ICS 65.020.01 B 15 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3626—2020 西瓜抗枯菱病鉴定技术规程 Technical code of practice for evaluation of watermelon resistanceto Fusariumwilt 2020-07-27发布 2020-11-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T 3626—2020 品标准 言 全国农前 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草 本标准起草单位：中国农业科学院郑州果树研究所。 本标准主要起草人：吴会杰、古勤生、彭斌、康保珊、刘丽锋， I NY/T3626—2020 西瓜抗枯萎病鉴定技术规程 1范围 本标准规定了西瓜对枯萎病（参见附录A)的抗病性评价方法。 本标准适用于西瓜抗枯萎病室内苗期抗病性鉴定。 2规范性引用文件 凡是不注日期的引用文件 NY/T1857.3 黄瓜抗枯萎病鉴定技术规利 3术语和定义 NY/T1857. 定义适 4原理 S 通过人工接种 方法将病 高低评判其抗病 性水平。 A R 5材料与方法 U 5.1材料 5.1.1病原菌 尖孢镰孢菌西爪 5.1.2品种 西瓜甜 抗病对照品种卡红感病 定品种。 对 恩材料可从国家 中期库(河南郑州) 获得。 U 5.1.3培养基 人 马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA、 马铃薯葡萄糖培养液（PDB麦粒沙培养 5.1.4其他材料 培养皿（直径大小为90mm） 250mL= 瓶、试管 子、酒精灯 脱脂棉、育苗盘等实验耗材；恒 温培养箱、超净工作台、高压灭菌锅、冰箱、可控温温室（温度保持在25℃30℃）、微波炉、电磁炉等实 验仪器。 5.2方法 5.2.1PDA培养基制备 称取洗净去皮的马铃薯200g，切成小块，加水1000mL煮沸0.5h，纱布过滤，加人琼脂粉15g，加热 彻底溶化后，再加人葡萄糖15g，搅拌均匀并溶解后，加自来水至总体积为1000mL，分装于250mL三角 瓶，121℃0.1MPa灭菌20min，随后倒人90mm培养皿备用。 5.2.2PDB培养液制备 PDA培养基（5.2.1)中不加入琼脂粉，其他成分都相同的培养基为PDB培养液。 5.2.3麦粒沙培养基制备 脱壳后的麦粒（从普通超市购买），沙粒粒径大小为1mm～3mm。煮熟的麦粒与沙粒按质量比1：2 混匀，装人250mL三角瓶或广口瓶，占瓶体积的1/3，121℃0.1MPa灭菌30min，现用现配。 1 NY/T3626—2020 5.2.4病原菌扩繁 取保存在一80℃的西瓜枯萎病菌（尖孢镰孢菌西瓜专化型1号生理小种），用PDA培养基28℃复苏2 d,待菌落长出后再转接到新的PDA培养基上生长，培养7d～10d备用。 5.2.5伤根接种法孢子悬浮液的制备 取生长旺盛的西瓜枯萎病菌菌丝，接种于PDB液体培养基中，在28℃摇床里振荡培养7d～10d后， 将振荡培养后的菌液用双层纱布过滤，去掉菌丝，滤液以3000r/min离心，去除上清液，用无菌水重悬， 用血球计数板统计病原菌孢子的数目，调至孢子悬浮液浓度为每毫升1X106个孢子，现用现配。 5.2.6鉴定材料育苗 用47%春雷霉素·王铜可湿性粉剂按1000倍加人55℃温水中浸种6h，用干净的湿纱布包好，置于 28℃催芽，待种子胚根长至0.5cm、85%的种子露白后播种。播种时，将种子轻轻放入培养钵或育苗盘， 覆盖潮土1cm，温度控制在25℃~30℃。 5.2.7土壤或基质接种法 采用PDA培养基繁殖病菌，再用麦粒沙培养基扩大培养，制备菌土，需要鉴定的品种直接播种于菌 土中，同时播种对照品种。 5.2.8伤根接种法 取3叶或4叶期生长状态一致、健壮的西瓜幼苗，用清水冲洗根部的土壤，在取苗和冲洗过程中会在 根部造成伤口，将冲洗干净带伤口的幼苗根部浸泡于浓度为每毫升1×10°个孢子的病原菌孢子悬浮液中 10min～15min，处理后的瓜苗定植于育苗钵内。设清水伤根接种为对照。 5.2.9病原菌在麦粒沙培养基中扩繁 将在PDA上生长状态旺盛的西瓜枯萎病病原菌用直径0.6cm的打孔器打取菌饼。取10块菌饼均 匀地接种到麦粒沙培养基中，28℃培养，每隔2d充分摇匀，培养10d～15d。 5.2.10菌土制备 土壤或基质采用121℃0.1MPa灭菌2h。将病原菌生长充分的麦粒沙培养基捣碎，按照2%的质量 比，与灭菌的土壤或基质充分混匀，制成土壤或基质菌土，分装至培养钵或育苗盘，现用现配。 6抗病性鉴定 6.1鉴定设计 每份待测材料重复3次，每次重复选取生长健壮、长势一致的待测材料不少于20株幼苗，用于抗病性 鉴定。 6.2接种后幼苗培养条件 两种方法接种后的鉴定材料在温室生长，温度控制在25℃30℃，正常水分管理。 7病害调查及抗病性分级 7.1病害调查 7.1.1调查时间 接种后第15d开始调查，每隔5d调查一次，直至感病对照品种发病率达80%止。 7.1.2调查方法 记录待测西瓜品种的发病情况，健株数及总株数等记人西瓜抗枯萎病鉴定调查表，计算发病率。 7.2抗病性评价 7.2.1发病率计算 根据调查数据，记录西瓜枯萎病品种抗病性鉴定调查表（参见附录B)。 按式(1)计算。 p= (1) 2 NY/T3626—2020 式中： 力一一发病率，单位为百分号(%)； b一总株数，单位为株； a一一健株数，单位为株。 7.2.2抗病性分级标准 枯萎病抗病性分级标准用发病率的高低评价。p<20%为高抗（HighResistanceHR）；20%≤p< 50%为中抗（MiddleResistance，MR)；50%≤p<80%为轻抗（SlightResistance，SR)；p≥80%为感病 (Susceptible,S)。 7.2.3鉴定有效性判别 感病对照材料p≥80%，且抗病对照材料p<20%，该批次抗枯萎病鉴定结果视为有效。 8 鉴定记录 鉴定结果报告单需要出具鉴定单位、地点及时间等，报告格式参见附录B 3 NY/T3626—2020 附录A （资料性附录） 西瓜枯萎病病原菌的信息 A.1西瓜枯萎病病原 niveum，Fon）引起的病害。病原 菌在PDA培养基上产生大量的白色棉絮状气也菌随着培养时间的延长有的病原菌产生浅紫色色 素。病原菌可产生2种类型的分生孢了具中,大型分生孢子细胞,纺锤形或镰刀形，无色，1个～5个 隔膜，以3个隔膜居多 ，无色，单胞或偶尔双 胞。西瓜枯萎病菌具 的致病力 般可 即Q号 理小 种、1号生理小种、2 号生理小种和3号 生理 人种。 理小种在我国分布范 韦最 瓜枯萎病病原菌的优势 小种。 S A.2危害症状 西瓜枯萎病是 典型的！ 传真菌病售。 苗期发病时幼苗茎基部变褐缩 垂，整株猝倒。 成株发病初期 黛早晚恢 基部，维管 R NY/T3626—2020 附录B (资料性附录） 西瓜枯萎病品种抗病性鉴定调查表 西瓜枯萎病品种抗病性鉴定调查表见表B.1。 表 B. 1 西瓜枯萎病品种抗病性鉴定调查表 接种后第15d 接种后第20d 接种后第25d 接种后第30d 接种后第35d接种后第40d抗性类别 品种 总株数 编号 名称 株 健株数 发病率 健株数 发病率 健株数 发病率 健株数 发病率 健株数 发病率 健株数 发病率 株 % 株 % 株 % 株 % 株 % 株 % 接种日期 鉴定地点 鉴定单位 单位（盖章） 年 月 日 检测人： 复核人： 年 月 日 年 月 日 5