ICS65.020.01 B 04 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3674—2020 油菜墓中莱硫烷含量的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of sulforphane in Brassica napus- Liquid chromatography-tandem mass spectrometry 2020-08-26发布 2021-01-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T3674—2020 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草 本标准由农业农村部种植业管理司提出并归口。 本标准起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、农业农村部油料产品质量安全风险评估实验室 （武汉）、农业农村部油料及制品质量监督检验测试中心 本标准主要起草人：马飞、喻理、胡小风、白艺珍、张良晓、王督、张文、李培武。 一 NY/T3674—2020 油菜中莱硫烷含量的测定 液相色谱-串联质谱法 1范围 本标准规定了油菜墓中莱硫烷含量的液相色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于油菜墓中莱硫烷含量的测定。 本标准方法莱服硫烷的检出限为0.3ug/kg，定量限为1. ig/kg 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的 仅注 口期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文 工 GB/T6682分析 3方法原理 试样中的莱丽 硫 剂分放 相色谱-串联质谱 法测定，外标法定 4试剂与材料 除另有说 6682 4.1试剂 4. 1.1 OHC 4. 1. 2 二氯甲 CH,dI GA 4.1.3 乙酸乙 H T4T·78 4.1.4 氯化钠（ 4.1.5无水硫酸 4.1.6 莱硫烷标 3纯刀 4.1.7 十八烷基键合 4.2溶液配制 4.2.1二氯甲烷十乙酸乙酯混合液（5050 50m氯甲 1.2)加50mL乙酸乙酯 （4.1.3)中，混匀。 4.2.20.01mol/L甲酸铵-甲醇溶液：取甲酸铵0.63g，加甲醇 1)900mL，超声10min溶解，加甲 醇稀释至1000mL。 4.3莱硫烷标准溶液配制 4.3.1莱硫烷标准储备溶液：精密称取10.0mg莱硫烷标准品（4.1.6），用甲醇（4.1.1)溶解，并完 全转移至10mL棕色容量瓶中，定容至刻度，配制成浓度为1.0mg/mL的标准储备溶液，一20℃以下避 光保存，有效期2个月。 4.3.2莱硫烷标准工作溶液：分别吸取一定量的标准储备溶液（4.3.1)，用甲醇（4.1.1)稀释成浓度分 别为1.0ug/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L和500μg/L的标准工作溶液。 现用现配。 5仪器和设备 5.1液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI)。 1 NY/T3674—2020 5. 2 分析天平：感量0.0001g和0.01g。 5. 3 3 组织捣碎机。 5.4涡旋振荡器。 5.5水浴锅。 5.6 氮吹仪。 5.7超声波萃取仪。 5.8 3低温冰箱：温度为一20℃以下。 5. 9 9离心机：转速为（6000土50)r/min。 5.10微孔滤膜：0.22um，有机系。 6 取样与试样保存 6.1取样 取油菜墓整棵，去根后全部处理；取后的样品将其切碎，充分混勾，用四分法取样或直接放入组织捣碎 机中捣碎成勾浆，然后立即连续完成分析过程。 6.2保存 一20℃以下保存，3个月内进行分析检测。 7分析步骤 7.1称样 称取0.50g（精确至0.01g)试样至50mL离心管中。 7.2提取 将10mL水加人离心管，涡旋1min，置于45℃水浴2h，然后加人200mg氯化钠（4.1.4)，5mL二 氯甲烷十乙酸乙酯混合液（4.2.1），涡旋1min，超声提取10min后，取出离心管，6000r/min离心5min， 转移下清液至10mL刻度试管中。残渣加5mL二氯甲烷十乙酸乙酯混合液（4.2.1)重复提取1次，合并 提取溶液，待净化。 7.3净化 吸取5mL提取液置于10mL离心管中，再加人80mg无水硫酸镁（4.1.5)和15mgCis（4.1.7），涡 旋5min，然后4500r/min离心5min，取上清液氮吹至近干，1mL甲醇复溶，过0.22μum滤膜，待测定。 7.4液相色谱串联质谱测定 7.4.1液相色谱参考条件 a) 色谱柱：Cig色谱柱（100mmX2.1mm，1.7μm），或相当者； 流动相：A为水，B为0.01mol/L甲酸铵甲醇溶液（4.2.2)； c) 流速：0.20mL/min； d) 柱温：40℃； e) 进样量：10μL。 流动相梯度洗脱程序见表1。 表1流动相梯度洗脱程序 时间，min A,% B, % 0.00 60 40 2.50 55 45 3. 00 50 50 3.50 5 95 4.00 55 45 8.00 60 40 2 NY/T3674—2020 7.4.2 质谱参考条件 a) 质谱仪：串联质谱检测器（配置电喷雾离子源）； 离子源：电喷雾离子源（ESI)； c) 电离电压：3000V； d) 离子源温度：300℃； e) 离子传输毛细管温度：275℃； ( 扫描方式：正离子扫描； g) 检测方式：选择离子监测（SRM)； h) 定性离子对、定量离子对和碰撞能量见表2。 表2莱硫烷定量离子和定性离子参考质谱条件 化合物 定量离子对 碰撞能量，cV 定性离子对 碰撞能量，cV 莱硫烷 178.05/114.10 13 178.05/72.10 20 7.4.3定性测定 并且色谱图中各组分定性离子对的相对丰度，与浓度接近标准工作液中相应定性离子对的相对丰度进行 比较，若偏差不超过表3规定的范围，则可判断为样品中存在对应的待测物。 表3定性测定时相对离子丰度的最大允许误差 单位为百分号 相对离子丰度 >50 20~50（含） 10~20（含） ≤10 允许的相对偏差 ±20 ±25 ±30 ±50 7.4.4定量测定 取莱硫烷的标准工作液与试样交替进样，采用单点或多点校准，外标法定量。当样品的上机液浓度 超过线性范围时，需根据测定浓度，稀释后进行重新测定。莱硫烷标准溶液的选择离子检测（SRM)色 谱图参见附录A。 8结果计算 样品中莱硫烷含量按式(1)计算。 cXV, W=VX (1) mXV? 式中： W 样品中莱硫烷的含量，单位为微克每千克（ug/kg）； V 提取液体积，单位为毫升（mL）； c 样液中莱硫烷的质量浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）； Vi 样液最终定容体积，单位为毫升（mL)； m 试样的质量，单位为克（g）； 用于净化的提取液体积，单位为毫升（mL）。 测定结果用2次平行测定的算术平均值表示，结果保留2位有效数字。 9精密度 在重现性条件下获得2次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的20%。 NY/T3674—2020 附录A （资料性附录） 莱硫烷标准溶液的选择离子检测(SRM)色谱图 莱硫烷标准溶液的选择离子检测（SRM)色谱图见图A.1。 响应值 100 RT:3.014 NY/T 3674-2020 全国农业食品标准 中华人民共和街 FK 农业行业标准 油菜墓中莱硫烷含量的测定液相色谱-串联质谱法 NY/T3674—2020 * 中国农业出版社出版 （北京市朝阳区麦子店街18号楼） （邮政编码：100125 网址：www.ccap.com.cn) 北京印刷一厂印刷 新华书店北京发行所发行各地新华书店经销 * * * 开本880mmX1230mm1/16 印张0.75 字数15千字 2020年12月第1版 2020年12月北京第1次印刷 书号：16109：8280 定价：18.00元 版权专有 侵权必究 NY/T3674-2020 举报电话：（010）59194261