书书书　 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛 犖／犜４ ４ ５ ７—２ ０ １ ６ 出口饮料 、冰淇淋等食品中 １ １种合成着色剂的检测 　液相色谱法 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 １ １犽 犻 狀 犱 狊狅 犳狊 狔狀 狋 犺 犲 狋 犻 犮 犪 犾 狆犻犵犿 犲 狀 狋 狊 犻 狀狊 狅 犱 犪 狊 、犻 犮 犲犮 狉 犲 犪 犿犪 狀 犱狅 狋 犺 犲 狉犳 狅 狅 犱犳 狅 狉犲 狓 狆狅 狉 狋—犎 犘 犔 犆犿 犲 狋 犺 狅 犱 ２ ０ １ ６０ ３０ ９发布 ２ ０ １ ６１ ００ １实施 中 华 人 民 共 和 国 国家质量监督检验检疫总局发 布 rHgCb@g · ykbûR60
u5[PO –0
SÑU.书书书前　　言 　　本标准按照 Ｇ Ｂ／Ｔ１． １—２ ０ ０ ９给出的规则起草 。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 。本标准起草单位 ：中国检验检疫科学研究院 。本标准主要起草人 ：李娜、李淑娟。 Ⅰ犛 犖／犜４ ４ ５ ７—２ ０ １ ６ rHgCb@g · ykbûR60
u5[PO –0
SÑU.出口饮料 、冰淇淋等食品中 １ １种合成着色剂的检测 　液相色谱法 １　范围 本标准规定了果汁 、碳酸饮料 、冰淇淋中柠檬黄 、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、偶氮焰红 、偶氮玉红、亮蓝、喹啉黄、专利蓝、赤藓红１ １种合成着色剂的液相色谱检测方法 。本标准适用于果汁 、碳酸饮料 、冰淇淋中柠檬黄 、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、偶氮焰红 、偶氮玉红、亮蓝、喹啉黄、专利蓝、赤藓红１ １种合成着色剂的测定 。 ２　规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本文件 。 Ｇ Ｂ／Ｔ６ ６ ８ ２　分析实验室用水规格和试验方法 ３　方法提要 试样用５％乙腈水溶液超声提取 ，液相色谱仪进行测定 ，外标法定量 。 ４　试剂和材料 除另有说明 ，所用试剂均为分析纯 ，水为Ｇ Ｂ／Ｔ６ ６ ８ ２规定的一级水 。 ４．１　乙腈：色谱纯。 ４．２　乙酸铵：优级纯。 ４．３　３ ０％氨水：准确移取 ３ ０ｍＬ氨水，定容至１ ０ ０ｍＬ 。 ４．４　１ ０ ０ｍｍ ｏ ｌ ／Ｌ乙酸铵水溶液 ：准确称取 ７． ７ｇ乙酸铵，用水定容至 １Ｌ。 ４．５　合成着色剂标准物质 ： （纯度≥９ ９％）参见表Ａ． １。 ４．６　标准储备溶液 ：准确称取 １ ０ ０ｍｇ（精确至０． １ｍｇ）合成着色剂标准物质分别置于 １ ０ ０ｍＬ 容量瓶中，用水溶解定容 ，即为１ｍｇ／ｍＬ的标准储备液 ，置于０℃～４℃保存。 ４．７　混合标准工作溶液 ：分别移取一定体积的 １ １种合成着色剂标准储备溶液配制成 ５ ０μｇ／ｍＬ的混合标准溶液 ，于０℃～４℃保存。 ５　仪器和设备 ５．１　液相色谱仪 ：配有二极管阵列检测器 （ＤＡＤ） 。 ５．２　高速冷冻离心机 。 ５．３　涡旋振荡器 。 ５．４　超声波仪 。 ５．５　分析天平 ：感量０． １ｍｇ、０． ０ ０ １ｇ。 １犛 犖／犜４ ４ ５ ７—２ ０ １ ６ rHgCb@g · ykbûR60
u5[PO –0
SÑU.６　试样制备与保存 ６．１　试样制备 取代表性试样 ５ ０ ０ｇ，用搅拌器混和均匀 ，装入洁净的容器内 ，密封并标识 。 ６．２　试样保存 试样于０℃～４℃避光保存 。取样、制样及保存过程中应防止试样受到污染 。 ７　测定步骤 ７．１　样品前处理 称取试样 １ ０ｇ（精确至０． ０ １ｇ）于５ ０ｍＬ带刻度的试管中 ，用３ ０％氨水溶液调节 ｐＨ值至６． ０，加 ５％乙腈水溶液定容至 ５ ０ｍＬ，摇匀，超声提取 ３ ０ｍ ｉ ｎ，取２ ０ｍＬ液体置入高速离心管中 ，１ ５０ ０ ０ｒ ／ｍ ｉ ｎ，离心１ ０ｍ ｉ ｎ，取上清液过 ０． ４ ５μｍ滤膜，供液相色谱测定 。 ７．２　测定 ７．２．１　液相色谱条件 液相色谱条件为 ： ａ）　色谱柱：Ｓ Ｂ  Ｃ １ ８，１． ８μｍ，３． ０ｍｍ （内径）×１ ０ ０ｍｍ 或相当者 ； ｂ）　色谱柱温度 ：６ ０℃； ｃ）　流动相：乙腈／１ ０ ０ｍｍ ｏ ｌ ／Ｌ乙酸铵，梯度条件见表 １； 表１　梯度表 时间／ｍ ｉ ｎ 乙腈／％ １ ０ ０ｍｍ ｏ ｌ ／Ｌ乙酸铵／％ ０ ５ ９ ５ ３ ５ ９ ５ １ ０ ５ ０ ５ ０ １ １ ５ ９ ５ １ ３ ５ ９ ５ 　　ｄ）　流速０． ９ｍＬ／ｍ ｉ ｎ； ｅ）　进样量：５μＬ； ｆ）　检测波长 ：４ １ ０ｎ ｍ，５ ２ ０ｎ ｍ，６ ５ ０ｎ ｍ。 ７．２．２　定性测定 进行样品测定时 ，如果样品质量色谱图中出现与标准物质保留时间一致的色谱峰 ，且光谱图一致则可以判断样品中存在这种合成着色剂 ，混合标准溶液色谱图参见图 Ｂ． １。 ７．２．３　定量测定 本方法采用外标法定量测定 。样品中合成着色剂响应值应在标准工作曲线线性范围内 。 ２犛 犖／犜４ ４ ５ ７—２ ０ １ ６ rHgCb@g · ykbûR60
u5[PO –0
SÑU.７．３　空白试验 除不加样品外 ，按照上述步骤进行 。 ８　结果计算 试样中色素含量可由数据处理软件计算 ，或按照式 （１）计算： 犡犻＝犃×犮×犞犃ｓ×犿×１０ ０ ０…………………………（ １） 　　式中： 犡犻— — —试样中合成着色剂含量 ，单位为毫克每千克 （ｍｇ／ｋｇ） ； 犃— — —样液中合成着色剂色谱峰的峰面积 ； 犮— — —标准溶液中合成着色剂的浓度 ，单位为毫克每升 （ｍｇ／Ｌ） ； 犞— — —样液最终定容体积 ，单位为毫升 （ｍＬ） ； 犃ｓ— — —标准溶液中合成着色剂色谱峰的峰面积 ； 犿— — —最终溶液相当的试样质量 ，单位为克 （ｇ） 。 注：计算结果需将空白值扣除 。 ９　测定低限 、回收率 ９．１　测定低限 采用本方法对果汁 、碳酸饮料 、冰淇淋３种食品中 １ １种合成着色剂进行测定 ，１ １种合成着色剂的测定低限均为 ０． ５ｍｇ／ｋｇ。 ９．２　回收率 采用本方法对果汁 、碳酸饮料 、冰淇淋３种食品进行添加回收实验 ，添加水平为 ０． ５ ｍｇ／ｋｇ， ５ｍｇ／ｋｇ，５ ０ｍｇ／ｋｇ，添加水平及回收率数据参见表 Ｃ． １。 ３犛 犖／犜４ ４ ５ ７—２ ０ １ ６ rHgCb@g · ykbûR60
u5[PO –0
SÑU.附　录　犃（资料性附录 ） 合成着色剂标准物质基本信息 表犃．１　合成着色剂标准物质基本信息 中文名 英文名 ＣＡ Ｓ号码 检测波长 ／ｎ ｍ 保留时间 ／ｍ ｉ ｎ 柠檬黄 Ｔ ａ ｒ ｔ ｒ ａ ｚ ｉ ｎ ｅ １ ９ ３ ４  ２ １  ０ ４ １ ０ １． １ ７ ２ 苋菜红 Ａｍ ａ ｒ ａ ｎ ｔ ｈ ９ １ ５  ６ ７  ３ ５ ２ ０ ２． ４ ８ ２ 胭脂红 Ｐ ｏ ｎ ｃ ｅ ａ ｕ４ Ｒ ２ ６ １ １  ８ ２  ７ ５ ２ ０ ５． ９ ９ ８ 日落黄 Ｓ ｕ ｎ ｓ ｅ ｔｙｅ ｌ ｌ ｏ ｗＦ Ｃ Ｆ ２ ７ ８ ３  ９ ４  ０ ５ ２ ０ ６． ２ ６ ５ 诱惑红 Ａ ｌ ｌ ｕ ｒ ａｒ ｅ ｄＡＣ ２ ５ ９ ５ ６  １ ７  ６ ５ ２ ０ ６． ９ ０ ８ 偶氮焰红 Ａｍ ｉ ｄ ｏＮ ａ ｐｈ ｔ ｈ ｏ ｌＲ ｅ ｄＧ ３ ７ ３ ４  ６ ７  ６ ５ ２ ０ ７． １ １ ８ 偶氮玉红 Ａ ｚ ｏ ｒ ｕ ｂ ｉ ｎ ｅ ３ ５ ６ ７  ６ ９  ６ ５ ２ ０ ７． ７ ６ ８ 亮蓝 Ｂ ｒ ｉ ｌ ｌ ｉ ａ ｎ ｔｂ ｌ ｕ ｅＦ Ｃ Ｆ ３ ８ ４ ４  ４ ５  ９ ６ ５ ０ ８． ３ ２ ９ 喹啉黄 Ｑ ｕ ｉ ｎ ｏ ｌ ｉ ｎ ｅ ｙｅ ｌ ｌ ｏ ｗ ８ ０ ０ ４  ７ ２  １ ５ ２ ０ ８． ５ ５ ０ 专利蓝 Ｐ ａ ｔ ｅ ｎ ｔｂ ｌ ｕ ｅ ３ ５ ３ ６  ４ ９  ０ ６ ５ ０ ９． ８ ５ １ 赤藓红 Ｅ ｒｙｔ ｈ ｒ ｏ ｓ ｅ ｉ ｎ ｅ １ ６ ４ ２ ３  ６ ８  ０ ５ ２ ０ ８． ８ ９ １ ４犛 犖／犜４ ４ ５ ７—２ ０ １ ６ rHgCb@g · ykbûR60
u5[PO –0
SÑU.附　录　犅（资料性附录 ） 标准物质的色谱图 说明： 　　１— — —柠檬黄； ２— — —苋菜红； ３— — —胭脂红； ４— — —日落黄； ５— — —诱惑红； ６— — —偶氮焰红 ；７— — —偶氮玉红 ； ８— — —喹啉黄； ９— — —亮蓝； １ ０— — —赤藓红； １ １— — —专利蓝。 图犅．１　１ １种５μ犵／犿犔合成着色剂标准物质的色谱图 ５犛 犖／犜４ ４ ５ ７—２ ０ １ ６ rHgCb@g · ykbûR60
u5[PO –0
SÑU.附　录　犆（资料性附录 ） 回收水平及回收率范围 表犆．１　１ １种合成着色剂在果汁 、碳酸饮料 、冰淇淋中的添加水平及回收率范围 合成着色剂添加水平 ｍｇ／ｋｇ回收率范围 ％ 碳酸饮料 果汁 冰淇淋 柠檬黄０． ５ ７ ８． ５ ～９ ６． ６ ８ ４． ９ ～９ ９． ８ ８ ３． ５ ～９ ４． ６ ５ ７ ６． ０ ～９ ８． ９ ８ ８． １ ～９ ７． ６ ８ ６． ６ ～９ ８． ９ ５ ０