ICS65.020 B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 35712020 芦笋茎枯病抗性鉴定技术规程 Technical code of practice for resistance identification on asparagus stem blight 2020-03-20发布 2020-07-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T3571—2020 前 本标准由农业农村部种植业管理司提出并归石 本标准起草单位：江西省农业科学院植物保护研究所、中国热带农业科学院环境与植物保护研究所、 江西省植保植检局、中华人民共和国黄岛海关。 本标准主要起草人：李湘民、杨迎青、兰波、钟玲、易克贤、陈建、孙强、陈洪凡、张顺梁 I NY/T3571—2020 芦笋茎枯病抗性鉴定技术规程 1范围 本标准规定了芦笋抗茎枯病（asparagusstemblight）病原物接种体制备、抗病性鉴定和抗性评价标准。 本标准适用于芦笋品种及种质资源对茎枯病抗性鉴定。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2. 1 芦笋茎枯病asparagus stemblight 芦笋茎枯病是由天门冬拟茎点霉[Phomopsisasparagi（Sacc.）Bubak」引起的一种真菌病害，其病 原特征参见附录A。 2. 2 接种体inoculum 用于人工接种鉴定用的能够侵染芦笋并引起茎枯病的天门冬拟茎点霉(P.asparagi)分生孢子悬浮液。 2. 3 人工接种artificialinoculation 在适宜发病条件下，通过人工操作将人工繁殖的接种体接种于植物体适当部位的过程。 2. 4 病情指数diseaseindex 将发病率与严重程度结合起来，全面反映病害发生程度的综合指标。 2. 5 抗性评价resistanceevaluation 根据采用的技术标准判别植物寄主对特定病害反应程度和抵抗水平的描述。 3病原物接种体制备 3.1病原物分离 将采集的芦笋茎枯病新鲜标本，采用组织分离法分离病部的茎枯病菌，用PDA培养基进行纯化培 养，保存在培养基斜面试管中备用，PDA培养基具体配制和使用方法参见附录B。 3.2接种体制备 病原菌在含PDA培养基试管里半天光照下培养7d～10d,转接到含PDA培养基的培养血平板上同 样条件下扩大培养5d～8d，然后在全天黑光灯下光照培养8d～12d。用无菌水洗下孢子，将接种孢子 液用0.1%吐温-20调至每毫升1×10°个备用。以上菌株培养及产孢均在25℃～28℃下进行。 3.3病原菌保存 采用芦笋组织保存法。将直径为5mm的菌块5块，接人高压灭菌的装有芦笋组织的三角瓶中（将芦 笋的茎秆基部切成5mm×5mm的方块），在25℃～28℃下培养7d~10d后，分装于160℃干热灭菌的 牛皮纸内，封口。 4抗病性鉴定 4.1芦笋苗的培育 4.1.1培养钵的准备 1 NY/T 3571—2020 芦笋栽培土于160℃干热灭菌120min。冷却至室温后，填充进培养钵中。 4.1.2播种 芦笋种子催芽后播于培养钵中，每品种设5个重复，每重复播10钵，每钵播3粒种子。 4.1.3栽培管理 5℃28℃温室内自然光照下栽培，每天早上、傍晚各浇水1次。接种前检查苗情，应保持苗情健壮。 4.2接种和保湿培养 4.2.1接种 待芦笋苗长至15cm～18cm高，用配置好的孢子液（参见3.2)进行人工喷雾接种。 4.2.2保湿培养 在25℃~28℃、90%~100%相对湿度下暗箱培养 2d，之后在自然光照下的温室内继续生长8d～10 d,至感病对照充分发病后进行病情调查 P 4.3病情分级 RD 病情分级及其对应的症状描述见 ND 病情级别 0 症状反应案 1 TURAL 病面积一株冠植株主茎及侧枝面积的 3 10%株冠植保主鉴及侧枝面积 二发病面积 5 30%株冠植株主医及侧枝面积发病面积50株冠植株 发病面积 4.4病情调查 按照表 的 分级标 参见附录C。 4.5病情指数 按式(1)计 算 式中： DI 病情指娄 各病情级别的代表数值 n 各病情级别的植 株数，单 N 调查总株数，单 S 最高病情级别的代表数 5 抗性评价 统计同一品种不同重复的鉴定结果，计算出平均病情指数。以下评价标准适用于芦笋茎枯病抗性鉴 定与品种抗性评价，具体评价标准见表2。 表2 芦笋茎枯病抗性评价标准 病情指数 抗感等级 代码 <20 抗病 R 20.1~40 中抗 MR 40.1~60 中感 MS >60 感病 S 2 NY/T3571—2020 附录A (资料性附录) 芦笋茎枯病病原 A.1病原物 天门冬拟茎点霉（P.asparagi）属丝分孢子真菌拟茎点霉属真菌。 A.2 形态描述 分生孢子器形成于子座中，单生或2个～3个聚生，扁球形至近三角形，黑色，孔口突出，近孔口处壁厚。 分生孢子角乳白色，α型分生孢子长椭圆形至梭形，无色，单胞，两端各具1油球，大小范围（7.5～10.0)μm× (2.5~3.0)μm。β型分生孢子主要为线形，亦有钩形和波浪形的，大小范围（17.5～26.0)μm×（1.0～2.0) μm。中间类型孢子大小范围为（12.0~17.0）μm×（2.5～4.5）μm。400×镜下分生孢子显微图像见图 A.1。 注：A.α型分生孢子；B.β型分生孢子。 图A.1400×镜下分生孢子显微图像 NY/T3571—2020 附录B (资料性附录) PDA培养基的制备和使用方法 B.1制备方法 去皮马铃薯200g，切小块煮沸30min过滤。取滤液，放人煮锅中，加琼脂18g，煮至透明，然后加人 葡萄糖20g，调节pH6.5,补足水至1000mL。分装到三角瓶中，加塞子密封，121℃高压灭菌30min B. 2 使用方法 将灭过菌的装有PDA培养基的三角瓶置于微波炉中融化，然后按10mL每个的量倒入9cm直径的 Petri培养皿中，冷却后，用接种针接人菌丝块。 4 NY/T3571—2020 附录 (资料性附录） 病情调查记载表 病情调查记载表见表C.1。 表 C.1 病情调查记载表 病情分级 处理 重复 总株数 0 1 3 5 7 1 2 3 4 5 1 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 5