SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1962—2007 食品中克雷伯氏菌检测方法 Detection of Klebsiella in food 行业标准信息服务平台 2007-08-06发布 2008-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T1962—2007 前言 本标准的附录A和附录B均为规范性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：高旗利、张霞、张海滨、郑文杰、罗茂凰、张海英、黎经。 本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 行业标准信息服务平台 I SN/T1962—2007 食品中克雷伯氏菌检测方法 1范围 本标准规定了食品中克雷伯氏菌（肺炎克雷伯氏菌、产酸克雷伯氏菌）的检测方法。 本标准适用于食品中克雷伯氏菌（肺炎克雷伯氏菌、产酸克雷伯氏菌）的检测 2分类及定义 2.1分类 克雷伯氏菌（Klebsiella）为肠杆菌科的一个属。根据伯杰氏细菌分类法，将克雷伯氏菌属分成5个 种：肺炎克雷伯氏菌（K.pneumoniae）、产酸克雷伯氏菌/催娩克雷伯氏菌（K.o.rytoca）、植生克雷伯氏 菌（K.planticola）、土生克雷伯氏菌（K.terrigena）和解鸟氨酸克雷伯氏菌（K.ornithinolytica）。其中 肺炎克雷伯氏菌又分成3个亚种：肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种（K，subsp.pneumoniae）、肺炎克雷伯氏菌 臭鼻亚种（K.subsp.azaenae）和肺炎克雷伯氏菌鼻硬结亚种（K.subsp.rhinoscleromatis），为了方便，习 惯上称谓肺炎克雷伯氏菌、臭鼻克雷伯氏菌和鼻硬结克雷伯氏菌。由于植生克雷伯氏菌、土生克雷伯氏 菌和解鸟氨酸克雷伯氏菌不具卫生学意义，因此，本标准界定的克雷伯氏菌仅包括肺炎克雷伯氏菌肺炎 亚种、肺炎克雷伯氏菌臭鼻亚种、肺炎克雷伯氏菌鼻硬结亚种和产酸克雷伯氏菌。 2.2定义 符合肠杆菌科定义，具荚膜、无鞭毛的革兰氏阴性球杆菌，大小（0.5um～0.8μm）×（1μm~ 2μum),单独、成双或短链状排列。发酵肌醇或阿东醇，不产生HzS和鸟氨酸脱羧酶 3设备和材料 3.1培养箱：35℃~37℃。 3.2吸管：1mL，分刻度0.1mL。 3.3试管：17mmX170mm,15mmX100mm 3.415mm×150mm灭菌平皿。 3.5 5接种环：3mm直径。 3.6天平：量程2kg，感量0.1g。 3.7 灭菌的样品处理器具：取样勺，剪刀，开罐器。 3. 8 3克雷伯氏菌质控菌株：ATCC13883。 3.9 胃式拍打器或均质器。 服务平台 3.10 3.11 VITEK全自动微生物分析系统或类似设备。 4培养基和试剂 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。 4.1缓冲蛋百陈水（BPW)：见附录第A.1章。 4.2肠杆菌增菌肉汤（EE肉汤)：见附录第A.2章。 4.3麦康凯肌醇阿东醇羧苄青霉素琼脂（MIAC)：见附录第A.3章。 4.4氧化酶试验试剂：见附录第A.4章。 4.5营养琼脂（NA)：见附录第A.5章。 SN/T 1962—2007 4.6 动力试验培养基：见附录第A.6章 4.7吲哚试验培养基及试剂：见附录第A.7章。 4.8吐温-80。 5检测 5.1方法提要 食品中克雷伯氏菌的定性检测方法是通过对25g（mL）样品进行预增菌、选择性增菌、分离及生化 鉴定等方法对食品中可能存在的克雷伯氏菌进行定性检测。定量检测采用9管MPN法。 5.2检测程序 克雷伯氏菌的检测程序见图1。 样品25g(mL) 225mL的灭菌生理盐水 225mL的缓冲蛋白陈水(BPW) 36℃±1℃18h~22h 10mL缓冲蛋白陈水(BPW)3×3管 10mL加入90mL肠杆菌增菌肉汤（EE肉汤） 36℃±1℃18h~22h 36℃±1℃18h~22h 10mL肠杆菌增菌肉汤（EE肉汤) 36℃±1℃18h~22h 接种MIAC平板 36℃±1℃18h~22h 动力试验 荚膜染色革兰氏染色 氧化酶试验 API20E或VITEK 人报告 图1克雷伯氏菌的检测程序 5.3定性检测 5.3.1按无菌操作取检样25g（25mL）至225mLBPW中，振摇使样品充分拍打或均质，36℃土1℃培 养18h~22h。 5.3.2移取培养18h~22h的悬液10mL加人90mLEE肉汤中,36℃±1℃培养18h~22h。 5.3.3从选择性增菌的EE肉汤中用直径3mm的接种环四区法接种于MIAC平板，36℃土1℃培养 18h～22h。观察平板上的菌落形态，在MIAC平板上，克雷伯氏菌的菌落形态为圆形、突起、湿润、光 滑的红色菌落，直径为2 mm~4 mm。 5.3.4从MIAC平板上挑取5个可疑菌落分别做动力试验，并接种到NA平板上，36℃土1℃培养 18 h~22 h。 2