SN-T 1197-2016 油菜中转基因成分检测普通PCR和实时荧光PCR方法

书书书　中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜１１９７—２０１６代替ＳＮ／Ｔ１１９７—２００３油菜中转基因成分检测普通犘犆犚和实时荧光犘犆犚方法犇犲狋犲犮狋犻狅狀狅犳犵犲狀犲狋犻犮犪犾犾狔犿狅犱犻犳犻犲犱犻狀犵狉犲犱犻犲狀狋狊犻狀狅犻犾狊犲犲犱狉犪狆犲—犆狅狀狏犲狀狋犻狅狀犪犾犪狀犱狉犲犪犾  狋犻犿犲犘犆犚犿犲狋犺狅犱狊２０１６１２１２发布２０１７０７０１实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布 rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.书书书前　　言　　本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准替代ＳＮ／Ｔ１１９７—２００３《油菜籽中转基因成分定性ＰＣＲ检测方法》。本标准与ＳＮ／Ｔ１１９７—２００３相比，主要技术性差异如下： — — —修改了标准的中文名称和英文名称； — — —增加了实时荧光ＰＣＲ检测方法； — — —增加了品系特异性检测方法。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准主要起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局。本标准主要起草人：潘良文、李想、吕蓉、杨捷琳、刘月明、高琴。本标准所代替标准的历次版本发布情况为： — — —ＳＮ／Ｔ１１９７—２００３。 Ⅰ犛犖／犜１１９７—２０１６ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.油菜中转基因成分检测普通犘犆犚和实时荧光犘犆犚方法１　范围本标准规定了油菜及其加工产品中转基因成分筛选、基因特异性和品系特异性普通ＰＣＲ和实时荧光ＰＣＲ检测方法。本标准适用于油菜及其加工产品中转基因成分筛选、基因特异性和品系特异性定性检测。２　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ６６８２　分析实验室用水规格和试验方法ＧＢ／Ｔ１９４９５．２　转基因产品检测　实验室技术要求ＧＢ／Ｔ２７４０３　实验室质量控制规范　食品分子生物学检测ＳＮ／Ｔ１１９４　植物及其产品转基因成分检测　抽样和制样方法３　术语、定义和缩略语３．１　术语和定义下列术语和定义适用于本文件。３．１．１转基因　狋狉犪狀狊犵犲狀犲将物种本身不具有的、来源于其他物种的功能ＤＮＡ序列，通过生物工程技术，使其在该物种中进行表达，以便使该物种获得新的品种特征。３．１．２实时荧光犘犆犚　狉犲犪犾  狋犻犿犲狆狅犾狔犿犲狉犪狊犲犮犺犪犻狀狉犲犪犮狋犻狅狀实时荧光聚合酶链式反应。是指在聚合酶链式反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个ＰＣＲ进程，荧光信号的强弱直接反映模板数量。３．１．３内源基因　犲狀犱狅犵犲狀狅狌狊犵犲狀犲在检测物种中拷贝数恒定的、不显示等位基因变化的基因。该基因可用于判定物种特异性。３．１．４外源基因　犲狓狅犵犲狀狅狌狊犵犲狀犲利用生物工程技术转入的其他生物基因，使该生物品种表现新的生物学性状。３．１．５犆狋值　犮狔犮犾犲狋犺狉犲狊犺狅犾犱每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。１犛犖／犜１１９７—２０１６ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.３．２　缩略语ＢＡＲ：草丁（铵）膦乙酰转移酶基因（ｐｈｏｓｐｈｉｎｏｔｈｒｉｃｉｎａｃｅｔｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｇｅｎｅ）ＢＡＲＮＡＳＥ：ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅｇｅｎｅｆｒｏｍ犅犪犮犻犾犾狌狊犪犿狔犾狅犾犻狇狌犲犳犪犮犻犲狀狊，来源于解淀粉芽孢杆菌的核糖核酸酶基因ＢＡＲＳＴＡＲ：ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｔｈｅｂａｒｎａｓｅｇｅｎｅｆｒｏｍ犅犪犮犻犾犾狌狊犪犿狔犾狅犾犻狇狌犲犳犪犮犻犲狀狊，来源于解淀粉芽孢杆菌的ＢＡＲＮＡＳＥ基因的特异抑制基因ｂｐ：ｂａｓｅｐａｉｒ，碱基对ＢＸＮ：ｎｉｔｒｉｌａｓｅｅｎｚｙｍｅｇｅｎｅｆｒｏｍ犓犾犲犫狊犻犲犾犾犪狆狀犲狌犿狅狀犻犪犲狊狌犫狊狆．犗狕犪犲狀犪犲，来源于肺炎克雷伯杆菌臭鼻亚种的腈水解酶基因ＣＰ４  ＥＰＳＰＳ：５  ｅｎｏｌｐｙｒｕｖｙｌｓｈｉｋｉｍａｔｅ  ３  ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅｇｅｎｅ，５ 莽草酸 ３ 磷酸合成酶基因ＣｒｕＡ：ＣｒｕｃｉｆｅｒｉｎＡｇｅｎｅ，油菜种子储藏蛋白基因ＣＴＡＢ：ｃｅｔｙｌｔｒｉｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍｂｒｏｍｉｄｅ，十六烷基三甲基溴化铵ｄＡＴＰ：ｄｅｏｘｙａｄｅｎｏｓｉｎｅｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ，脱氧腺苷三磷酸ｄＣＴＰ：ｄｅｏｘｙｃｙｔｉｄｉｎｅｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ，脱氧胞苷三磷酸ｄＧＴＰ：ｄｅｏｘｙｇｕａｎｏｓｉｎｅｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ，脱氧鸟苷三磷酸ＤＮＡ：ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄ，脱氧核糖核酸ｄＮＴＰ：ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ，脱氧核苷三磷酸ｄＵＴＰ：ｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ，脱氧尿苷三磷酸ＥＤＴＡ：ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃａｃｉｄ，乙二胺四乙酸ＧＯＸ：ｇｌｙｐｈｏｓａｔｅｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅｇｅｎｅ，草甘膦氧化还原酶基因ＨＭＧＩ／Ｙ：Ｈｉｇｈｍｏｂｉｌｉｔｙｇｒｏｕｐｐｒｏｔｅｉｎｇｅｎｅ，高移动性蛋白家族基因ＮＰＴＩＩ：ｎｅｏｍｙｃｉｎ  ３ ′ ｐｈｏｓｐｈｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｇｅｎｅ，新霉素 ３’磷酸转移酶基因ＰＡＴ：ｐｈｏｓｐｈｉｎｏｔｈｒｉｃｉｎａｃｅｔｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｇｅｎｅｆｒｏｍ犅犪犮犻犾犾狌狊犪犿狔犾狅犾犻狇狌犲犳犪犮犻犲狀狊，来源于解淀粉芽孢杆菌的草丁膦乙酰转移酶基因ＰＣＲ：ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，聚合酶链式反应ＰＥＰ：ｐｈｏｓｐｈｏｅｎｏｌｐｙｒｕｖａｔｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅｇｅｎｅ，磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因ＳＤＳ：ｓｏｄｉｕｍｄｏｄｅｃｙｌｓｕｌｆａｔｅ，十二烷基磺酸钠ｐＣａＭＶ３５Ｓ：３５Ｓｐｒｏｍｏｔｅｒｆｒｏｍｃａｕｌｉｆｌｏｗｅｒｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ，花椰菜花叶病毒３５Ｓ启动子ｐＦＭＶ３５Ｓ：３５Ｓｐｒｏｍｏｔｅｒｆｒｏｍａｍｏｄｉｆｉｅｄｆｉｇｗｏｒｔｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ，玄参花叶病毒３５Ｓ启动子ｐＮＯＳ：ｐｒｏｍｏｔｅｒｏｆｎｏｐａｌｉｎｅｓｙｎｔｈａｓｅｇｅｎｅｆｒｏｍＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ来源于农杆菌的胭脂碱合成酶基因启动子ｐＴＡ２９：ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｌｙｒｅｇｕｌａｔｅｄｐｒｏｍｏｔｅｒｆｒｏｍａｎｔｈｅｒ  ｓｐｅｃｉｆｉｃＴＡ２９ｇｅｎｅｆｒｏｍ犖犻犮狅狋犻犪狀犪狋犪犫犪犮狌犿，来源于烟草的花蕊特异性ＴＡ２９基因的发育调节启动子犜犪狇：犜犪狇ＤＮＡｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ，ＤＮＡ聚合酶ＴＥ：Ｔｒｉｓ  ＨＣｌ、ＥＤＴＡ缓冲液ｔＮＯＳ：ｔｅｒｍｉｎａ

SN-T 1197-2016 油菜中转基因成分检测 普通PCR和实时荧光PCR方法

SN-T 1197-2016 油菜中转基因成分检测普通PCR和实时荧光PCR方法