｉ ｃ ｅ ｌ ｌ ｉ ｄ ａ ｅＳ ｃ ｈ ｉ ｌ ｅ ｙｋ ｏ，１ ９ ７ ２，旋蜗牛属 犆 狅 犮 犺 犾 犻 犮 犲 犾 犾 犪 Ｆ ｅ ｒ ｕ ｓ ｓ ａ ｃ ，１ ８ ２ １。尖头旋蜗牛同属的近似种有巴布拉旋蜗牛犆．犫 犪 狉 犫 犪 狉 犪 （Ｌ ｉ ｎ ｎ ａ ｅ ｕ ｓ ，１ ７ ５ ８） 、圆锥旋蜗牛 犆．犮 狅 狀 狅 犻 犱 犲 犪 （Ｄ ｒ ａｐａ ｒ ｎ ａ ｕ ｄ，１ ８ ０ １） 。尖头旋蜗牛的其他信息参见附录 Ａ。 ５　方法原理 尖头旋蜗牛主要通过运输工具 、木质包装材料和污染的农副产品远距离传播 ，污染的谷物 、油菜籽和柑橘类水果是其最重要的传播媒介 。其传播特点是不需要特定的寄主 ，凡接触过地面的物品都有可能传播。传播方式和传播途径是确定现场检疫方式的依据 。贝壳形态 、解剖结构和分子生物学特征是实验室鉴定的主要依据 。 ６　器具和药品 ６．１　仪器和用具 设备：体视显微镜 、微型离心机 、恒温金属浴 、Ｐ Ｃ Ｒ仪、凝胶照相系统 。器具：放大镜、手电筒、塑料自封袋 、广口标本瓶 、４ｍｍ孔径土壤筛 、小铁铲、游标卡尺 、搪瓷盘、培养皿、镊子、剪刀、小剪刀、显微镊子 、显微剪刀 、微针（直径０． １ ５ｍｍ ） 、解剖蜡盘 、标签、１． ５ｍＬ 离心管、 ０． ２ｍＬＰ Ｃ Ｒ 反应管、移液器。 ６．２　药品和试剂 除另有规定外 ，所有试剂均为分析纯 。 ７ ５％乙醇、无水乙醇 、硫酸镁、ＤＮＡ提取试剂盒 、Ｐ Ｃ ＲＭ ａ ｓ ｔ ｅ ｒＭ ｉ ｘ 、ｄ ｄ Ｈ ２Ｏ。 ７　现场检疫 对来自疫区 （参见附录 Ａ）的运输工具和货物实施重点查验 。仔细检查运输工具 、木质包装物 、未经加工的植物性材料 、大麦、小麦、油菜籽、水果、牧草等是否有蜗牛附着其上 ，尖头旋蜗牛昼伏夜出 ，尤其要注意阴暗蔽光处的检查 ，用手电筒仔细寻找蜗牛的行迹 。蜗牛爬行过后 ，一般会留下银灰色的丝带状黏液痕迹 ，这是判定是否有蜗牛污染的重要依据 。发现蜗牛 ，随时装入塑料自封袋或标本瓶带回实验室做进一步的检验鉴定 。发现盆景等携带土壤或其他细碎衬垫材料时 ，需过筛检查是否有卵或幼螺 。 ８　实验室鉴定 ８．１　测量、观察、解剖和饲养 用游标卡尺测量蜗牛贝壳的壳高和壳宽 、壳口高和壳口宽 、卵粒直径 。用肉眼或放大镜或体视显微镜仔细观察卵和螺的形态特征 。将闷杀处理 （见１ ０． １）后的标本 ，参照Ｓ Ｎ／Ｔ３ ０ ６ ７—２ ０ １ １中８． ３． １进行软体解剖 ，分离出生殖系统 。单独查获的卵粒 ，参照Ｓ Ｎ／Ｔ３ ０ ６ ７—２ ０ １ １中８． ４方法，将其孵化和饲养为成螺后 ，再做鉴定 。 ２犛 犖／犜４ ６ ３ ８—２ ０ １ ６ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.８．２　旋蜗牛属 犆 狅 犮 犺 犾 犻 犮 犲 犾 犾 犪 犉 犲 狉 狌 狊 狊 犪 犮 ，１ ８ ２ １鉴定特征 贝壳较小 ，高塔形，颜色多变 。壳质薄易碎 。壳口简单 ，椭圆形。脐孔微小 ，几乎完全被反折的轴唇 所覆盖。体螺层周缘下常有黑褐色螺旋状色带 。阴茎本体很长 ，阴茎具有长短不一的鞭状体 。 ８．３　尖头旋蜗牛 犆 狅 犮 犺 犾 犻 犮 犲 犾 犾 犪犪 犮 狌 狋 犪 （犕ü 犾 犾 犲 狉，１ ７ ７ ４）鉴定特征 ８．３．１　卵 白色，圆球形，直径约１． ０ｍｍ 。 ８．３．２　贝壳 ８．３．２．１　成螺 壳高１ ０ｍｍ～２ ０ｍｍ，壳宽５ｍｍ～８ｍｍ，呈高塔形 ，有８个～１ ０个螺层和锯齿状的缝合线 。壳质 薄易碎。壳顶尖，褐色。壳口椭圆形 ，壳口高超过壳口宽的长度 ，无环唇肋 。轴向刻纹由生长线构成 ，脐 孔微小，几乎完全被反折的轴唇所覆盖 。在同一种群的个体间 ，壳面颜色差异很大 ，基色为纯白色至浅 黄色，体螺层周缘下常有黑褐色螺旋状色带 。壳面基色与螺轴反圈形成的淡褐色或黑褐色条带相重叠 或分隔，产生特殊的斑驳色块 。（参见附录 Ｂ中图Ｂ． １） ８．３．２．２　幼螺 幼螺贝壳在外部形态上与成螺无太大差异 ，只是个体小 ，壳质更薄 ，在体螺层周缘有明显的棱角状 外突，成螺则无此特征 。 ８．３．３　螺体 动物呈淡黄色 ，背部从领到头部间有一条黑色的中线 ，头部两侧至前触角间各有一条黑线 ，为触角 收缩肌。动物常以黏液附着在植株上栖息 。（参见图Ｂ． ２） ８．３．４　生殖系统 爪薄，部分隐藏 。生殖腔非常短 。输精管相当长 ，从端部斜插入阴茎本体 。阴茎十分肿胀 ，膨大呈 棍棒状，其宽度是阴茎本体 ４倍～５倍，阴茎鞘明显 ，阴茎本体较长 。矢囊很长 ，壁厚。粘液腺一枝 ，分 为两个树杈 。受精囊柄基部肿胀 ，受精囊小 。（参见图Ｂ． ３） 犆 狅 犮 犺 犾 犻 犮 犲 犾 犾 犪 和犘 狉 犻 犲 狋 狅 犮 犲 犾 犾 犪 解剖特征的不同在于 ：前者鞭状体较长 ，而后者较短或仅留痕迹 。 ８．３．５　犆 犗 犐基因序列鉴定 按附录Ｃ方法提取 ＤＮＡ、Ｐ Ｃ Ｒ扩增和双向测序 ，将所测序列与 Ｇ ｅ ｎ ｂ ａ ｎ ｋ 登录号为 Ｋ Ｐ ２ ３ ３ ８ ４ ３ 已知 尖头旋蜗牛的标准 ＣＯ Ｉ基因序列进行比对 ，相似度一般应 ≥９ ５％。 ９　结果评定 以贝壳形态为基本鉴定依据 ，螺体和生殖系统解剖形态为辅助鉴定特征 ，并注意与近似种鉴别 （参 见附录Ｄ） ，对于贝壳特征典型的个体符合 ８． ３． ２鉴定为尖头旋蜗牛 犆．犪 犮 狌 狋 犪（Ｍü ｌ ｌ ｅ ｒ，１ ７ ７ ４） ，对于贝壳 特征有变异的个体 ，需同时符合 ８． ３． ２、８． ３． ３和８． ３． ４才能鉴定为尖头旋蜗牛 犆．犪 犮 狌 狋 犪（Ｍü ｌ ｌ ｅ ｒ，１ ７ ７ ４） 。 符合８． ３． ５作为前期初筛或形态鉴定结果的分子佐证 。 ３犛 犖／犜４ ６ ３ ８—２ ０