ICS65.020.30 CCS B 43 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 4047—2021 家禽精液品质检测方法 Testing methods of poultry semen quality 2021-12-15发布 2022-06-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T 4047—2021 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由农业农村部种业管理司提出。 本文件由全国畜牧业标准化技术委员会（SAC/TC274）归口。 研究所、北京市华都峪口禽业有限责任公司、中国农业大学、江苏省家禽科学研究所、黑龙江八一农垦 大学。 本文件主要起草人：陈继兰、孙研研、侯水生、赵小丽、李云雷、谢金防、刘爱巧、刘胜军、赵丽红、唐静、 李俊英、刘一帆。 NY/T 4047—2021 家禽精液品质检测方法 1范围 本文件规定了家禽精液品质的检测方法。 本文件适用于鸡、鸭和鹅的精液品质检测。 2 规范性引用文件 其中，注日期的引用文件，仅 该日期对应的版本适用于 本文件： 不注且期的引用文 括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T9724 化学试剂pH值测定通 3术语和定义 下列术语和 适用又本 3. 1 S 精液量 volume perejaculate 单只公禽 采精茯 的精液体 RA 3. 2 精子密度 spefn c 单位体积精 夜中的精 ［来源：GE 25172 3. 3 精子活力 erm motilit 在37℃环境 ［来源:GB 3. 4 U 精子存活率 活精子占总精子数的百分率。 3. 5 精子畸形率 abnormal spermpercentage 畸形精子占总精子数的百分率 ［来源：GB4143—2008，3.3] 4 精液品质指标 应包括精液感观、精液量、精子活力、精子存活率、精子畸形率、精子密度和精液pH。 5精液品质检测方法 5.1通则 检测中仅使用确认为分析纯或以上级别的试剂或材料，检测用水为新制备的去离子水或蒸馏水。检 测所用的测量仪器应经过计量检定机构的检定合格，并在有效期内。 5.2样品 样品为采集的鸡、鸭或鹅的新鲜精液。 1 NY/T4047—2021 5.3精液感观检测 5.3.1器材 集精杯。 5.3.2检测步骤 采集的样品，通过感官进行评定，观察有无粪便、尿酸盐、血液或炎症分泌物。 5.4精液量检测 5.4.1直接测量法 5.4.1.1器材 5.4.1.1.1集精杯。 5.4.1.1.2一次性注射器或刻度吸管：精度为0.1mL，量程为1.0mL～2.5mL。 5.4.1.2检测方法 采集的样品，通过集精杯刻度读取精液量。当集精杯没有刻度时，使用一次性注射器或刻度吸管吸取 集精杯中的样品，读取精液量。 5.4.2称量法 5.4.2.1仪器设备与材料 5.4.2.1.1集精杯。 5.4.2.1.2电子天平：精度为0.01g。 5.4.2.2检测步骤 采集样品前称量并记录空集精杯的质量。采集样品至集精杯中，称量并记录装有样品的集精杯的 质量。 5.4.2.3检测数据处理 按公式(1)计算精液量Vol,单位为毫升（mL）。 Vol = mi - m2 :(1) p 式中： mi 装有样品的集精杯的质量的数值，单位为克（g）； m2 空集精杯的质量的数值，单位为克（g）； 精液密度，单位为克每毫升（g/mL）。当检测鸡的精液量时，p=1.09；当检测鸭的精液量时， β=1.04；当检测鹅的精液量时，p=1.02。 计算结果表示到小数点后2位。 5.5精子活力检测 5.5.1试剂 0.9%氯化钠溶液：称取0.9g氯化钠，加水溶解，定容至100mL；或市售氯化钠注射液。37℃水浴待用 5.5.2仪器设备与材料 5.5.2.1显微镜：有恒温载物台。 5.5.2.2恒温水浴装置：温控精度士1℃。 5.5.2.3微量移液器：10μL~100μL，100μL~1000μL。 5.5.2.4载玻片。 5.5.2.5盖玻片：22mmX22mm。 5.5.2.6离心管：1.5mL。 5.5.3样品与试样制备 样品同5.2，试样制备如下： a）鸡或鸭的试样制备：量取10μL样品注入盛有0.49mL的0.9%氯化钠溶液的离心管内，混匀， 2 NY/T4047—2021 使之成为50倍稀释的试样； b) 鹅的试样制备：量取10uL样品注入盛有90L的0.9%氯化钠溶液的离心管内，混匀，使之成 为10倍稀释的试样。 5.5.4检测步骤 按如下步骤进行检测： a）开启显微镜，恒温载物台的温度设置为37℃，将载玻片和盖玻片置于恒温载物台上预热至37℃； b) 取10L试样置于载玻片上加盖玻片，立即在载物台温度保持37℃的情况下用200倍～400倍 内的精子运动状态，进行全面评定，记录每个样片的精子活力。 5.5.5检测数据处理 :(2) 式中： 精子活力 CHT mot2- 第 片精活 计算结果表 小数点 5.6.1试剂 L 5.6.1.10. 氨化钠溶 5.6.1.2伊 称联g 10. L，制成伊红溶 液，再称取16 线渣和凝胶状沉淀 物，储存在密 色瓶中 5.6.2仪器设备 与材料 5.6.2.1显微镜 C 5.6.2.2计数 5.6.2.3微量移 5.6.2.4离心管 D 5.6.3样品与试样制 样品同5.2，试样制 a）鸡或鸭的试样制备：量取10样品 99mE的0.9 化钠溶液的离心管内，混匀， 使之成为100倍稀释的试样； 鹅的试样制备：量取10L样品 注入盛有0.19mL %氯化钠溶液的离心管内，混匀，使之 成为20倍稀释的试样。 5.6.4检测步骤 按如下步骤进行检测： 量取10μL伊红-苯胺黑染液置于载玻片右侧，取10μL试样与其混合均匀，染色1min左右； b） 用右手夹持另一片载玻片（拉片)长边，拉片短边边缘以约45°角向右滑动接触染色后的试样，从 右向左拖回拉片（1s以内），使染色后的试样均匀地附着在载玻片上，室温下自然风干，制成涂 片，待检，涂片制作图示见附录A； c) 用400倍显微镜观察涂片不同区域约200个精子，头部未被染色的是活精子，头部被染成红色的 是死精子，分别计数活精子数和死精子数。 5.6.5检测数据处理 按公式（3)计算精子存活率Vit，单位为百分号（%）。 3 NY/T 4047—2021 (3) 式中： 1——活精子数的数值，单位为个； d——死精子数的数值，单位为个。 计算结果表示到小数点后1位。 每个试样做2个重复，取其算术平均值为检测结果。 5.6.6精密度 在重复性条件下获得的2个重复结果的绝对差不大于附录B表B.1中规定的最大容许差值。 5.7精子畸形率检测 5.7.1试剂 警示一一甲醇易燃，应远离热源和火种，储存在阴凉、通风的库房，库温不超过37℃，保持容器密封。使用时禁止吸 烟、饮水、进食，穿戴好个人防护用品，在通风良好处操作，操作后彻底清洗。 5.7.1.10.9%氯化钠溶液：同5.5.1。 5.7.1.2甲醇:p(CHOH)=0.79g/mL。 5.7.1.3吉姆萨染液：量取20.0mL吉姆萨原液、30.0mL磷酸盐缓冲液和50.0mL水，混匀，制成吉姆 萨染液。现用现配。或市售吉姆萨染液。 5.7.2仪器设备与材料 5.7.2.1显微镜：有恒温载物台。 5.7.2.2恒温水浴装置：温控精度土1℃。 5.7.2.3计数器。 5.7.2.4微量移液器：10μL~100μL,100μL~1000μL。 5.7.2.5载玻片。 5.7.2.6离心管：1.5mL。 5.7.3样品与试样制备 样品与试样制备同5.6.3。 5.7.4检测步骤 按如下步骤进行检测： a）量取10μL试样置于载玻片的右侧，用右手夹持另一片载玻片（拉片）长边，拉片短边边缘以45° 角向右滑动接触试样，从右向左拖回拉片（1s以内），使试样均匀地附着在载玻片上，室温下自然 风干，制成涂片，涂片制作图示见附录A； b) 向涂片上滴加1.0mL~2.0mL甲醇溶液固定2min~3min，用水冲去甲醇溶液，室温下自然 风干； c）将涂片反扣在带有平槽的有机玻璃面上，把吉姆萨染液滴于槽和涂片之间，让其充满平槽并使涂 片接触染液，染色15min～30min，用水冲去染液，室温下自然风干，制成染片，待检； d）用400倍显微镜观察染片不同区域约200个精子，分别计数正常精子数和畸形（包括头部畸形、 颈部畸形和尾部畸形）精子数。 5.7.5检测数据处理 按公式（4)计算精子畸形率Abn，单位为百分号（%）。 Abn= X100 (4) n+m 式中： n——畸形精子数的数值，单位为个； m——正常精子数的数值，单位为个。 4 NY/T4047—2021 计算结果表示到小数点后1位。 每个样品做2个重复，取其算术平均值为检测结果。 5.7.6精密度 5.8精子密度检测 5.8.1血细胞计数板法 5.8.1.1试剂 3%氯化钠溶液：称取3.0g氯化钠，加水溶解，定容至100mL。 5.8.1.2仪器设备与材料 5.8.1.2.1显微镜。 5.8.1.2.2血细胞计数板：汤麦式或希利格式。 5.8.1.2.3计数器。 5.8.1.2.4微量移液器：10μL~20μL，100μL~1000μL。 5.8.1.2.5血盖片20mmX26mm×0.5mm。 5.8.1.2.6离心管：1.5mL。 5.8.1.3样品与试样制备 样品同5.2，试样制备如下： a) 鸡或鸭的试样制备：量取10