书书书　 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛 犖／犜４ ６ ３ ７—２ ０ １ ６ 地中海白蜗牛检疫鉴定方法 犇 犲 狋 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犻 犱 犲 狀 狋 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 犆 犲 狉 狀 狌 犲 犾 犾 犪狏 犻 狉 犵犪 狋 犪（犇 犪犆 狅 狊 狋 犪 ，１ ７ ７ ８） ２ ０ １ ６０ ８２ ３发布 ２ ０ １ ７０ ３０ １实施 中 华 人 民 共 和 国 国家质量监督检验检疫总局发 布 rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.书书书前　　言 　　本标准按照 Ｇ Ｂ／Ｔ１． １—２ ０ ０ ９给出的规则起草 。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 。本标准起草单位 ：中华人民共和国福建出入境检验检疫局 、中华人民共和国浙江出入境检验检疫局、中华人民共和国张家港出入境检验检疫局 、中华人民共和国西藏出入境检验检疫局 。本标准主要起草人 ：周卫川、王沛、林阳武、吴志毅、陆军、肖琼、文艺。 Ⅰ犛 犖／犜４ ６ ３ ７—２ ０ １ ６ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.地中海白蜗牛检疫鉴定方法 １　范围 本标准规定了地中海白蜗牛 犆 犲 狉 狀 狌 犲 犾 犾 犪狏 犻 狉 犵犪 狋 犪（Ｄ ａＣ ｏ ｓ ｔ ａ ，１ ７ ７ ８）的检疫鉴定方法 。本标准适用于地中海白蜗牛的检疫鉴定 。 ２　规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本文件 。 Ｓ Ｎ／Ｔ３ ０ ６ ７—２ ０ １ １　软体动物常规检疫规范 ３　术语与定义 Ｓ Ｎ／Ｔ３ ０ ６ ７确定的以及下列术语和定义适用于本文件 。 ３．１矢囊　犱 犪 狉 狋 狊 犪 犮 犽蜗牛生殖系统中一个藏有 １枚中空的钙质或壳质骨针的肌肉质的囊 。一般用长径与短径之比来描述矢囊的相对长度 。 ３．２恋矢　犾 狅 狏 犲犱 犪 狉 狋矢囊中的骨针 ，为蜗牛交配时刺激器官 ，一般一个矢囊含有 １枚恋矢，恋矢的质地和形状常用于分类。 ３．３盲管　犱 犻 狏 犲 狉 狋 犻 犮 狌 犾 狌 犿受精囊柄分枝形成盲管 ，盲管的缺失与否是区别欧洲蜗牛科与湿螺科的主要鉴别特征 。 ３．４犆 犗 犐基因　犮狔狋 狅 犮 犺 狉 狅 犿 犲犮 狅 狓 犻 犱 犪 狊 犲狊 狌 犫 狌 狀 犻 狋 犐线粒体细胞色素 Ｃ氧化酶亚基 Ｉ，该基因为 ＤＮＡ条形码鉴定靶标基因 ，常用于物种鉴定和系统发育关系研究 。 ４　地中海白蜗牛基本信息 学名：犆 犲 狉 狀 狌 犲 犾 犾 犪狏 犻 狉 犵犪 狋 犪（Ｄ ａＣ ｏ ｓ ｔ ａ ，１ ７ ７ ８）异名：犆 狅 犮 犺 犾 犲 犪狏 犻 狉 犵犪 狋 犪Ｄ ａＣ ｏ ｓ ｔ ａ ，１ ７ ７ ８；犎 犲 犾 犻 犮 犲 犾 犾 犪狏 犻 狉 犵犪 狋 犪（Ｄ ａＣ ｏ ｓ ｔ ａ ，１ ７ ７ ８） ；犎 犲 犾 犻 狓狏 犪 狉 犻 犪 犫 犻 犾 犻 狊Ｄ ｒ ａｐａ ｒ ｎ ａ ｕ ｄ，１ ８ ０ １；犎 犲 犾 犻 狓犿犪 狉 犻 狋 犻 犿犪 Ｄ ｒ ａｐａ ｒ ｎ ａ ｕ ｄ，１ ８ ０ ５；犎 犲 犾 犻 狓犮 犪 狊 狋 狉 狅 犻 犪 狀 犪 Ｓ ｅ ｒ ｖ ａ ｉ ｎ，１ ８ ８ ０；犎 犲 犾 犻 狓狋 犲 狉 狉 狅 狊 犪Ｌ ｏ ｃ ａ ｒ ｄ，１ ８ ９ ９；犡 犲 狉 狅狆犺 犻 犾 犪犲 狌 狓 犻 狀 犪 Ｃ ｌ ｅ ｓ ｓ ｉ ｎ，１ ８ ８ ３。英文名：Ｃ ｏ ｍｍ ｏ ｎｗ ｈ ｉ ｔ ｅｓ ｎ ａ ｉ ｌ ，Ｍ ｅ ｄ ｉ ｔ ｅ ｒ ｒ ａ ｎ ｅ ａ ｎｗ ｈ ｉ ｔ ｅｓ ｎ ａ ｉ ｌ ，ｗ ｈ ｉ ｔ ｅｓ ｎ ａ ｉ ｌ ，Ｖ ｉ ｎ ｅｙａ ｒ ｄｓ ｎ ａ ｉ ｌ ，Ｓ ｔ ｒ ｉｐｅ ｄｓ ｎ ａ ｉ ｌ ， Ｚ ｏ ｎ ｅ ｄｓ ｎ ａ ｉ ｌ 。 １犛 犖／犜４ ６ ３ ７—２ ０ １ ６ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.分类地位 ：软体动物门 Ｍｏ ｌ ｌ ｕ ｓ ｃ ａ ，腹足纲Ｇ ａ ｓ ｔ ｒ ｏｐｏ ｄ ａ，肺螺亚纲 Ｐ ｕ ｌ ｍ ｏ ｎ ａ ｔ ａ ，柄眼目Ｓ ｔｙｌ ｏ ｍｍ ａ  ｔ ｏｐ ｇｏ ｒ ａ，湿螺科Ｈｙ ｇｒ ｏ ｍ ｉ ｉ ｄ ａ ｅ ，白蜗牛属 犆 犲 狉 狀 狌 犲 犾 犾 犪 。地中海白蜗牛又称普通白蜗牛 ，主要近似种有忽视 白蜗牛犆 犲 狉 狀 狌 犲 犾 犾 犪狀 犲 犵犾 犲 犮 狋 犪（Ｄ ｒ ａｐａ ｒ ｎ ａ ｕ ｄ，１ ８ ０ ５） ，骏氏白蜗牛 犆 犲 狉 狀 狌 犲 犾 犾 犪 犼狅 狀 犻 犮 犪（Ｍｏ ｕ ｓ ｓ ｏ ｎ ，１ ８ ５ ４） 。地中 海白蜗牛的其他信息参见附录 Ａ。 ５　方法原理 地中海白蜗牛主要通过运输工具 、木质包装材料 、花卉盆景和污染的农副产品远距离传播 ，污染的 谷物和橘子是其最重要的传播媒介 ，由于这种蜗牛喜欢在麦子收获前成群结队地爬到快成熟的麦穗上 休眠，收割和干燥作业并不能将休眠的蜗牛彻底杀灭 ，因而疫区谷物传播的几率是很高的 。传播方式和 途径是确定现场检疫方式的依据 。贝壳形态 、软体特征和 ＣＯ Ｉ基因序列是实验室鉴定的主要依据 。 ６　器具和试剂 ６．１　器具 体视显微镜 、放大镜、手电筒、塑料自封袋 、广口标本瓶 、４ｍｍ孔径土壤筛 、小铁铲、游标卡尺 、白瓷 盘、培养皿、镊子、剪刀、显微镊子 、显微剪刀 、微针、解剖腊盘 、标签、微型离心机 、恒温金属浴 、Ｐ Ｃ Ｒ仪、 １． ５ｍＬ 离心管、０． ２ｍＬＰ Ｃ Ｒ 反应管、移液器。 ６．２　试剂 ７ ５％乙醇、无水乙醇 、硫酸镁、ＤＮＡ提取试剂盒 、Ｐ Ｃ ＲＭ ａ ｓ ｔ ｅ ｒＭ ｉ ｘ 、ｄ ｄ Ｈ ２Ｏ。 ７　现场检疫 对来自疫区 （参见附录 Ａ）的麦船、谷物和橘子等农产品 、木质包装材料 、集装箱必须重点检查 ，仔细 观察船舱 、集装箱的底部和四角部位以及所装货物与木质包装材料是否有蜗牛 ，由于该螺的生态习性不 同于其他蜗牛 ，喜欢在明亮的高处休眠 ，因此尤其要注意船仓 、集装箱顶部的检查 ，发现任何蜗牛都应及 时杀死或作熏蒸处理 。对来自疫区的原木 、盆景、苗木、水果等未经加工的植物性材料也应认真检查 ，对 可能被蜗牛污染的物品可用高压水枪冲洗检查或做预防性的熏蒸灭蜗处理 。蜗牛爬行过后 ，都会留下 银灰色的丝带状黏液痕迹 ，这是判定是否有蜗牛污染的重要依据 。发现蜗牛标本 ，随时装入塑料自封袋 或标本瓶带回实验室做进一步的检验鉴定 。发现盆景等携带土壤或其他细碎衬垫材料时 ，需过筛检查 是否有卵或幼螺 。 ８　实验室鉴定 ８．１　测量、观察、解剖和饲养 用游标卡尺测量蜗牛贝壳的壳高和壳宽 、卵粒直径 。用肉眼或放大镜或体视显微镜仔细观察卵和 螺的形态特征 。 将闷杀（见１ ０． １）处理后的标本 ，参照Ｓ Ｎ／Ｔ３ ０ ６ ７—２ ０ １ １中８． ３． １进行软体解剖 ，分离出生殖系统 。 单独查获的卵粒 ，参照Ｓ Ｎ／Ｔ３ ０ ６ ７—２ ０ １ １中８． ４方法，将其孵化和饲养为成螺后 ，再做鉴定 。 ２犛 犖／犜４ ６ ３ ７—２ ０ １ ６ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.８．２　白蜗牛属 犆 犲 狉 狀 狌 犲 犾 犾 犪 犛 犮 犺 犾 ü 狋 犲 狉 鉴定特征 贝壳低矮陀螺形 ，有５个～６１２个螺层，各螺层稍膨胀 ，贝壳白色 、灰色或黄褐色 ，常有黄褐色的色 带，色带常断续 。壳口内侧常为棕色或黄褐色 。胚螺层有放射状的细螺纹 。壳口圆形 ，稍倾斜，多有白色、褐色或红褐色十分明显的内环肋 ，脐孔稍窄 ，可透视。鞭状体短 ，黏液腺管状 。 ８．３　地中海白蜗牛 犆 犲 狉 狀 狌 犲 犾 犾 犪狏 犻 狉 犵犪 狋 犪（犇 犪犆 狅 狊 狋 犪 ）鉴定特征 ８．３．１　卵 圆形，白色，直径１． ５ｍｍ 左右。 ８．３．２　贝壳 ８．３．２．１　成螺 贝壳白色或微黄色 ，有时略带红色 ，通常在上部有 ２条褐色条带 ，下部有３条～６条狭窄条带 。有明显的圆锥形螺旋部 。一般有６个～７个螺层，各螺层膨胀略成凸形 ，最后一个螺层 （体螺层）圆形，其周缘圆滑 。体螺层上有无数不规则排列的 ，从细到中等粗细的生长线 ，有些个体体螺层下部有螺纹 。壳口一般为圆形 ，少数非常大的个体壳口为椭圆形 ，有中等厚度的内环肋 。唇白色或略带红色 ，边缘稍外折，不反转。脐孔形状多变 ，但通常是开放的 ，不被轴缘遮盖 。脐孔直径为壳宽的 １／１ ０～１／６，有时不位于中心。壳高６ｍｍ～１ ９ｍｍ，壳宽８ｍｍ～２ ５ｍｍ。（参见附录 Ｂ中图Ｂ． １） ８．３．２．２　幼螺 幼螺贝壳在外形上与成螺基本一致 ，壳质薄，易碎，壳口内侧无环唇肋 。 ８．３．３　螺体 软体浅灰色 ，略带红色或淡黄色 ，背部黑色 ，有大的结节 ，外套膜红棕色 ，触角浅灰色 ，透明，长约 ８ｍｍ。（参见图Ｂ． ２） ８．３．４　生殖系统 阴茎牵引肌短 ，阴茎本体长 ，通常是鞭状体的 ３倍～４倍。输精管细长 ，约为阴茎本体的 １． ５倍。矢囊大，插入腔室内 。粘液腺多 ，从副矢囊长出 ，四支，每支有分叉 ，中等长度 ，不卷曲。受精囊柄粗短 ，宽大，受精囊大 。（参见图Ｂ． ３） ８．３．５　犆 犗 犐基因片段序列鉴定 按附录Ｃ方法提取