书书书　 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛 犖／犜４ ５ ８ ９—２ ０ １ ６ 出口蔬菜中硝酸盐快速测定改进的镉还原分析法 犚 犪狆犻 犱犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳狀 犻 狋 狉 犪 狋 犲 犻 狀狏 犲 犵犲 狋 犪 犫 犾 犲 狊犳 狅 狉犲 狓 狆狅 狉 狋—犐 犿狆狉 狅 狏 犲 犱犮 犪 犱 犿 犻 狌 犿狉 犲 犱 狌 犮 狋 犻 狅 狀犿 犲 狋 犺 狅 犱 ２ ０ １ ６０ ８２ ３发布 ２ ０ １ ７０ ３０ １实施 中 华 人 民 共 和 国 国家质量监督检验检疫总局发 布 rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.书书书前　　言 　　本标准按照 Ｇ Ｂ／Ｔ１． １—２ ０ ０ ９给出的规则起草 。请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 。本标准起草单位 ：中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局 、中国检验检疫科学研究院 。本标准主要起草人 ：刘烨、汪海波、马微、司学兵、王飞、刘峰、郝世杰、吴永生、王传松、邹明强。 Ⅰ犛 犖／犜４ ５ ８ ９—２ ０ １ ６ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.出口蔬菜中硝酸盐快速测定改进的镉还原分析法 １　范围 本标准规定了出口蔬菜中硝酸盐快速测定的改进镉还原分析法 。本标准适用于出口蔬菜中硝酸盐含量的检测 。 ２　规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本文件 。 Ｇ Ｂ／Ｔ６ ６ ８ ２　分析实验室用水规格和试验方法 ３　方法提要 试样经除去色素等大分子物质后 ，试样中硝酸盐经过镉柱还原成亚硝酸盐 ，亚硝酸盐经过重氮偶合显色，根据颜色深浅与亚硝酸盐标准比较定量 ，测得亚硝酸盐总量 ，由此总量减去试样中亚硝酸盐本底含量，即得试样中硝酸盐含量 。 ４　试剂与材料 除另有说明外 ，所用试剂均为分析纯 ，水为符合 Ｇ Ｂ／Ｔ６ ６ ８ ２的二级水 。 ４．１　硼砂（Ｎ ａ２Ｂ４Ｏ７·１ ０Ｈ ２Ｏ，粉末） 。 ４．２　亚铁氰化钾 ［Ｋ４（Ｆ ｅ（ＣＮ）６） ·３Ｈ２Ｏ］ 。 ４．３　乙酸锌［Ｚ ｎ（ＣＨ３ＣＯＯ）２·２Ｈ２Ｏ］ 。 ４．４　盐酸（３ ７％，ρ＝１． １ ９ｇ／ｍＬ） 。 ４．５　氨水（２ ５％，ρ＝０． ９ １ｇ／ｍＬ） 。 ４．６　对氨基苯磺酸 （Ｃ６Ｈ７ＮＯ３Ｓ） 。 ４．７　盐酸萘乙二胺 （Ｃ１ ２Ｈ１ ４Ｎ２·２ＨＣ ｌ） 。 ４．８　硝酸钠（Ｎ ａ ＮＯ ３，纯度不低于 ９ ９％） 。 ４．９　亚硝酸钠 （Ｎ ａ ＮＯ ２，纯度不低于 ９ ９％） 。 ４．１ ０　锌粒。 ４．１ １　锌棒：参见附录 Ａ。 ４．１ ２　硫酸镉（３ Ｃ ｄ Ｓ Ｏ ４·８Ｈ２Ｏ） 。 ４．１ ３　饱和硼砂溶液 ：称取５ ０． ０ｇ硼砂（４． １） ，置于１０ ０ ０ｍＬ 试剂瓶中 ，加水溶解 ，并稀释至 １０ ０ ０ｍＬ 。 ４．１ ４　亚铁氰化钾溶液 （０． ２ ５ｍ ｏ ｌ ／Ｌ） ：称取１ ０ ６． ０ｇ亚铁氰化钾 （４． ２） ，置于１０ ０ ０ｍＬ 试剂瓶中 ，加水溶解，并稀释至 １０ ０ ０ｍＬ 。 ４．１ ５　乙酸锌溶液 （１ｍ ｏ ｌ／Ｌ） ：称取２ ２ ０． ０ｇ乙酸锌（４． ３） ，置于１０ ０ ０ｍＬ 试剂瓶中 ，加水溶解 ，并稀释至 １０ ０ ０ｍＬ 。 １犛 犖／犜４ ５ ８ ９—２ ０ １ ６ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.４．１ ６　盐酸稀释液 （０． １ｍ ｏ ｌ／Ｌ） ：量取８． ３ｍＬ 盐酸（４． ４） ，置于１０ ０ ０ｍＬ 试剂瓶中 ，加水至１０ ０ ０ｍＬ 。 ４．１ ７　氨缓冲溶液 （ｐＨ ９． １ ５～９． ７ ８） ：量取３ ０ｍＬ盐酸（４． ４） ，加１ ０ ０ｍＬ 水，摇匀后，缓慢加入 ６ ５ｍＬ氨水（４． ５） ，加水至１０ ０ ０ｍＬ 。 ４．１ ８　氨缓冲溶液的稀释液 ：量取１ ０ ０ｍＬ 氨缓冲溶液 （４． １ ７） ，置于１０ ０ ０ ｍＬ 试剂瓶中 ，加水至 １０ ０ ０ｍＬ 。 ４．１ ９　对氨基苯磺酸溶液 （４ｇ／Ｌ） ：称取０． ４ｇ对氨基苯磺酸 （４． ６） ，置棕色瓶中 ，依次加８ ０ｍＬ 水、 ２ ０ｍＬ盐酸（４． ４） 。摇匀，避光保存 。 ４．２ ０　盐酸萘乙二胺溶液 （２ｇ／Ｌ） ：称取０． ２ｇ盐酸萘乙二胺 （４． ７） ，置棕色瓶中 ，加１ ０ ０ｍＬ 水。摇匀，现用现配。 ４．２ １　硝酸盐标准溶液 （５ ０ ０μｇ／ｍＬ，以氮计） ：Ｇ Ｓ Ｂ０ ５  １ １ ４ ４  ２ ０ ０ ０ 无机标准溶液 硝酸盐（以氮计） 。或准确称取 １． ５ １ ７６ ｇ于１ １ ０℃～１ ２ ０℃干燥恒重的硝酸钠 （４． ８） ，移入５ ０ ０ｍＬ 容量瓶中 ，加水溶解 ，并定容至刻度 。 ４．２ ２　硝酸盐标准使用液 （１． ０μｇ／ｍＬ，以氮计） ：临用前，吸取１． ０ ０ｍＬ 硝酸盐标准溶液 （４． ２ １） ，置于 ５ ０ ０ｍＬ 容量瓶中 ，加水定容至刻度 。 ４．２ ３　亚硝酸盐标准溶液 （１ ０ ０μｇ／ｍＬ，以氮计） ：Ｇ Ｓ Ｂ０ ７  １ ２ ７ ２  ２ ０ ０ ０ 无机标准溶液 亚硝酸盐 （以氮计） 。或准确称取 ０． ２ ４ ６４ ｇ于１ １ ０℃～１ ２ ０℃干燥恒重的亚硝酸钠 （４． ９） ，移入５ ０ ０ｍＬ 容量瓶中 ，加水溶解 ，并定容至刻度 。 ４．２ ４　亚硝酸盐标准使用液 （０． ５ ０μｇ／ｍＬ，以氮计） ：临用前，吸取２． ５ ０ｍＬ 亚硝酸盐标准溶液 （４． ２ ３） ，置于５ ０ ０ｍＬ 容量瓶中 ，加水定容至刻度 。 ４．２ ５　亚硝酸盐标准使用液 （１． ０ ０μｇ／ｍＬ，以氮计） ：临用前，吸取１． ０ ０ｍＬ 亚硝酸盐标准溶液 （４． ２ ３） ，置于１ ０ ０ｍＬ 容量瓶中 ，加水定容至刻度 。 ５　仪器和设备 ５．１　分光光度计 ，配１ｃ ｍ比色杯。 ５．２　分析天平 ：感量为０． １ｍｇ和０． ０ １ｇ。 ５．３　匀浆磨：７ ０ ０ｍＬ ，转速２０ ０ ０ｒ／ｍ ｉ ｎ～１ ００ ０ ０ｒ ／ｍ ｉ ｎ可调。 ５．４　超声波清洗机 ：５ ０ ０Ｗ～８ ０ ０Ｗ。 ５．５　离心机：５ ０ｍＬ，不低于２０ ０ ０ｒ／ｍ ｉ ｎ。 ５．６　层析柱：带活塞，１ ３×２ ５ ０ｍｍ 或相似者 。 ５．７　抽滤瓶：４０ ０ ０ｍＬ 。 ５．８　抽气泵。 ５．９　镉柱：参见附录 Ｂ。 ５．１ ０　硝酸盐还原柱装置 ：参见附录 Ｃ。 ５．１ １　镉柱的活化 ：开启抽气泵 ，转动活塞 ，吸去镉柱中水溶液至镉面 。用量筒分别量取 １ ０ｍＬ盐酸稀释液（４． １ ６） 、水、氨缓冲溶液稀释液 （４． １ ８） ，依次倒入镉柱中 ，并逐一吸去 ，保持残液至镉面 。 ５．１ ２　镉柱还原率测定 ：吸取５． ０ ０ｍＬ 硝酸盐标准使用液 （４． ２ ２） ，于已活化的镉柱中 ，加入１ｍＬ氨缓冲溶液（４． １ ７） ，开启活塞 ，调节流速 ，用２ ５ｍＬ比色管收集流出液 。当柱中溶液全部流出后 ，加入１ ３ｍＬ～１ ５ｍＬ水，全开活塞 ，继续收集完流出液 。依次加入 ２ｍＬ对氨基苯磺酸溶液 （４． １ ９） ，１ｍＬ盐酸萘乙二胺溶液（４． ２ ０）于比色管中 ，加水至刻度 。摇匀，静置１ ５ｍ ｉ ｎ。用１ｃ ｍ比色杯，以零管调节零点 ，于波长 ５ ３ ８ｎ ｍ，测定吸光值 Ａ。 ５．１ ３　镉柱回收率测定 ：吸取５． ０ ０ｍＬ 亚硝酸盐标准使用液 （４． ２ ５） ，于已活化的镉柱中 ，以下按５． １ ２自 “加入１ｍＬ氨缓冲溶液 （４． １ ７） ”起依法操作 。 ２犛 犖／犜４ ５ ８ ９—２ ０ １ ６ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.５．１ ４　亚硝酸盐标准液测定 ：取两只２ ５ｍＬ比色管中 ，分别加入 ０． ０ ０ｍＬ ，５． ０ ０ｍＬ 亚硝酸盐标准使用液（４． ２ ５） ，以下按５． １ ２自“依次加入 ２ｍＬ对氨基苯磺酸溶液 （４． １ ９） ”起依法操作 。 ５．１ ５　镉柱还原效率和回收率的计算 ，见式（１） 。 犡＝犃犃５×１ ０ ０％ …………………………（ １） 　　式中： 犡— — —还原效率或回收率 ； 犃— — —经过还原柱后硝酸盐或亚硝酸盐的吸光值 ； 犃５— — —５ｍＬ亚硝酸盐标准液的吸光值 。还原效率应大于 ９ ８％、回收率范围为 ９ ０％～９ ８％。 ６　试样制备与保存 将所取的原始样品缩分出 ５ ０ ０ｇ可食部分 （不可用水洗 ）切碎后，用匀浆磨充分搅碎至匀浆 。试样均分成两份 ，装入洁净容器 ，密封，并标明标记 。于－１ ８℃以下冷冻保存 。 ７　测定步骤 ７．１　提取与净化 称取１ ０ｇ（精确至０． ０ １ｇ）制成匀浆的试样于 ２ ５ ０ｍＬ 容量瓶中 ，依次加入 １ ５ｍＬ饱和硼砂溶液（４． １ ３） 、１ ５ ０ｍＬ 水。如果试样结块 ，用玻璃棒捣碎或超声 ３ｍ ｉ ｎ～５ｍ ｉ ｎ。再加入５ｍＬ亚铁氰化钾溶液（４． １ ４） 、５ｍＬ乙酸锌溶液 （４． １ ５） ，加水至刻度 ，摇匀。倒弃表层少许悬浮液 ，将样液倒入 ５ ０ｍＬ离心管中，２０ ０ ０ｒ／ｍ ｉ ｎ离心３ｍ ｉ ｎ，上清液备用