SN-T 1105-2019 大家白蚁检疫鉴定方法

书书书犐犆犛６５．０２０．０１犅１６中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜１１０５—２０１９代替ＳＮ／Ｔ１１０５—２０１４大家白蚁检疫鉴定方法犇犲狋犲犮狋犻狅狀犪狀犱犻犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀狅犳犆狅狆狋狅狋犲狉犿犲狊犮狌狉狏犻犵狀犪狋犺狌狊犎狅犾犿犵狉犲狀２０１９０９０３发布２０２００３０１实施中华人民共和国海关总署发布 rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.书书书前　　言　　本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准代替ＳＮ／Ｔ１１０５—２０１４《大家白蚁检疫鉴定方法》。本标准与ＳＮ／Ｔ１１０５—２０１４相比，主要技术变化如下： — — —删除了规范性引用文件； — — —修改了术语和定义； — — —修改了器材和试剂，将形态学部分与分子生物学部分进行了整合； — — —增加现场检疫的内容，利于发现白蚁； — — —增加了鉴定特征测量部位； — — —增加了附录Ａ中大家白蚁的寄主与分布； — — —增加了附录Ｂ世界乳白蚁的研究概述，厘清了乳白蚁属的同物异名。删除原标准近似种中的婆罗乳白蚁犆．犫狅狉狀犲犲狀狊犻狊Ｏａｈｉｍａ，卡肖乳白蚁犆．犽犪犾狊犺狅狏犲狀犻Ｋｅｍｎｅｒ，菲岛乳白蚁犆．狏犪狊狋犪狋狅狉Ｌｉｇｈｔ，锡纳邦乳白蚁犆．狊犻狀犪犫犪狀犵犲狀狊犻狊Ｏｓｈｉｍａ，因婆罗乳白蚁、卡肖乳白蚁为南亚乳白蚁的同物异名，菲岛乳白蚁为是格斯特乳白蚁的同物异名，锡纳邦乳白蚁是大家白蚁的同物异名； — — —修改了附录Ｃ大家白蚁及其近似种的检索表； — — —增加了附录Ｅ大家白蚁的彩图； — — —增加了附录Ｆ大家白蚁近似种的彩图。本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国厦门海关、中华人民共和国拱北海关。本标准主要起草人：庞金、黄蓬英、方志鹏、方元炜、林振基、姚向荣、董文广、张卫东、廖力。本标准所代替标准的版本发布情况为： — — —ＳＮ／Ｔ１１０５—２０１４。 Ⅰ犛犖／犜１１０５—２０１９ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.大家白蚁检疫鉴定方法１　范围本标准规定了大家白蚁犆狅狆狋狅狋犲狉犿犲狊犮狌狉狏犻犵狀犪狋犺狌狊Ｈｏｌｍｇｒｅｎ的形态学和分子生物学检疫鉴定方法。本标准适用于大家白蚁的检疫和鉴定。２　术语和定义下列术语和定义适用于本文件。２．１　囟　犳狅狀狋犪狀犲白蚁在头盖缝的汇合之处凹下或突起部分，是额线的开口处。２．２　囟孔　犳狅狀狋犪狀犲犾犾犲犺狅犾犲前额中间的圆形开口。２．３　体长　犾犲狀犵狋犺整个虫体的长度，兵蚁和工蚁由上颚尖端至腹部末端，有翅成虫由上唇或上颚尖端至翅末端。２．４　体长不连翅　犾犲狀犵狋犺狑犻狋犺狅狌狋狑犻狀犵有翅成虫由上颚尖端至腹部末端的长度。２．５　头长连上颚　犾犲狀犵狋犺狅犳犺犲犪犱狑犻狋犺狅狌狋犿犪狀犱犻犫犾犲由后唇基的前缘至头后缘的长度。２．６　头长（不连上颚）　犾犲狀犵狋犺狅犳犺犲犪犱狑犻狋犺狅狌狋犿犪狀犱犻犫犾犲由后唇基的前缘至头后缘的长度。２．７　头宽　狑犻犱狋犺狅犳犺犲犪犱在兵蚁和工蚁是指头部最宽处的宽度，有翅成虫是指包括复眼在内的头宽度。２．８　头高　犺犲犻犵犺狅犳犺犲犪犱头部最厚处的高度。２．９　前胸背板长　犾犲狀犵狋犺狅犳犘狉狅狀狅狋狌犿前胸背板中线的长度。２．１０　前胸背板宽　狑犻犱狋犺狅犳犘狉狅狀狅狋狌犿前胸背板的最宽度。１犛犖／犜１１０５—２０１９ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.３　大家白蚁基本信息学名：犆狅狆狋狅狋犲狉犿犲狊犮狌狉狏犻犵狀犪狋犺狌狊Ｈｏｌｍｇｒｅｎ。异名：犆狅狆狋狅狋犲狉犿犲狊狉狅犫狌狊狋狌狊Ｈｏｌｍｇｒｅｎ犆狅狆狋狅狋犲狉犿犲狊犳犾犪狏犻犮犲狆犺犪犾狌狊Ｏｓｈｉｍａ犆狅狆狋狅狋犲狉犿犲狊狊犻狀犪犫犪狀犵犲狀狊犻狊Ｏｓｈｉｍａ英文名：Ｒｕｂｂｅｒｔｒｅｅｔｅｒｍｉｔｅｓ。分类地位：等翅目Ｉｓｏｐｔｅｒａ，鼻白蚁科Ｒｈｉｎｏｔｅｒｍｉｔｉｄａｅ，乳白蚁属犆狅狆狋狅狋犲狉犿犲狊Ｗａｓｍａｎｎ。大家白蚁，又名曲颚乳白蚁、橡胶树白蚁，近距离传播靠成虫飞行扩散，远距离传播常随原木、板木、锯木及木包装传播等铺垫材料等扩散。其寄主、分布及生物学参见附录Ａ。世界乳白蚁属研究概述参见附录Ｂ，美洲、非洲、大洋洲的乳白蚁因近似种不多，总的来说比较好鉴别，亚洲乳白蚁种类较多，较难区分。大家白蚁与亚洲其他重要乳白蚁的检索表参见附录Ｃ。４　方法步骤根据大家白蚁的为害状，在检疫现场或发生疑似大家白蚁的地方，取得卵、兵蚁、工蚁或成虫等。现场检疫如发现有白蚁的兵蚁，依据形态学特征进行鉴定。如未发现白蚁兵蚁，而有卵、工蚁或有翅成虫等时，利用大家白蚁ＩＴＳ特异性扩增引物的常规ＰＣＲ检测方法和实时荧光ＰＣＲ检测方法，可准确、快速将大家白蚁与格斯特乳白蚁、台湾乳白蚁和南亚乳白蚁等３种乳白蚁区分开来。５　器材和试剂５．１　器材显微镜、解剖镜、树皮铲、手锯、油锯、铁锥、螺丝刀、小斧头、解剖刀、解剖针、镊子、培养皿、毛笔、养虫管、指形管、测微尺；ＰＣＲ扩增仪、实时荧光ＰＣＲ仪、电泳仪、凝胶成像系统、离心机、台式离心机、核酸蛋白分析仪、烘箱、高压灭菌锅、电子天平、研钵、摇床、水浴锅、旋涡震荡器、冰箱、微量加样器（０．５μＬ，２μＬ，１０μＬ，２０μＬ，１００μＬ，２００μＬ，１０００μＬ）、ＰＣＲ反应管（０．２ｍＬ，０．５ｍＬ）。５．２　试剂７５％乙醇、双蒸馏水、液氮、蛋白酶Ｋ（２０ｍｇ／ｍＬ）、ＲＮＡ消化酶、Ｔｒｉｓ饱和酚、ＰｒｅｍｉｘＥｘＴａｑ（２×）、氯仿、异戊醇、异丙醇、７５％乙醇、９５％乙醇、１０×ＰＣＲ缓冲液、脱氧核糖核苷三磷酸（ｄＮＴＰｓ）、Ｔａｑ酶、ＤＬ２０００Ｍａｒｋｅｒ、琼脂糖、溴化乙锭（ＥＢ）、引物探针、昆虫基因组ＤＮＡ提取试剂盒。提取液Ａ：１％ＳＤＳ，５０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ·Ｃｌ（ＰＨ８．０），２５ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ，２５ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ（ＰＨ８．０）。６　现场检测６．１　检查空洞用铁锥敲打原木或木方两端和中部，听取是否有空心回声，探明是否有空洞。若是发出异常声响，应撬开空洞，仔细检查是否有白蚁行踪。６．２　检查白蚁外露的活动踪迹检查原木、木方等检疫物是否有白蚁泥（即白蚁排泄物及泥土堆积的蚁路）、分飞孔（此孔是有翅成２犛犖／犜１１０５—２０１９ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.虫繁殖出飞的孔口，孔口常有泥土封住）和通气孔（即蚁巢外面直径约１ｍｍ的针尖状小孔，通常有十几至几十个，孔口有时有细泥土，并常有兵蚁守卫），对有危害迹象的部位可用锯子进行剖木检查，必要时取样本段回室内检疫。原木带树皮时需要用铲子或螺丝刀掀开树皮，观察树皮内侧和原木木质部是否有白蚁危害状或虫体。６．３　查寻巢穴在现场对有白蚁外露活动踪迹的可疑木材仔细查寻巢穴，如发现有白蚁活动，应及时收集标本，以备进行实验室鉴定。７　实验室鉴定７．１　标本处理标本置培养皿中用７５％的乙醇清洗，用细毛笔轻轻除去虫体附着的木屑和泥土。随后在体视显微镜下用解剖针将虫体摆正，使鉴定的主要特征处于一个平面上，特别是兵蚁需虫体软化后将上颚分开。７．２　形态特征测量标本虫体用带测微尺的体视显微镜进行特征观察，并对重要鉴定特征进行测量，测量标本不少于１０头（标本数量少除外）。兵蚁标本测量包括：头长至上颚、头最宽、头高、左上颚长、囟孔长径、囟孔短径、后颏最宽、后颏最狭、前胸背板宽、前胸背板长和触角节数等特征。有翅成虫标本测量包括体长（不含翅）、头长到上唇端、头长至上颚、头宽连眼、复眼长径、复眼短径、复眼至头部下缘、单眼长径、单眼短径，前翅长（无鳞）、前胸背板长、前胸背板宽、后足胫节长和触角节数等特征，单位为毫米（ｍｍ）。７．３　记录和