SN-T 4561-2016 转基因检测非标方法确认评价指南

书书书　中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜４５６１—２０１６转基因检测非标方法确认评价指南犌狌犻犱犲犾犻狀犲犳狅狉狏犪犾犻犱犪狋犻狅狀狅犳犵犲狀犲狋犻犮犪犾犾狔 犿狅犱犻犳犻犲犱狅狉犵犪狀犻狊犿狋犲狊狋犿犲狋犺狅犱狊２０１６０８２３发布２０１７０３０１实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布 rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.书书书前　　言　　本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国北京出入境检验检疫局。本标准主要起草人：饶红、张锡全、郭铮蕾、傅溥博、李宏、梁新苗、马丹、徐姗、韩癑、林远辉。 Ⅰ犛犖／犜４５６１—２０１６ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.引　　言　　在本标准中技术性内容与欧盟委员会联合研究中心组织编写的指南性文件《ＤｅｆｉｎｉｔｉｏｎｏｆＭｉｎｉｍｕｍＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅＲｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓｆｏｒＡｎａｌｙｔｉｃａｌＭｅｔｈｏｄｓｏｆＧＭＯＴｅｓｔｉｎｇＥｕｒｏｐｅａｎＮｅｔｗｏｒｋｏｆＧＭＯＬａ ｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ》中的内容完全一致。该指南性文件中规定了转基因检测方法涉及的性能指标的判定标准，这一文件是欧盟对转基因非标检测方法确认过程是否有效的评价依据。在欧盟范围内所有转基因非标检测方法的确认均使用这一文件进行评价。本标准采纳了该指南的技术性内容。在转基因检测领域，国内尚无指导性的行业或国家标准规范来统一转基因检测方法确认工作的尺度，保证不同实验室在统一的技术规范指导之下进行方法确认工作，因此编制本标准。 Ⅱ犛犖／犜４５６１—２０１６ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.转基因检测非标方法确认评价指南１　范围本标准规定了转基因生物检验方法确认中的术语和定义、技术方案、数据统计分析、方法的性能指标及结果报告等评价内容。本标准适用于拟制定或修订的各类方法中涉及转基因生物定性、定量检验方法的确认活动有效性的评价。２　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ６３７９．２　测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）　第２部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（ＩＳＯ５７２５  ２：１９９４ＩＤＴ）ＧＢ／Ｔ２７０２５　检测和校准实验室能力的通用要求（ＩＳＯ／ＩＥＣ１７０２５：２００５ＩＤＴ）３　术语和定义下列术语和定义适用于本文件。３．１待确认方法　犪犾狋犲狉狀犪狋犻狏犲犿犲狋犺狅犱拟制定或修订的用于检验给定目标转基因生物的分析方法。３．２基准方法　狉犲犳犲狉犲狀犮犲犿犲狋犺狅犱国际、国家或行业或组织认可并被广泛接受的方法。优先考虑国际标准化组织（ＩＳＯ）、中国国家标准（ＧＢ）、国际分析家协会（ＡＯＡＣ）推荐的方法，其他国际认可的方法也可以作为基准方法。３．３方法确认　狏犪犾犻犱犪狋犻狅狀狅犳犿犲狋犺狅犱使用批准生效的确认方案中所规定的统计学方法，比较分析使用待确认方法（３．１）和基准方法（３．２）获得的检测结果，证实待确认方法有足够的可信度。３．４实验室内确认　狏犪犾犻犱犪狋犲犱犻狀狋犺犲犾犪犫狅狉犪狋狅狉狔在组织实验室或方法确认负责人的指导下，在方法制定或使用的实验室内对待确认方法和基准方法进行比较。３．５合作实验室间的研究　犻狀狋犲狉  犾犪犫狅狉犪狋狅狉狔犮狅犾犾犪犫狅狉犪狋犻狏犲狊狋狌犱狔几个实验室在有证明文件的情况下对一个或多个稳定的、均一的原料进行量化检测实验，并把结果汇编成单一的文件。合作实验的指导方针在ＩＳＯ５７２５和ＩＳＯ／ＡＯＡＣ／ＩＵＰＡＣ协议草案中有详细的描述。１犛犖／犜４５６１—２０１６ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.３．６方法确认负责人或组织实验室的负责人　狊狋狌犱狔犱犻狉犲犮狋狅狉狅狉狅狉犵犪狀犻狕犻狀犵犾犪犫狅狉犪狋狅狉狔狉犲狊狆狅狀狊犻犫犻犾犻狋犻犲狊负责组织实验室内方法比较，提出基准方法，依照方法确认标准来确定提供试验数据；并制定和组织实施实验室间协同试验方案等确认工作的人员。３．７协作者　犮狅犾犾犪犫狅狉犪狋狅狉狊在方法确认负责人或组织实验室的指导下进行实验分析，并按照要求对待确认方法进行各项确认试验并报告所有结果的人员。协作者可以是管理机构、工厂或研究院等不同实验室的有分子生物学试验经验的人员。３．８协作实验室　犮狅犾犾犪犫狅狉犪狋犲犾犪犫狅狉犪狋狅狉狔协作者所属的实验室。协作实验室应通过ＧＢ／Ｔ２７０２５（ＩＳＯ／ＩＥＣ１７０２５：２００５ＩＤＴ）认可，实验室间协同试验所需的基准方法在实验室认可范围内。３．９适用性　犪狆狆犾犻犮犪犫犻犾犻狋狔用于鉴定基质、分析物或种类的方法的应用范围，根据其性能特征来判断它的浓度范围和研究／监控类型是合适的。也就是通常所说的方法的局限性。３．１０实用性　狆狉犪犮狋犻犮犪犫犻犾犻狋狔操作的简便性，根据完成特定必要的性能标准从而符合指定的目的所需的样品量和费用。３．１１犇犖犃浓度　犇犖犃犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀每个单位体积溶液中分析物的数量。３．１２犇犖犃断裂度　犇犖犃犱犲犵狉犲犲狅犳狉狌狆狋狌狉犲基因组ＤＮＡ（高分子量）断裂成ＤＮＡ碎片的断裂度。３．１３犇犖犃提取纯度　犇犖犃犲狓狋狉犪犮狋犻狅狀狆狌狉犻狋狔降低可以观察到的或可测量到的ＰＣＲ抑制物的作用。３．１４特异性　狊狆犲犮犻犳犻狋狔方法只能检测特定的分析物。３．１５动态范围　犱狔狀犪犿犻犮狉犪狀犵犲由合作实验证明了分析过程内的浓度间隔具有适当水平的精确度和正确度。３．１６真实度　狋狉狌狀犲狊狊大量实验结果的平均值和认可参考值的一致性。真实度的量度标准通常是以斜率表示的。３．１７扩增效率　犪犿狆犾犻犳犻犮犪狋犻狅狀犲犳犳犻犮犻犲狀犮狔ＤＮＡ扩增呈指数上升的效率。ＰＣＲ原理中，反应一个循环，ＰＣＲ产物扩增一倍，反应犖个循环，理论上应为原来的２犖。此时，理论的扩增效率是１００％。实际上由于酶、ｄＮＴＰｓ、引物、模板等因素，扩增效率达不到１００％，１００％的扩增效率换算得到的标准曲线斜率是－３．３２。扩增效率可以用式（１）２犛犖／犜４５６１—２０１６ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.计算。Ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ＝１０－１ｓｌｏｐｅ（）－１ …………………………（１）　　式中：Ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ— — —效率；ｓｌｏｐｅ— — —斜率。３．１８犚２系数　犚２犮狅犲犳犳犻犮犻犲狀狋通过线性同归分析获得的标准曲线的相关系数。３．１９精密度— — —相对可重复性标准偏差　狉犲犾犪狋犻狏犲狉犲狆犲犪狋犻犫犻犾犻狋狔狊狋犪狀犱犪狉犱犱犲狏犻犪狋犻狅狀；犚犛犇狉在重复性（重现性）条件下获得的测试结果的标准偏差。可重复性条件是相同操作人员在短时间的间隔时间内在同一实验室，应用相同的仪器设备、相同的方法，完成相同的测试项目所获得的独立测试结果条件。３．２０定量检测低限　犾犻犿犻狋狅犳狇狌犪狀狋犻狋犪狋犻狅狀；犔犗犙被检测的样品在合适的精确度水平上能被检测出的最低含量或浓度，并且依据ＧＢ／Ｔ６３７９．２，经过合作实验的满意证明或单一实验室的确认。３．２１检测低限　犾犻犿犻狋狅犳犱犲狋犲犮狋犻狅狀；犔犗犇被检测物能被可靠检出的最低浓度或含量。注：不必进行定量，并且已经经过合作实验室的证明或单一实验室的确认。３．２２稳健性　狉狅