ICS65.020.01 B 15 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3624—2020 水稻穗腐病抗性鉴定技术规程 Technical code of practice for identification of rice resistance to spikelet rot disease [Fusarium proliferatum (Matsushima) Nirenberg] 2020-07-27发布 2020-11-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T3624—2020 前 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 通 本标准由农业农村部种植业管理司提出并归口 本标准主要起草人：王玲、黄世文、刘连盟、郭荣、傅强、朱智伟。 I NY/T3624—2020 水稻穗腐病抗性鉴定技术规程 1范围 本标准规定了水稻品种、材料对水稻穗腐病抗性的鉴定方法和评价方法。 本标准适用于水稻品种、材料对水稻穗腐病的抗性鉴定和抗性评价。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件.仅注日期的版本适用于本文件。 本文件 GB4285农药安全使用标准 GB5084农田灌溉水质标准 GB/T 6682 分析实验空用水 水规格和计 GB/T8321（E 所有 部分 药合理使用准则 搜环境质 GB15618 量标准 NY/T496 肥料合理使用准则通则 肥料谷理 NY/T110 使用准则 NY/T 511 无公害 3术语和定义 下列术语和定 义适用 3. 1 水稻穗腐病 ricespikelet rot diseas 水稻穗腐病由 atum berg有性态为藤仓赤霉菌 ima ire Gibberella fujikuro 为主要致病菌，侵染稻穗后起的 稻穗部枯死症状的 真菌病害。水稻穗腐病 椭圆形小斑点，后逐渐 扩大至谷粒大部或全部 染病谷粒初期为红褐色或铁锈色，后逐渐变成黄褐色或褐色，水稻成熟时变成黑 褐色，局部病穗伴有灰白色霉屋 3. 2 分离物isolate 从发病部位通过人工培养、纯化、再接种和分离等方法获得的病原菌培养物。 3.3 致病力pathogenicity 病原物所具有的破坏寄主和引起病变的能力。 3. 4 剑叶叶枕距 flagleafpulvinusinterval 水稻剑叶从倒二叶的叶鞘中抽出后，剑叶叶枕与倒二叶叶枕之间的距离。剑叶叶枕高于倒二叶叶枕 时，为正叶枕距；剑叶叶枕低于倒二叶叶枕时，为负叶枕距， 3.5 花粉内容充实期 pollenfillingstage 花粉母细胞减数分裂完成后，四分体分散并随即变成小球形的花粉粒，花粉外壳逐渐形成，体积继续 NY/T3624—2020 增大，出现花粉发芽孔，花粉内容逐渐充实，直到内容物充满之前，为花粉内容充实期。此时内外纵向伸 长接近停止，横向则迅速增大。雄蕊和雌蕊迅速增长，柱头上依次出现羽状突起，而颖片退化。 4试剂与材料 本标准所用试剂在未加说明时均采用分析纯试剂。实验室用水应符合GB/T6682中规定的三级水 要求。 4.1PDA培养基 马铃薯200g，洗净去皮切碎，加水煮沸20min，纱布过滤，加人葡萄糖20g和琼脂20g，用水定容至 1000mL，搅拌均匀，高压灭菌（121℃，20min）。 4.2YEPD培养基 酵母提取物5g、蛋白陈10g、葡萄糖20g，用水定容至1000mL，搅拌均匀，高压灭菌（121℃，20min)。 5仪器设备 5.1超净工作台 洁净等级：100级@≥0.5μm，平均风速：0.25m/s~0.6m/s。 5.2高压灭菌锅 温度范围：0℃~135℃，灭菌时间范围：4min~120min，最高工作压力：0.22MPa~0.25MPa。 5.3恒温培养箱 温度范围：0℃~50℃，温度波动：±1℃，光照度：01x~75001x。 5.4振荡摇床 温度范围：0℃~50℃，温度波动：士1℃，振动频率：0r/min~300r/min，振动幅度：20mm 5.5光学显微镜 目镜：10×；物镜：10×、40×。 5.6电子天平：感量0.01g。 5.7医用注射器：10mL。 6接种体制备 6.1病原菌分离与鉴定 从发病稻穗上切取病组织，用常规组织分离法获得分离物。分离物的鉴定见附录A。确认为层出镰 刀菌[Fusariumproliferatum(Matsushima)Nirenberg，有性态：Gibberellafujikuroi（Sawanda)Wollen- weber]后，采用单孢分离法进行病原菌菌株纯化，经科赫法则（Koch'spostulates)验证后，保存备用。 6.2病原菌保存 将层出镰刀菌菌株接种于PDA斜面培养基上，28℃下培养7d，置4℃冰箱内保存；或在斜面上加一 层灭菌矿物油（超过斜面顶部1cm)后，置于冰箱或室温保存。 6.3接种体选择 根据试验需要选取附录B的鉴别菌株或当地致病力强的菌株作为接种体。 6.4接种体准备 将接种菌株转接于PDA平板培养基上，置于恒温培养箱28℃培养3d后，自菌落边缘切取菌饼，接种 于100mL的YEPD培养基，在振荡摇床中180r/min、28℃培养3d，过滤菌丝，用灭菌的三级水配成浓度 为5×105个/mL的分生孢子悬浮液，作为接种体以备用。 7水稻穗腐病抗性鉴定 7.1鉴定病圃 2 NY/T3624—2020 7.1.1鉴定圃选择 鉴定圃应设置在水稻穗腐病适发区。土壤肥力水平中等偏上，肥力均匀，排灌方便，地势平坦较低洼， 具备良好的自然发病条件。土壤环境质量应符合GB15618中二级标准的要求，田间灌溉用水水质应符 合GB5084的要求。 7.1.2田间管理 肥料施用应符合NY/T496、NY/T1105的规定。农药使用应符合GB4285、GB/T8321的规定。按 当地大田生产习惯对虫、草害进行防治，应及时采取有效的防护措施防治鼠、鸟、畜、禽等对试验的危害。 鉴定材料在全生育期内不使用杀菌剂，接种前后避免施用任何药剂。 7.2鉴定材料的种植 7.2.1种子质量 一级种标准，不应带检疫性病虫。 7.2.2种植要求 RD 鉴定材料播种时间 与大田生产播种时间相同或运 以使植株接种期和发 当调整 病期能够与适宜水稻 穗腐病发生流行的气候条件(温度25 33 相对湿 以 材料经浸种催芽后， 播于 田间秩板 国育苗。待秧龄25d 5117 的规定进行移裁。 同一组试验同期移 裁 移栽后应及早进行个苗补缺。 7.2.3鉴定设计 S S 鉴定材料随机排列或顺序排列：每份鉴定材料重复3次每 重复栽植 定材料设附录C 已知抗病和感病对照材料，成设当地种植的抗病品种和感病品种作为对照。 7.2.4保护行设置 在鉴定材料四周种植 的保护行品种，株行距与鉴定材料相同 病的对照品种 7.3接种 7.3.1接种时期 接种时期为水稚 剑叶叶枕距2cm8cm（该时期为幼穗 惠发育的花粉内容 接种时间选择在伤 晚进行。 R 7.3.2接种方法 接种采用穗苞注射法 穗尖溢出为宜。每份鉴定材料重复3次，每重复接种10株：每株工穗并保证接种稻穗的生育进程基本一致。 7.3.3接种前后的田间管理 接种前后使田间保持正常栽培稻的水层：接种后若遇持续高温千旱，应及时进行田间灌溉，保证病害 发生所需条件的满足。 7.4病情调查 7.4.1调查时间 在水稻进入蜡熟期进行调查。 7.4.2调查与记载 观测鉴定材料的发病情况，根据病害症状描述，逐份材料进行调查，记载每个接种稻穗全部谷粒的病 情严重度，原始数据记载参见附录D的表D.1。 7.4.3水稻穗腐病病情级别划分 依据鉴定材料稻穗上谷粒的发病程度，进行病情分级，病情级别及其对应的症状描述见表1。 3 NY/T3624—2020 表1水稻穗腐病病情级别划分 病情级别 症状描述 0 谷粒子上无病斑 1 谷粒上有零星病斑，发病面积占谷粒面积的0.1%~10.0% 3 谷粒上有少量病斑，发病面积占谷粒面积的10.1%～25.0% 5 谷粒上有大量病斑，发病面积占谷粒面积的25.1%～50.0% 7 谷粒上病斑相连，发病面积占谷粒面积的50.1%～75.0% 9 谷粒上基本为病斑覆盖，发病面积占谷粒面积的>75.1% 7.5病情记载 根据病情症状描述，记载病情级别，计算每穗病情指数(DI)，统计每份鉴定材料的病情指数（DI）。 病情指数按式(1)计算。 (Bi × Bd) DI: X 100 MxMd (1) 式中： DI- 病情指数； Bi- 各病情级别的谷粒数，单位为粒每穗； Bd- 各病情级别的代表数值； M- -调查总谷粒数，单位为粒每穗； Md- 最高病情级别的代表数值（此处为9）。 7.6抗病性评价 7.6.1抗病性评价标准 依据鉴定材料3次重复的病情指数平均值确定其对水稻穗腐病的抗性水平，划分标准见表2。 表2水稻穗腐病抗性评价标准 病情指数(DI) 抗性评价 DI = 0 免疫(I) 0. 0<DI ≤10. 0 高抗(HR) 10. 0< DI ≤ 20. 0 抗病(R) 20. 0< DI ≤ 30. 0 中抗(MR) 30.0< DI≤50.0 中感(MS) 50. 0< DI ≤ 70. 0 感病(S) 70. 0< DI≤100. 0 高感(HS) 7.6.2抗病鉴定有效性判别 当鉴定圃中感病对照品种病情指数（DI)大于50时，该批次水稻穗腐病抗性鉴定视为有效。 7.6.3重复鉴定 初次鉴定中表现为抗、中抗、中感的材料，翌年用相同的病原菌进行重复鉴定。当年度间或批次间鉴 定结果不一致时，通常以最高病情指数为准。经2年～3年重复鉴定