SN-T 4545.2-2016 商品化试剂盒检测方法沙门氏菌方法二

书书书　中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜４５４５．２—２０１６商品化试剂盒检测方法沙门氏菌　方法二犆狅犿犿犲狉犮犻犪犾犽犻狋犿犲狋犺狅犱 —犛犪犾犿狅狀犲犾犾犪 —犜犲狊狋犿犲狋犺狅犱 Ⅱ ２０１６０８２３发布２０１７０３０１实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布 rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.书书书前　　言　　本部分是ＳＮ／Ｔ４５４５的第２部分。本部分按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国北京出入境检验检疫局、中华人民共和国福建出入境检验检疫局。本部分主要起草人：曾静、张西萌、付溥博、韩笑、王紫薇、汪琦、郑晶。 Ⅰ犛犖／犜４５４５．２—２０１６ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.商品化试剂盒检测方法沙门氏菌　方法二１　范围ＳＮ／Ｔ４５４５的本部分规定了食品中沙门氏菌显色培养筛选和乳胶凝集快速检测方法。本部分适用于食品中沙门氏菌的定性检测。本部分应用的显色筛选培养基可检测所有血清型的沙门氏菌；乳胶凝集反应只适用于除Ａ群和Ｆ群外的沙门氏菌。２　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ４７８９．４　食品安全国家标准　食品微生物学检验　沙门氏菌检验ＧＢ１９４８９　实验室　生物安全通用要求ＧＢ／Ｔ２７４０３　实验室质量控制规范　食品分子生物学检测ＳＮ／Ｔ２７７５　商品化食品检测试剂盒评价方法ＳＮ／Ｔ３２６６　食品微生物检验方法确认技术规范３　生物安全措施为了保护实验室人员的安全和防止污染，应由具备资格的工作人员检测沙门氏菌。所有培养物、ＤＮＡ提取物和废弃物应按照ＧＢ１９４８９和ＧＢ／Ｔ２７４０３中的有关规定执行。４　方法原理首先，利用显色筛选培养基来判定是否存在沙门氏菌，显色筛选培养基中添加Ｃ８酯酶和β Ｄ葡糖苷酶，Ｃ８酯酶在２４ｈ内使沙门氏菌呈现紫红色菌落，β Ｄ葡糖苷酶使非沙门氏菌呈其他颜色，即可通过菌落颜色进行判定。然后，利用乳胶凝集实验（ｌａｔｅｘａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎｔｅｓｔ）来对除部分Ａ群和Ｆ群以外的沙门氏菌进行确认，乳胶颗粒表面包被与除部分Ａ群和Ｆ群以外的沙门氏菌的特异性抗原具有特异性的多价抗血清，可通过是否凝集对非Ａ群和Ｆ群沙门氏菌进行判定，部分Ａ群和Ｆ群沙门氏菌则需进一步实验确证。５　试剂和材料５．１　沙门氏菌快速检测试剂盒本试剂盒参考ＳＮ／Ｔ２７７５和ＳＮ／Ｔ３２６６由国家认监委商品化食品检测试剂盒评价专家委员会组织评价。具体评价结果参见附录Ａ。试剂盒组成如下：１犛犖／犜４５４５．２—２０１６ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.ａ）　缓冲蛋白胨水（ＢＰＷ）；ｂ）　显色筛选培养基：伯乐生命医学产品（上海）有限公司的产品；ｃ）　抑菌胶囊：伯乐生命医学产品（上海）有限公司的产品；ｄ）　乳胶凝集试剂：伯乐生命医学产品（上海）有限公司的产品。试剂盒储存于２℃～８℃，有效期１４个月。５．２　沙门氏菌质控菌株沙门氏菌标准菌株。６　仪器和设备除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：ａ）　冰箱：２℃～５℃。ｂ）恒温培养箱：４１．５℃±１℃ ，３７℃±１℃ 。ｃ）均质器、振荡器。ｄ）电子天平：感量０．１ｇ。ｅ）无菌锥形瓶：容量５００ｍＬ，２５０ｍＬ。ｆ）无菌吸管：１ｍＬ（具０．０１ｍＬ刻度）、１０ｍＬ（具０．１ｍＬ刻度）或微量移液器及吸头。ｇ）无菌培养皿：直径９０ｍｍ。ｈ）ｐＨ计或ｐＨ比色管或精密ｐＨ试纸。７　检测程序食品中沙门氏菌快速检测方法二的流程图见图１。２犛犖／犜４５４５．２—２０１６ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.图１　食品中沙门氏菌快速检测方法流程图８　操作步骤８．１　样品制备、增菌培养称取２５ｇ（ｍＬ）样品放入盛有２２５ｍＬＢＰＷ的无菌均质杯中，加入一个抑菌胶囊，以８０００ｒ／ｍｉｎ～１００００ｒ／ｍｉｎ均质１ｍｉｎ～２ｍｉｎ，或置于盛有２２５ｍＬ的无菌均质袋中，加入一个抑菌胶囊，用拍击式均质器拍打１ｍｉｎ～２ｍｉｎ。若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。若样品为液态，不需要均质，加入一个抑菌胶囊后，震荡混匀。测定ｐＨ值，用１ｍｏｌ／ｍＬ无菌氢氧化钠或盐酸调ｐＨ至６．８±０．２。无菌操作将样品转至５００ｍＬ锥形瓶中；如使用均质袋，可直接进行培养，于４１．５℃±１℃ 培养１８ｈ±２ｈ。如为冷冻产品，在４５℃以下不超过１５ｍｉｎ，或２℃～５℃不超过１８ｈ解冻。８．２　分离用接种环取增菌液１环，划线接种于显色筛选平板，于３７℃±１℃ 培养２４ｈ±２ｈ。观察平板上生长的菌落，沙门氏菌典型菌落特征为紫红色。８．３　乳胶凝集自显色筛选培养基上挑取两个以上典型或可疑菌落，作为乳胶凝集试验用的抗原。凝集即为阳性反应，可报告阳性结果。如凝集为阴性反应，应采用其他标准方法进行结果确认。３犛犖／犜４５４５．２—２０１６ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.９　结果判定与报告综合以上显色筛选平板、乳胶凝集和其他确认实验的结果，报告２５ｇ（ｍＬ）样品中检出或未检出沙门氏菌。４犛犖／犜４５４５．２—２０１６ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.附　录　犃（资料性附录）沙门氏菌显色培养筛选和乳胶凝集快速检测试剂盒评价结果１）犃．１　包容性和排他性选择１００株经确认的沙门氏菌标准菌株和分离菌株，用显色培养筛选和乳胶凝集快速检测试剂盒方法进行测试，结果全部为阳性。选择３０株经确认的非沙门氏菌的标准菌株，用试剂盒方法进行测试，结果全部为阴性。犃．２　灵敏度、特异性、准确度及检测限选择５个食品种类，１５个食品类型的样品，采用人工污染的方式分别制备未接种（Ｌ０）、低（Ｌ１）、高（Ｌ２）三个污染水平试验样品，分别用显色培养筛选和乳胶凝集快速检测方法和ＧＢ４７８９．４方法进行测试，相对灵敏度、特异性、准确度及检测限结果如表Ａ．１。表犃．１　灵敏度、特异性、准确度及检测限序号食品基质相对准确度ＡＣ相对特异性ＳＰ相对灵敏度ＳＥ检出限／（ＣＦＵ／ｇ）１肉类９９％９９％１００％０．３４２家禽９５％９７％９５％０．０５２３鱼与海产制品９９％９８％１００％０．０５２４蔬菜与水果９９％９９％１００％０．３４５奶制品９８％９８％９９％０．３４犃．３　耐变性分别对增菌温度（正常设置为４１．５℃）、增菌时间（正常设置为１８ｈ）、显色筛选平板培养温度（正常设置为３７℃）和显色筛选平板培养时间（正常设置为２４ｈ）四个变量进行耐变性实验，检测结果表明，该试剂盒增菌培养温度和时间，平板培养温度和时间在一定的波动范围内，对检测结果不影响，与说明书标示相符。犃．４　批间变异取３个不同批号试剂盒分别对含目标菌和非目标菌样品进行批间变异实验，检测结果表明，该试剂盒的批间差异不显著。１）　本评价结果仅适用于伯乐生命医学产品（上海）有限公司的沙门氏菌显色培养筛选和乳胶凝集快速检测试剂盒。５犛犖／犜４５４５．２—２０１６ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.

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