ICS 65.020.01 CCS B 04 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3951—2021 马铃薯中龙葵素含量的测定 液相色谱一串联质谱法 Determination of solanine in potatoes by liquid chromatography- tandem mass spectrometry 2021-11-09发布 2022-05-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T3951—2021 信 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由农业农村部农产品质量安全监管司提出。 本文件由农业农村部农产品营养标准专家委员会归口。 本文件起草单位：农业农村部食物与营养发展研究所、北京市营养源研究所、内蒙古蒙牛乳业（集团） 股份有限公司、中国合格评定国家认可委员会、国家食品行业生产力促进中心、北京市理化分析测试中心、 中国农业科学院蔬菜花卉研究所、国家蔬菜工程技术研究中心、中检集团中原农食产品检测（河南）有限 公司。 本文件主要起草人：朱大洲、崔亚娟、梁敏慧、孔凡华、白沙沙、孙君茂、屠振华、熊兴耀、郭燕枝、仇菊、 杨春雪、罗欣、李东、杨志刚、马文丽、王佳、李宏、马杰、贾丽、王万兴、刘光敏、宗珊盈。 I NY/T3951—2021 马铃薯中龙葵素含量的测定 液相色谱-串联质谱法 1范围 本文件规定了马铃薯中龙葵素的液相色谱-串联质谱测定方法。 本文件适用于马铃薯中α-苏碱和α卡茄碱含量的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款， 其中，注日期的引用文件， 本文件： 主日期网引用B件其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 仅该日期对应的版本适用 7 文件。 GB/T6682 分析实验室 3术语和定义 RESE 本文件没有需要界 和定 S 4原理 试样中α-碱和 液 甜色谱 质则 环 夕 外标法定量。 5试剂和材料 5.1试剂 水为GB/T 5.1.1甲酸(H 5. 1. 2 甲醇（CH 5.1. 3 乙晴（CH） 5.1.4乙酸铵(CH 5.2试剂配制 5.2.11%甲酸水溶液：准确吸取甲酸 水定容至刻度，混匀。 5.2. 2 1%甲酸水-甲醇溶液（50 0+50）：量取 %甲酸水溶液（52.1)50 加人甲醇（5.1.2）50mL， 混匀。 5.2.30.1%甲酸-10mmol/L乙酸铵溶液：称取乙酸铵（5.1.4)0.7708g于1000mL容量瓶中，加人甲 酸(5.1.1)1.00mL，加水定容至刻度，混匀。 5.3标准品 5.3.1α-茄碱标准品（CasH73NO15，CAS号：20562-02-1)：纯度大于98%，或经国家认证并授予标准物质 证书的标准物质。 5.3.2α-卡苏碱标准品（CasHz3NO14，CAS号：20562-03-2)：纯度大于98%，或经国家认证并授予标准物 质证书的标准物质。 5.4标准溶液配制 5.4.1α-苏碱和α-卡茄碱标准储备液：分别称取标准品1.00mg（精确至0.01mg），用甲醇（5.1.2)溶解 并定容至10mL，配制成浓度分别为100μg/ml.的标准储备液，转移至棕色试剂瓶中，于一18℃保存，有 效期3个月。 NY/T3951—2021 5.4.2混合标准中间液：分别准确移取标准储备液（5.4.1）1.00mL于100mL容量瓶中，用甲醇 （5.1.2)稀释并定容至刻度，制成浓度分别为1.00μg/mL的混合标准中间液，现用现配。 5.4.3混合标准工作溶液：从混合标准中间液（5.4.2）中准确移取0.10mL、0.20mL、0.50mL、 1.00mL、1.50mL、2.00mL溶液置于6个10mL棕色容量瓶中，用1%甲酸水-甲醇溶液（5.2.2)定容至 刻度，得到浓度为10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL、100ng/mL、150ng/mL、200ng/mL的混合标 准工作溶液，现用现配。 5.5材料 有机相滤膜：0.22um。 6仪器与设备 6.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 6.2分析天平：感量为0.01mg和0.1mg。 6.3组织捣碎机。 6.4涡旋振荡器。 6.5超声波清洗仪：40kHz,500W。 7试样制备 将样品经过缩分、粉碎均匀后，储存于样品瓶中，于一18℃冷冻存放。 8分析步骤 8.1提取 称取样品1g（精确至0.1mg）于50mL离心管中，加入1%甲酸水-甲醇溶液（5.2.2)30mL，涡旋混 匀1min，超声30min，冷却后转移至50mL容量瓶中，用1%甲酸水-甲醇溶液（5.2.2)定容至刻度，混匀， 过0.22um滤膜后，上机测定。 8.2测定 8.2.1色谱参考条件 a） 色谱柱：Cl8柱，柱长100mm，内径2.1mm，粒径1.7μm，或性能相当者； b）柱温：35℃； c) 进样体积：10uL； 流速：0.3mL/min; e) 流动相A：0.1%甲酸-10mmol/L乙酸铵溶液（5.2.3），流动相B：乙睛（5.1.3），梯度洗脱条件见 表1。 表1 流动相梯度洗脱条件 时间，min A,% B, % 0 95 5 0. 1 S6 5 3 5 95 4 5 95 4. 5 95 5 6 95 5 8.2.2 质谱参考条件 电离方式：电喷雾正离子模式； 扫描模式：多反应监测（MRM)模式； c) 毛细管电压：3kV； 2 NY/T3951—2021 (P 脱溶剂气温度：450℃； e) 脱溶剂气流速：600L/h； 锥孔气流速：50L/h； g） 定性定量离子、锥孔电压及碰撞能量等参数见表2。 表2质谱分析参数 化合物 保留时间，min 母离子，m/~ 锥孔电压，V 子离子，m/2 碰撞能量,eV 98. 1° 73 α-茄碱 2.09 868.2 95 398.1 81 706.4 87 α-卡茄碱 2. 11 852.4 100 398.3 73 注：*为定量离子。 8.3标准曲线的制作 将混合标准工作液分别注人液相色谱-串联质谱仪中，以混合标准工作液的浓度为横坐标，以峰面积 为纵坐标，绘制标准曲线。 8.4试样溶液的测定 8.4.1定性测定 在相同试验条件下，试样溶液中α-茄碱和α-卡茄碱的保留时间与标准工作液中α-茄碱和α-卡茄碱的 保留时间的偏差在土2.5%以内；且试样溶液中α-茄碱和α-卡茄碱的定性离子的相对丰度，与浓度接近的 标准工作液中α-茄碱和α-卡茄碱的定性离子的相对丰度进行比较，若偏差不超过表3规定的范围，则可 判定试样溶液中存在被测化合物。 表3定性测定时相对离子丰度的最大允许误差 单位为百分号 相对丰度 >50 >20~50 >10~20 10 允许的相对偏差 ±20 ± 25 ±30 ±50 8.4.2定量测定 将试样溶液注入液相色谱-串联质谱仪中，得到峰面积，根据标准曲线得到待测液中α-苏碱和α-卡苏 碱的浓度。待测样液中α-茄碱和α-卡苏碱的响应值应在仪器线性响应范围内，否则应适当稀释待测 样液。 9结果计算 9.1α-茄碱和α-卡茄碱计算方法 试样中α-苏碱和α-卡茄碱含量按公式（1)计算。 (1) mX1000 式中： w; 试样中α-茄碱和α-卡茄碱的含量的数值，单位为毫克每千克（mg/kg）； pi 由标准曲线得到试样中α-茄碱和α-卡茄碱的浓度的数值，单位为纳克每毫升（ng/mL)； V 试样的定容体积的数值，单位为毫升（mL）； 稀释倍数； m 测试样品称样量的数值，单位为克（g）。 9.2龙葵素总量计算方法 试样中龙葵素含量按公式(2)计算。 w=W1十W2 (2) 3 NY/T3951—2021 式中： 试样中龙葵素的含量的数值，单位为毫克每千克（mg/kg)； 试样中α-苏碱的含量的数值，单位为毫克每千克（mg/kg)； 0)1 试样中α-卡茄碱的含量的数值，单位为毫克每千克（mg/kg)； 02 以2次测定结果的算术平均值表示，结果保留3位有效数字。 10 精密度 10.1重复性 在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 10.2再现性 在再现性条件下获得的2次独立测定结果的绝又 寸差值不得超过算术平均值的10%。 D 其他 α-茄碱和α-卡茄碱的 NY/T3951—2021 附录A (资料性） α-茄碱和α-卡茄碱总离子流图和多反应监测色谱图 α-碱和α-卡苏碱总离子流图和多反应监测色谱图见图A.1和图A.2。 % 100 t 2.10 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 t,min 图A.1α-茄碱和α-卡茄碱总离子流图 % 2.09 100 E 868.2>398.1 (solanine) 0 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 t,min % 2.10 868.2>98.1(solanine) 100 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 t,min % 100 E 2.11 852.4>706.4(cachonine) 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 t,min % 100 E 2.11 852.4>398.3(cachonine) 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 t,min 图A.2 α-茄碱和α-卡茄碱多反应监测色谱图 5