SN-T 3897-2014 化妆品中四环素类抗生素的测定

书书书　 /G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G28 /G29 /G2A /G2B /G2C /G2B /G2D /G2E /G2F /G30 /G31 犛犖／犜３８９７—２０１４ /G32 /G33 /G34 /G21 /G35 /G36 /G37 /G38 /G39 /G3A /G37 /G3B /G3C /G3D 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狋犲狋狉犪犮狔犮犾犻狀犲犪狀狋犻犫犻狅狋犻犮狊犻狀犮狅狊犿犲狋犻犮狊２０１４０１１３ /G3E /G3F ２０１４０８０１ /G40 /G41 /G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G27 /G28 /G29 /G2A /G2B /G2C /G2D /G2E /G2D /G2F /G30 /G31/G3E /G3F rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.书书书/G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G28 /G29 /G2A /G2B /G2C /G2B /G2D /G2E　 /G2F　 /G30　 /G31 /G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G28 /G29 /G2A /G27 /G2B /G2C /G2D ＳＮ／Ｔ３８９７—２０１４  /G21 /G27 /G30 /G31 /G28 /G32 /G33 /G28 /G32 /G34 /G35 /G36 /G37 /G38 /G39 /G26 /G3A /G3B /G3C /G3D /G3E ２ /G3F（１０００２９） /G34 /G35 /G36 /G3C /G40 /G39 /G41 /G3B /G42 /G34 /G3D １６ /G3F（１０００４５） /G43 /G44 /G45：（０１０）６８５３３５３３ /G46 /G47ｗｗｗ．ｓｐｃ．ｎｅｔ．ｃｎ /G21 /G27 /G30 /G31 /G28 /G32 /G33 /G48 /G49 /G4A /G4B /G4C /G4D /G4B /G4C  /G4E /G4F８８０×１２３０１／１６　 /G4B /G50１　 /G51 /G52２４ /G53 /G51 ２０１４ /G54１２ /G55 /G56 /G57 /G32 　２０１４ /G54１２ /G55 /G56 /G57 /G58 /G4B /G4C /G4B /G52１—１３００  /G59 /G3F：１５５０６６·２  ２７６４０　 /G5A /G5B１８．００ /G5C rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.书书书前　　言　　本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国浙江出入境检验检疫局。本标准主要起草人：黄超群、谢文、侯建波、史颖珠、陈玲玲、楼成杰、帅大尧、孙成琪。 Ⅰ犛犖／犜３８９７—２０１４ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.化妆品中四环素类抗生素的测定１　范围本标准规定了化妆品中二甲胺四环素、土霉素、四环素、去甲金霉素、金霉素、甲烯土霉素、强力霉素、差向脱水四环素、脱水四环素等９种四环素类抗生素测定的高效液相色谱（ＨＰＬＣ）和液相色谱 质谱／质谱（ＬＣ  ＭＳ／ＭＳ）检测方法。本标准适用于爽肤水、润肤乳、面膜、香皂、洗面奶、祛痘霜中９种四环素类抗生素的测定。本标准的液相色谱 质谱／质谱法为仲裁法。２　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ６６８２　分析实验室用水规格和试验方法第一法　高效液相色谱法３　方法提要以甲醇草酸溶液为溶剂，超声提取、离心、过滤，用配有二极管阵列检测器的液相色谱仪测定，外标法定量。４　试剂和材料除特殊注明外，所用试剂均为分析纯，所用水为符合ＧＢ／Ｔ６６８２规定的一级水。４．１　乙腈：液相色谱纯。４．２　甲醇：液相色谱纯。４．３　草酸：优级纯。４．４　甲酸：液相色谱纯。４．５　氨水。４．６　磷酸：优级纯。４．７　０．２％磷酸溶液：移取２．０ｍＬ磷酸（４．６），用水定容至１０００ｍＬ。４．８　０．０２ｍｏｌ／Ｌ草酸溶液：称取０．９０ｇ草酸（４．３），用水溶解并定容至５００ｍＬ。４．９　甲醇草酸溶液（１＋１，体积比）：量取５００ｍＬ甲醇（４．２）与５００ｍＬ草酸溶液（４．８）混合。４．１０　二甲胺四环素、土霉素、四环素、去甲金霉素、金霉素、甲烯土霉素、强力霉素、差向脱水四环素、脱水四环素标准品：纯度大于或等于９０％，参见附录Ａ中表Ａ．１。４．１１　标准储备溶液：分别称取经折算适量标准品（４．１０），分别用甲醇溶解并定容，溶液浓度为２００μｇ／ｍＬ，该标准储备液贮存于－１８℃以下，有效期６个月。４．１２　混合标准中间溶液：分别准确移取５．０ｍＬ二甲胺四环素、土霉素、四环素、去甲金霉素、金霉素、１犛犖／犜３８９７—２０１４ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.甲烯土霉素、强力霉素，２．０ｍＬ差向脱水四环素、脱水四环素标准储备溶液（４．１１），用甲醇定容至１００ｍＬ，配制成二甲胺四环素、土霉素、四环素、去甲金霉素、金霉素、甲烯土霉素、强力霉素浓度为１０μｇ／ｍＬ，差向脱水四环素、脱水四环素浓度为４．０μｇ／ｍＬ的混合标准中间溶液。该标准中间溶液贮存于－１８℃以下。４．１３　混合标准工作溶液：根据需要，将混合标准中间溶液（４．１２）用甲醇草酸溶液（４．９）稀释成适当浓度的标准工作溶液。４．１４　微孔滤膜：０．２２μｍ，有机相。５　仪器和设备５．１　液相色谱仪：配二极管阵列检测器。５．２　分析天平：感量０．０００１ｇ和０．０１ｇ。５．３　涡旋混合器。５．４　超声波清洗器。５．５　台式离心机：转速不低于４０００ｒ／ｍｉｎ。５．６　ｐＨ计。６　测定步骤６．１　样品处理准确称取１ｇ均匀试样（精确至０．０１ｇ），置入５０ｍＬ塑料离心管中，加入约２０ｍＬ甲醇草酸溶液（４．９），涡旋混匀后，用甲酸（４．４）或氨水（４．５）调节ｐＨ至７．０，超声提取２０ｍｉｎ，以４０００ｒ／ｍｉｎ离心３ｍｉｎ。上清液转移至２５ｍＬ容量瓶，用甲醇定容。过０．２２μｍ滤膜（４．１４），供高效液相色谱仪测定。６．２　测定６．２．１　液相色谱条件６．２．１．１　色谱柱：Ｃ１８，２５０ｍｍ×４．６ｍｍ（内径），５μｍ，或相当者；６．２．１．２　流动相：乙腈 ０．２％磷酸溶液，梯度洗脱程序见表１；６．２．１．３　检测波长：程序可变波长，０ｍｉｎ～１１．５０ｍｉｎ为３６０ｎｍ，１１．５１ｍｉｎ～２３．００ｍｉｎ为２７０ｎｍ；６．２．１．４　柱温；２５℃；６．２．１．５　流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；６．２．１．６　进样量：５０μＬ；６．２．１．７　后运行时间：４．０ｍｉｎ。表１　液相色谱法梯度洗脱程序时间／ｍｉｎ乙腈／％０．２％磷酸／％０．００１０９０６．００２５７５１６．００３５６５１８．００６０４０２３．００６０４０２犛犖／犜３８９７—２０１４ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.６．２．２　液相色谱测定根据样品中被测物的含量，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中各种四环素抗生素的响应值均应在仪器的线性范围内。标准工作溶液和样液等体积穿插进样测定，在上述色谱条件下，各目标化合物的参考保留时间参见附录Ｂ中表Ｂ．１。标准溶液的液相色谱图参见附录Ｃ中图Ｃ．１。７　空白试验除不加试样外，均按上述操作步骤进行。８　结果计算和表述用色谱数据处理机或按式（１）计算试样中四环素类抗生素的含量，计算结果须扣除空白值：犡犻＝犮犻×犞×１０００犿×１０００…………………………（１）　　式中：犡犻— — —试样中待测物质的含量，单位为毫克每千克（ｍｇ／ｋｇ）；犮犻— — —从标准曲线上得到的待测物质的溶液浓度，单位为微克每毫升（μｇ／ｍＬ）；犞— — —样液最终定容