SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1941.1—2007 进出口食品中乳酸菌检验方法 第1部分：分离与计数方法 Detection of lactic acid bacteria in food for import and export- Part 1:Isolation and enumeration method 行业标准信息服务平台 2007-08-06发布 2008-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1941.1—2007 前言 SN/T1941《进出口食品中乳酸菌检验方法》分为三个部分： 第1部分：分离与计数方法； 一第2部分：PetrifilmTM测试片法； 第3部分：乳酸杆菌的PCR法。 本部分为SN/T1941的第1部分。 本部分的附录A为规范性附录。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 本部分起草单位：中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局。 本部分主要起草人：吴斌、秦成、李叶、郑秋月、王玫、齐震玉。 本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 行业标准信息服务平台 I SN/T 1941.1—2007 进出口食品中乳酸菌检验方法 第1部分：分离与计数方法 1范围 SN/T1941的本部分规定了乳酸菌的分离与计数方法。 本部分适用于天然或添加乳酸菌的食品及原料中乳酸菌的分离与计数。 2设备和材料 2. 1 显微镜：10×~100×。 2. 2 温度计：量程1℃~55℃，分刻度0.1℃。 2.3 恒温培养箱：36℃土1℃。 2.4 吸管:1mL、5mL和10mL，分刻度0.1mL。 2.5 试管:16mmX160mm。 2. 6 培养皿：直径90mm。 2.7 接种环：3mm直径。 2. 8 天平：量程2kg，感量0.1g。 2. 9 灭菌样品处理器具：取样勺、剪刀、镊子。 样品稀释瓶：250mL和500mL。 2.11 微需氧培养设备：最佳微需氧条件为5%氧气、10%二氧化碳和85%氮气。可用具双相压力计的 微需氧培养箱、厌氧罐、蜡烛缸、气袋或其他可代用的装置。 3培养基和试剂 除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂，水为蒸馏水。 3.1MRS肉汤（见第A.1章）。 3.2 2MRS琼脂（见第A.2章） 3.3 改良TJA培养基（改良番茄汁琼脂培养基）（见第A.3章）。 3.4 改良MC培养基（ModifiedChalmers培养基）（见第A4章）。 信息服务平台 3.5 0.1%美蓝牛乳培养基（见第A.5章）。 3.6 6.5%氯化钠肉汤（见第A.6章）。 3.7 pH9.6葡萄糖肉汤（见第A.7章）。 3.8 40%胆汁肉汤（见第A.8章）。 3.9 淀粉水解培养基（见第A.9章）。 3.10 精氨酸水解培养基（见第A.10章）。 3. 11 七叶苷培养基（见第A.11章）。 3.12 革兰氏染色液。 3.13 3%过氧化氢溶液 3.14 蛋白陈水、靛基质试剂。 3.15 明胶培养基。 3.16 硝酸盐培养基、硝酸盐试剂。 1 SN/T 1941.1—2007 4检验方法 4.1方法提要 食品中乳酸菌的分离与计数方法是应用微生物检验的增菌培养、分离、生化鉴定等方法对食品中可 能存在的乳酸菌进行定量的检验。 4.2检验程序 乳酸菌的检验程序见图1。 检样25g（mL） 选择2个~3个适当稀释度 选择2个~3个适当稀释度 各以1mL加入灭菌培养皿内 各接种3管MRS肉汤增菌培养 培养（改良MRS、TJA或MC琼脂） 36℃±1℃ 72 h±3h 染色、镜检、过氧化氢酶试验 计数 报告 图1乳酸菌的检验程序 4.3乳酸菌计数方法 4.3.1以无菌操作将经过充分摇匀的检样25g（mL）放人含有225mL灭菌生理盐水的灭菌广口瓶内 作成1：10的均匀稀释液 4.3.2用1mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，沿管壁徐徐注人含有9mL灭菌生理盐水的试管 内，振摇试管，混合均匀，做成1：100的稀释液。 4.3.3另取1mL灭菌吸管，按上述操作依次做10倍递增稀释。 4.3.4选择2个～3个以上适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移 1mL稀释液于灭菌平血内，每个稀释度做两个平皿。 4.3.5稀释液移人平血后，应及时将冷至50℃的乳酸菌计数培养基（MRS、改良TJA、或改良MC琼 脂）注入平皿约15mL，并转动平血使混合均匀，同时做空白对照。 4.3.6待琼脂凝固后，翻转平板，于厌氧条件下，置36℃士1℃温箱内培养72h土3h，观察乳酸菌菌落 特征（见表1），选取菌落数在25～250之间的平板进行计数。计算后，挑取5个以上可疑菌落进行革兰 氏染色，镜检和过氧化氢酶试验。革兰氏阳性，过氧化氢酶阴性，无芽胞菌可定为乳酸菌。 2