ICS 67.050 X 04 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 939—2016 代替NY/T939—2005 巴氏杀菌乳和UHT灭菌乳中复原乳的鉴定 Identification of reconstituted milk in pasteurized and UHT milk 2016-03-23 发布 2016-04-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T 939—2016 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 与NY/T939—2005相比，主要变化如下： 修改了巴氏杀菌乳中复原乳鉴定的指标值； 修改了UHT灭菌乳中复原乳鉴定的指标值； 修改了糠氨酸测定前处理方法； 增加了糠氨酸的UPLC测定方法； 修改了乳果糖的测定方法。 本标准由农业部畜牧业司提出。 本标准由全国畜牧业标准化技术委员会（SAC/TC274)归口。 本标准起草单位：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、农业部奶产品质量安全风险评估实验室 (北京）、农业部奶及奶制品质量监督检验测试中心（北京）。 本标准主要起草人：郑楠、文芳、王加启、李松励、张养东、赵圣国、李明、杨晋辉、陈冲冲、王晓晴、陈 美霞、汪慧、兰欣怡、黄萌萌、卜登攀、魏宏阳、李树聪、于建国、周凌云， I NY/T 939—2016 巴氏杀菌乳和UHT灭菌乳中复原乳的鉴定 1范围 本标准规定了巴氏杀菌乳和UHT灭菌乳中复原乳的鉴定方法。 本标准适用于巴氏杀菌乳和UHT灭菌乳 2 规范性引用文件 下列文件对于本 于本文 件 GB5009.5 食品 食品中 蛋白质的油 GB/T 668 GB/T 0111 随机数 支其在产品质量抽样检 验中的应 3 术语和定义 下列术语禾 和定义适 用于本文体 3. 1 A 生乳 ra WI Qilk 从符合国 家有关 求的健康奶畜乳房中 中挤出的无任何成分改变的常 3. 2 复原乳 recodstituted milk 将干燥的亘 或者浓 的乳制品与水按比例混匀后 3. 3 C 热处理 采用加热技 低于 氏杀菌抑制微生物生长或杀灭微生牛 制受热对象物理化学 的操价 性状只发生有限变 /. 3. 4 巴氏杀菌 pasteurization 为有效杀灭病原性微生物而采用的加工 方法，即经低温长时间（ 一65℃，保持30min）或经高温 短时间（72℃～76℃，保持15 3；或80℃～85℃，保持10s~15 )的处理方式。 3. 5 巴氏杀菌乳pasteurizedmilk 仅以生牛乳为原料，经巴氏杀菌等工序制得的液体产品，其乳果糖含量应小于100mg/L。 3. 6 超高温瞬时灭菌ultra high-temperature,UHT 为有效杀灭微生物和抑制耐热芽孢而采用的加工方法，即在连续流动状态下加热到至少132℃并 保持很短时间的热处理方式。 3. 7 超高温瞬时灭菌乳(UHT灭菌乳）ultra high-temperaturemilk 以生牛乳为原料，添加或不添加复原乳，经超高温瞬时灭菌，再经无菌灌装等工序制成的液体产品。 1 NY/T 939—2016 生牛乳经UHT灭菌处理后，乳果糖含量应小于600mg/L。 3. 8 糠氨酸furosine 牛乳在加热过程中，氨基酸、蛋白质与乳糖通过美拉德反应生成ε-N-脱氧乳果糖基-L-赖氨酸(e- N-deoxylactolusyl-L-lysine），经酸水解转换成更稳定的糠氨酸（e-N-2-furoylmethyl-L-lysine E-N-2-呋喃甲基-L-赖氨酸）。 3. 9 乳果糖 lactulose 牛乳在加热过程中,乳糖在酪蛋白游离氨基的催化下，碱基异构而形成的一种双糖。其化学名称为 4-0-β-D-吡喃半乳糖基-D-果糖，可作为评价牛奶热处理效应的指标。 4试验方法 4.1糠氨酸含量的测定 4.1.1原理 试样经盐酸水解后测定蛋白质含量，水解液经稀释后用高效液相色谱（HPLC)或超高效液相色谱 (UPLC)在紫外（波长280nm)检测器下进行分析，外标法定量， 4.1.2试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的实验室一级水。 4.1.2.1甲醇(CH:OH):色谱纯。 4. 1.2.2 浓盐酸(HCl,密度为1.19g/mL)。 4.1.2.3 三氟乙酸：色谱纯。 4.1.2.4 乙酸铵。 4.1.2.5 糠氨酸：C12H17N2O4·xHCl。 4. 1.2. 6 盐酸溶液（3mol/L）：在7.5mL水中加人2.5mL浓盐酸，混匀。 4. 1. 2.7 盐酸溶液（10.6mol/L）：在12mL水中加人88mL浓盐酸，混匀。 4. 1. 2. 8 乙酸铵溶液（6g/L）：准确称量6g乙酸铵溶于水中，定容至1L，过0.22μm水相滤膜，超声 脱气10min。 4.1.2.9乙酸铵（6g/L)含0.1%三氟乙酸溶液：准确称量6g乙酸铵溶于部分水中，加人1mL三氟 乙酸，定容至1L，过0.22μm水相滤膜，超声脱气10min。 4.1.2.10糠氨酸标准储备溶液(500.0mg/L)：将糠氨酸标准品按标准品证书提供的肽纯度系数（Net PeptideContent)换算后，用3mol/L盐酸溶液配制成标准储备溶液。一20℃条件下可储存24个月。 示例： 糠氨酸标准品证书上标注肽纯度系数为69.1%，则称取7.24mg糠氨酸标准品，用3mol/L盐酸溶液溶解并定容至 10mL，标准储备溶液的浓度为500.0mg/L。 4.1.2.11糠氨酸标准工作溶液（2.0mg/L）：移取100μL糠氨酸标准储备溶液于25mL容量瓶，以 3mol/L盐酸溶液定容。此标准工作溶液浓度即为2.0mg/L。 4.1.2.12水相滤膜：0.22μm。 4.1.3仪器 4.1.3.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器， 4.1.3.2 超高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器 4.1.3.3干燥箱：(110土2)℃。 NY/T 939—2016 4.1.3.4密封耐热试管：容积为20mL。 4.1.3.5天平：感量为0.01mg，1mg。 4.1.3.6凯氏定氮仪。 4.1.4采样 用于检测的巴氏杀菌乳储存和运输温度为2℃～6℃,UHT灭菌乳储存和运输温度不高于25℃。 按GB/T10111的规定取不少于250mL样品，样品不应受到破坏或者在转运和储藏期间发生变 化。监督抽检或仲裁检验等采样应到加工厂抽取成品库的待销产品，1周内测定。 4.1.5分析步骤 4.1.5.1试样水解液的制备 吸取2.00mL试样，置于密闭耐热试管中，加人6.00mL10.6mol/L盐酸溶液，混匀。密闭试管， 置于干燥箱，在110℃下加热水解12h～23h。加热约1h后，轻轻摇动试管。加热结束后，将试管从干 燥箱中取出，冷却后用滤纸过滤，滤液供测定。 4.1.5.2试样水解液中蛋白质含量的测定 移取2.00mL试样水解液，按GB5009.5的规定测定试样溶液中的蛋白质含量。 4.1.5.3试样水解液中糖氨酸含量的测定 移取1.00mL试样水解液，加人5.00mL的6g/L乙酸铵溶液，混匀，过0.22μm水相滤膜，滤液供 上机测定。根据实验室配备的液相色谱仪器，按以下两种方法之一测定： a）HPLC法测定 1） 色谱参考条件 色谱柱：Ci硅胶色谱柱，250mmX4.6mm,5um粒径，或相当者。 柱温：32℃。 流动相：0.1%三氟乙酸溶液为流动相A,甲醇为流动相B。 洗脱梯度：见表1。 表1洗脱梯度 时间 序号 流速 流动相A 流动相B min mL/min % % 1 1. 00 100.0 0. 0 2 16.00 1. 00 86.8 13. 2 3 16.50 1. 00 0. 0 100.0 4 25. 00 1. 00 100.0 0. 0 5 30. 00 1.00 100.0 0. 0 2）测定 利用流动相A和流动相B的混合液(50：50)以1mL/min的流速平衡色谱系统。然 后，用初始流动相平衡系统直至基线平稳。注人10μL3mol/L盐酸溶液，以检测溶剂的 纯度。注入10μL待测溶液测定糠氨酸含量。色谱图参见附录A。 b）UPLC法测定 1） 色谱参考条件 色谱柱：HSST3高强度硅胶颗粒色谱柱,100mmX2.1mm,1.8um粒径，或相当者 柱温：35℃。 流动相：6g/L乙酸铵含0.1%三氟乙酸水溶液为流动相A，甲醇为流动相B,纯水为流动相C。 洗脱条件：流动相A，等度洗脱，0.4mL/min。 2）测定 3 NY/T 939—2016 宜使用流动相纯水和甲醇，依次冲洗色谱系统；仪器使用前，使用流动相纯水过渡，用 流动相A以0.4mL/min的流速平衡色谱柱。注人0.5μL3mol/L盐酸溶液，以检测溶 剂的纯度。注入0.5L待测溶液测定糠氨酸含量。色谱图参见附录A 4.1.6结果计算 4.1.6.1试样中糠氨酸含量 糠氨酸含量以质量分数F计，数值以毫克每百克蛋白质（mg/100g蛋白质）表示，按式（1)计算。 AdXm (1) 式中： At 测试样品中糠氨酸峰面积的数值 Astd Cstd 糠氨酸标准 液的浓 D 测定时稀 释倍数 m 样品水 蛋白质浓 单位为克钅 JL 计算结果保留至 小娄 4. 1.6.2 巴氏杀 巴氏杀菌乳 氨酸含量以 蛋白质）表示， 按式（2)计算。 FT 位 菌结束时糠氨酸含量 UHT灭菌乳灭 以FT计，数值以毫克每百克蛋白 0g 蛋白质)表 示，按式(3)计算 ........(3) 式中： 0.7——常温 生的糠氨