ICS 65.020.20 B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3568—2020 小麦品种抗禾谷孢囊线虫鉴定技术规程 Technical code of practice for resistance evaluation of wheat to cereal cyst nematode(Heterodera avenae) 2020-03-20发布 2020-07-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T3568—2020 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起章。 本标准由农业农村部种植业管理司提出并归口。 本标准起草单位：中国农业科学院植物保护研究所。 本标准起草人：彭德良、彭焕、黄文坤、孔令安， NY/T3568—2020 小麦品种抗禾谷孢囊线虫鉴定技术规程 1范围 本标准规定了小麦品种抗禾谷孢囊线虫的术语和定义、材料和设备、室内盆栽人工接种鉴定法、抗性 评价、鉴定记录。 本标准适用于小麦种质资源和品种对禾 抱线中的 亢性鉴定和评价，大麦、燕麦和黑麦等抗禾谷孢 囊线虫鉴定可参照执行。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本 2. 1 禾谷孢囊线虫 危害小麦、大麦 麦等作物抱囊线 一种属于垫刃目 Tylenchic Iyl lenchina异皮线虫 多等症 科Heteroderida eterodera 引起叶 化生长矮小须根 见附录A。 S SEARCI 2. 2 抗线虫性 nen matode re esistance 植物所具 有的 内能够减轻或克服植物线虫致病和繁殖的可遗传性状 2. 3 R 感病对照 scepuible control 为检验试验的 有效性在品种 的品科 附加的在 本标准采用温麦 19作为感病对 2. 4 抗性评价 istance evaluation 根据采用的技术标 标准判别 2.5 G 孢囊cyst 孢囊类线虫发育过程中的特殊阶段 是雌虫死广后形成的褐色虫体 3材料和设备 3.1[ 圆管：直径为4cm、长度为20 3.2标准筛网：孔径为0.9mm、0.2mm和0.0308mm。 3.3体视显微镜：放大倍数为10倍～120倍。 3.4光照培养箱。 4室内盆栽人工接种鉴定法 4.1 孢囊线虫接种体准备 分离孢囊，方法参见附录B。将孢囊在4℃下放置6周～8周，加少量水后转人16℃孵化，收集二龄幼 虫，配制成每毫升300条线虫的悬浮液，4℃条件下保存备用，保存时间不应超过1周。 4.2播种催芽 将细沙和壤土按照体积比7：3混匀后，180℃干热灭菌3h，装人圆管中。种子表面消毒后，在无菌 滤纸上保湿催芽，根系长度为1cm～2cm时移栽。 1 NY/T3568—2020 4.3接种培养 将1粒萌发的种子点播于装有灭菌土的圆管中，在根尖处滴加300头二龄幼虫，覆土1cm～2cm，以 后每3d接种1次，每管累计接种900头。每个待鉴定品种接种10株，重复3次。置于光照培养箱中，16 h光照、8h黑暗，16℃培养15d后，温度调至22℃继续培养45d。感病对照按相同的方法接种培养。 4.4调查 培养完成后，收集单株根系的白雌虫和分离土壤中的孢囊，体视显微镜下分别计数，填写鉴定调查记 录表，表格参见附录C。 5抗性评价 5.1有效性判别 感病对照中白雌虫与孢囊总数目大于30个，本批次抗性鉴定结果有效。 5.2抗性鉴定分级 逐株调查白雌虫和孢囊总数目（N)，计算平均数，按照表1进行分级。 表1小麦品种抗孢囊线虫的抗性判别标准 抗性水平 判别标准，个 免疫(M) N=0 高抗(HR) >N>0 抗病(R) 5<N10 感病(S) 10<N30 高感(HS) N>30 鉴定记录 详细记录调查方法和鉴定过程，鉴定结果填人鉴定调查记录表，并存档。表格参见附录C。 2 NY/T3568—2020 附录A （资料性附录） 禾谷孢囊线虫 A.1分类地位 禾谷孢囊线虫（Heteroderaavenae）：垫刃目Tylenchida垫刃亚目Tylenchina异皮线虫科Heterode ridae异皮线虫属Heterodera。 A.2形态特征 孢囊：柠檬形，褐色至黑褐色，颈较长，阴门锥突出。双膜孔，近圆形。泡状突较多，形状不规则，排列 不整齐。无下桥。 雌虫：雌虫阔柠檬形，体长550μm～750μm，宽300μm～600μm；头部环纹，并有6个圆形的唇片， 口针平均长为26m；当其老化变成为孢囊时脱掉一层浅色的亚结晶膜，形状大小与雌成虫基本相同，阴 门膜孔为双膜孔，无下桥，泡状突排列不规则。 雄虫：线形，体环清楚，侧线4条，长约1400μm，口针长26μm～29μm，基部圆形。交合刺弓形，腹 面有1中等大小的凸缘和1具缺刻的末端，两者形成1长的窄管。引带简单，稍弯曲。尾末端通常卷曲。 二龄幼虫：线形，体环清楚。侧线4条。唇区较高，前端圆，缢缩较明显。一般2个唇环（少数3个）。 口针强壮，基球大，前缘平或稍凹。中食道球卵形，距前端70μm～88μm，背食道腺开口到口针末端距离 为5μm～7μm。尾圆锥形，后部有较长的透明区，末端稍钝。 A.3危害症状 受侵染的小麦田间症状表现为：植株瘦小，绿叶泛黄发白，无光泽；底部叶片边缘发黄，叶脉淡绿，严重 者萎焉死亡；分较少或不分檗，麦苗稀疏；与植物缺肥、缺水等营养不良的症状相似。同时，受侵染的根 部组织严重损伤，主根严重退化，侧根增多，从而加剧了缺水、缺肥和营养供给不足。受侵染的小麦根部侧 根丛生，通常呈“乱麻状”或“钢丝球”状。在小麦的抽穗期和扬花期，根系上清晰可见白色孢囊。 3 NY/T3568—2020 附录B (资料性附录） 禾谷孢囊线虫的分离方法 B.1离心法分离大量孢囊 B.1.1将1kg土壤加水5L充分浸泡和搅拌使孢囊漂浮，停止搅拌后，静置30s～60s。 B.1.2将桶上层的悬浮液经过0.9mm筛网倾倒人0 m筛网中，用强水流冲洗0.9mm筛网上的残 渣，收集0.2mm筛网上的粗样品 B.1.3取适量的粗样 加水至100mL刻度线，配平 后，放置于离心机中 500 /min水平 心 min, 小心倒掉上清 B.1.4加人浓度为 50 的煎糖泽 液重 悬浮后，700r/min高 子含有孢囊的上清液倒在 0.2mm筛网上， 宜复 重悬离心 B. 2 漂浮法分离土壤中狗囊 B.2.1待分离土样风于后 充分混匀后200土壤加水5 充分浸泡和搅拌 停止搅拌后， A 静置30s~60 R B.2.2将桶 上层的悬浮汽 gmm筛网倾倒人 2mm筛网：用强水流冲 mm筛网上的残 渣，收集0.2mm 帝网上的粗样 B.2.3冲洗 nm筛 铺车 CENTER 本视显微镜下 观察和计数。 NY/T3568—2020 附录C （资料性附录） 鉴定调查记录表 C. 1 鉴定调查记录表 见表C.1。 表C.1 鉴定调查记录表 播种日期： 年 月 日 调查日期： 年 月 日 根系孢囊数，个 品种编号 平均孢囊数，个 抗性评价 重复 2 3 4 5 6 10 I 品种1 IⅡI II I 品种2 II II I .. II II I II II I 感病 II 对照 鉴定人： 记录人： 5